{"product_id":"neb-e7805l","title":"نيو إنجلاند بيولابس، E7805L، مجموعة تحضير مكتبة الحمض النووي NEBNext® Ultra™ II FS لتقنية Illumina®","description":"\u003cb\u003eالفئات ذات الصلة:\u003c\/b\u003e تجزئة الحمض النووي DNA وتجزئة الحمض النووي الريبي RNA، تحضير مكتبة الحمض النووي DNA لتقنية Illumina، أتمتة تحضير مكتبة NEBNext® NGS. المواد المطلوبة \u003cb\u003e(\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eغير متوفرة\u003c\/b\u003e ): 80% إيثانول (مُحضر حديثًا)، ماء خالٍ من النيوكلياز، 0.2 مل أنابيب PCR ذات جدار رقيق، أوليغومرات NEBNext أحادية أو متعددة لتقنية Illumina (NEB #E7350، #E7335، #E7500، #E6609، #E7710، #E7730 أو #E7600)، حامل أو صفيحة مغناطيسية (مثل حامل الفصل المغناطيسي NEBNext® (NEB #S1515S)، أو صفيحة Alpaqua® 96S المغناطيسية الفائقة (#A001322)، أو ما يعادلها)، جهاز PCR، جهاز طرد مركزي دقيق دوامي. لـ NEB #E7805 فقط: مجموعة كواشف SPRIselect® (Beckman Coulter, Inc.). #B23317) أو خرز AMPure® XP (Beckman Coulter, Inc. #A63881) اختياري: 10 ملي مولار Tris-HCl، درجة الحموضة 8.0 مع 10 ملي مولار NaCl (لتخفيف مُحَوِّل إدخال الحمض النووي \u0026lt; 100 نانوغرام) \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: عند تحضير العينات باستخدام مجموعة NEBNext Ultra II FS لتحضير مكتبة الحمض النووي، هل يمكن أن يكون الحمض النووي المُدخل في محاليل تحتوي على EDTA؟ ج: نعم، نوصي بأن يكون الحمض النووي في محلول TE بتركيز 1X أو محلول TE منخفض التركيز يحتوي على EDTA. يمكن أيضًا أن يكون الحمض النووي في محلول Tris بتركيز 10 ملي مولار ودرجة حموضة 7.0-8.0 أو في الماء. س: ماذا أفعل إذا رأيت راسبًا في محلول التفاعل Ultra II FS؟ ج: من الشائع رؤية ترسب في محلول التفاعل Ultra II FS. في حال حدوث ذلك، قم بسحب المحلول المنظم عدة مرات باستخدام الماصة لتفتيت الراسب، ثم قم برجّه سريعًا باستخدام جهاز الخلط الدوامي. قد تلاحظ وجود كمية صغيرة من الراسب، لكن هذا لن يؤثر على الأداء. س: هل يمكن حفظ التفاعلات عند درجة حرارة 4 درجات مئوية بعد خطوات التجزئة وتحضير الأطراف في سير عمل NEBNext Ultra II FS؟ ج: نعم، يمكن حفظ الحمض النووي المجزأ والمُحضر الأطراف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لعدة ساعات دون أي تأثير ملحوظ. مع ذلك، بعد التخزين طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، يُتوقع انخفاض في المردود بنسبة 20% تقريبًا. س: هل أحتاج حقًا إلى رجّ مزيج إنزيم Ultra II FS باستخدام جهاز الخلط الدوامي؟ ج: نعم، قد يؤدي عدم رجّ مزيج إنزيم Ultra II FS إلى نتائج متغيرة. س: ما نوع وكمية المادة الأولية التي أحتاجها عند تحضير المكتبات باستخدام مجموعة تحضير مكتبات الحمض النووي NEBNext Ultra II FS؟ ج: هذه المجموعة مناسبة لكمية تتراوح بين 100 بيكوغرام و0.5 ميكروغرام من الحمض النووي السليم. س: هل يمكنني استخدام مجموعة تحضير مكتبات الحمض النووي NEBNext Ultra II FS لتحويل البيسلفيت وتقنية EMSeq؟ ج: لا، مجموعة Ultra II FS غير متوافقة مع تحويل البيسلفيت أو تقنية EMSeq. نوصي باستخدام القص الميكانيكي ومجموعة تحضير مكتبات الحمض النووي NEBNext Ultra II (NEB #E7645) لهذا التطبيق. س: تفاعل الربط لزج للغاية. ماذا سيحدث إذا لم يتم خلطه جيدًا؟ ج: إذا لم يتم خلط تفاعل الربط جيدًا، فقد ينتج عنه كمية قليلة من المكتبة. لضمان الخلط الجيد، يمكن سحب المحلول وإعادة وضعه باستخدام الماصة 10 مرات، أو رجه باستخدام جهاز الخلط الدوامي لمدة 3 ثوانٍ. س: هل يمكنني استخدام مجموعة تحضير مكتبات الحمض النووي NEBNext Ultra II FS لتحضير المكتبات للتسلسل على أجهزة تسلسل Ion Torrent؟ ج: لا، المحولات المطلوبة لتسلسل Ion Torrent ذات نهايات غير لاصقة وليست ذات نهايات بارزة 5'-T، وهي غير متوافقة مع سير عمل Ultra II FS. س: ما هو تركيز بادئات الفهرسة؟ ج: تركيز بادئات فهرسة NEBNext هو 10 ميكرومتر. س: هل يمكنني استخدام مجموعة NEBNext هذه مع محولات وبادئات من موردين آخرين غير NEB؟ ج: نعم، من الممكن استخدام محولات وبادئات من موردين آخرين غير NEB مع مجموعة NEBNext هذه. يجب أن يكون المحول من نوع T البارز، وقد يكون ناتج المكتبة النهائي أقل قليلاً من استخدام محولات NEBNext الخاصة بـ Illumina®. يمكن الاطلاع على تعليمات الاستخدام مع محولات غير NEBNext كاملة الطول ذات الترميز الشريطي وبادئات P5 وP7 العالمية لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في كتيبات محولات NEBNext المفهرسة\/UMI. يمكنكم العثور على هذه الأدلة على الرابط neb.com\/E7416 (RNA) أو neb.com\/E7395 (DNA). اختاروا دليل مجموعة NEBNext التي ستستخدمونها. كُتبت هذه الأدلة خصيصًا لمحولات NEBNext المفهرسة\/UMI، وينبغي أن يعمل البروتوكول نفسه مع محولات أخرى ذات تصميم مشابه. نوصي بإجراء تجربة أولية باستخدام مجموعة تحضير المكتبة والمحولات المفهرسة المطلوبة، مع استخدام عينات قابلة للاستهلاك لتحسين ظروف التجربة. سؤال: هل يحتوي كاشف التجزئة المضمن في مجموعات NEBNext Ultra® II FS DNA على إنزيم NEBNext dsDNA Fragmentase®؟ جواب: لا، تحتوي منتجات Ultra II FS (نظام التجزئة) على مزيج فريد من الإنزيمات التي تُجزئ الحمض النووي، وتُصلح نهاياته، وتُضيف ذيل dA، في أنبوب واحد. إنزيم Fragmentase غير مُضمن في مزيج إنزيمات FS. س: هل مجموعة تحضير مكتبة الحمض النووي NEBNext® Ultra™ II FS لتقنية Illumina® متوافقة مع جميع أنواع العينات؟ ج: تم اختبار مجموعة تحضير مكتبة الحمض النووي NEBNext® Ultra™ II FS لتقنية Illumina® في العديد من تطبيقات التسلسل، بما في ذلك تسلسل الجينوم الكامل، والتقاط التهجين، وتسلسل الأمبليكون، وتقييم عدد النسخ، وغيرها. صُممت هذه المجموعة لزيادة عدد الجزيئات المُدمجة في مكتبة التسلسل إلى أقصى حد. ونتيجةً لذلك، تُنتج هذه الطريقة مكتبات متنوعة حتى من كميات صغيرة جدًا من الحمض النووي المُدخل (أقل من 1 نانوغرام). يُرجى مراعاة ما يلي: يمكن استبدال التعديلات الموجودة في الحمض النووي المُدخل، مثل المثيلة والهيدروكسي مثيلة، بصيغتها الأصلية عند استخدام تقنية FS. لا يُنصح باستخدام هذه الطريقة في التطبيقات التي تُدرس فيها القواعد المُعدلة (مثل تسلسل EM-seq وتسلسل البيسلفيت). عند الترددات المنخفضة جدًا (عادةً أقل من 0.1%)، قد يُدخل تحليل FS تشوهاتٍ تُعرف باسم التسلسلات الهجينة أو القراءات المتتالية في التحليل اللاحق. يمكن تصفية هذه التشوهات باستخدام fgbio FindSwitchbackReads. بالنسبة لعينات FFPE، لاحظنا زيادةً في التشويش في بعض مكتبات FS. مع ذلك، ونظرًا لتنوع تلف FFPE، لا يمكن التنبؤ بالعينات التي ستُظهر تشويشًا أعلى. للحصول على أفضل جودة للبيانات، نوصي باستخدام مجموعة NEBNext Ultrashear FFPE DNA Library Prep Kit (NEB #E6655) أو مجموعة NEBNext FFPE DNA Library Prep Kit (NEB #E6650). نشجع المستخدمين على تقييم أي طريقة لتحضير المكتبة بعناية للتأكد من ملاءمتها لنوع العينة المحدد قيد الدراسة. يُرجى التواصل عبر البريد الإلكتروني info@neb.com في حال وجود أي استفسارات حول تطبيقكم المحدد. س: هل تتضمن المجموعة محولًا وبادئات؟ ج: لا. يمكن استخدام المجموعة مع NEBNext Multiplex Oligos for Illumina. للاطلاع على القائمة الكاملة، راجع مخطط اختيار أوليغومرات NEBNext® المتعددة. لاستخدامها مع مجموعات تحضير مكتبات NEBNext، راجع دليل مجموعة تحضير المكتبات. تحتوي الأدلة الخاصة بمجموعات أوليغومرات المتعددة أيضًا على نصائح لإعداد تفاعلات PCR. للاطلاع على خيارات موازنة الألوان، يُرجى مراجعة مُحدد أوليغومرات NEBNext® Index للاطلاع على تركيبات الباركود الصالحة.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835516211369,"sku":"E7805L","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-e7805l","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}