{"product_id":"neb-m0315s","title":"نيو إنجلاند بيولابس، M0315S، ناقل طرفي","description":"يحفز إنزيم ناقل الطرفية إضافة ديوكسي نيوكليوتيدات إلى الطرف الهيدروكسيلي 3' لجزيئات الحمض النووي. \u003cb\u003eالتصنيفات ذات الصلة:\u003c\/b\u003e وسم الحمض النووي، \u003cb\u003eتطبيقات\u003c\/b\u003e معالجة الحمض النووي، إضافة ذيل الأدينين، \u003cb\u003eمواصفات تفاعل\u003c\/b\u003e البوليميراز المتسلسل (PCR). \u003cb\u003eتعريف الوحدة:\u003c\/b\u003e تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم التي تحفز دمج 1 نانومول من dTTP في مادة غير قابلة للذوبان في الأحماض في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر خلال ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية باستخدام d(A) 18 كبادئ. \u003cb\u003eشروط التفاعل:\u003c\/b\u003e عبوة واحدة من محلول تفاعل ناقل الطرفية، مضاف إليها 0.25 ملي مول من كلوريد الكوبالت، حضن عند 37 درجة مئوية. عبوة واحدة من محلول تفاعل ناقل الطرفية، 50 ملي مول من أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مول من أسيتات التريس، 10 ملي مول من أسيتات المغنيسيوم (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). \u003cb\u003eمحلول التخزين:\u003c\/b\u003e 50 ملي مول من فوسفات البوتاسيوم، 100 ملي مول من كلوريد الصوديوم، 1.43 ملي مول من بيتا-ميركابتوإيثانول، 50% جلسرين، 0.1% تريتون إكس-100، الأس الهيدروجيني 7.3 عند 25 درجة مئوية. \u003cb\u003eالتثبيط الحراري:\u003c\/b\u003e 75 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. \u003cb\u003eالوزن الجزيئي\u003c\/b\u003e النظري: 58000 دالتون. \u003cb\u003eإكسونوكلياز 5' - 3': لا. إكسونوكلياز\u003c\/b\u003e \u003cb\u003e3' - 5':\u003c\/b\u003e لا. \u003cb\u003eإزاحة السلسلة\u003c\/b\u003e : لا. \u003cb\u003eشروط فحص الوحدة\u003c\/b\u003e : عبوة واحدة من محلول تفاعل ناقل الطرفية، 0.72 μM d(A) 18، 0.2 ملي مولار dTTP، و1 ميكروكوري [3H]- dTTP في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: هل يمكن تعطيل إنزيم ناقل الطرفية بالحرارة؟ ج: نعم، سخّنه إلى 75 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. بدلاً من ذلك، يمكن إيقاف التفاعلات بإضافة 10 ميكرولتر من EDTA بتركيز 0.2 مولار. س: هل يمكن لإنزيم ناقل الطرفية وسم الطرف 5' من الحمض النووي؟ ج: لا. استخدم إنزيم T4 بولينوكليوتيد كيناز (NEB# M0201) لوسم الطرف 5'. س: هل يُزوّد ​​إنزيم ناقل الطرفية مع dNTPs؟ ج: لا، يجب طلب dNTPs بشكل منفصل. يمكن طلبها كمجموعة من 4 أنابيب فردية، مجموعة محلول ديوكسي نيوكليوتيد (NEB# N0446) بتركيز 100 ملي مولار لكل نيوكليوتيد. س: هل يتطلب إنزيم ناقل الطرفية أيون الكوبالت (Co2+) كأيون ثنائي التكافؤ؟ ج: يزيد أيون الكوبالت (Co2+) من دمج البيريميدينات (مانياتيس)، ويجعل الإضافة إلى النهايات غير المتداخلة والنهايات المتراجعة 3' أكثر كفاءة (البروتوكولات الحالية). س: هل يمكن إضافة نيوكليوتيد واحد فقط (dNTP) إلى نهاية الحمض النووي باستخدام إنزيم ناقل الطرفية؟ ج: نعم، يمكن إضافة نيوكليوتيد واحد عن طريق دمج نظير إنهاء السلسلة مثل ثنائي ديوكسي نيوكليوتيد (ddATP). س: هل يفضل إنزيم ناقل الطرفية نوعًا معينًا من نهايات الحمض النووي 3'؟ ج: إضافة النيوكليوتيدات (dNTPs) إلى النهايات البارزة 3' OH أكثر كفاءة من إضافتها إلى النهايات المتراجعة 3' OH أو النهايات غير المتداخلة. س: ما هي قيم kM لإنزيم ناقل الطرفية؟ ج: * 100 ميكرومولار لـ dATP * 100 ميكرومولار لـ dTTP * 500 ميكرومولار لـ dCTP * 500 ميكرومولار لـ dGTP * 1 ميكرومولار للأوليغومرات * 1 مليمولار لنهايات البادئات المتجانسة. س: هل سيضيف إنزيم النقل الطرفي نيوكليوتيدًا ثلاثي الفوسفات غير موسوم إشعاعيًا؟ ج: نعم، سيدمج إنزيم النقل الطرفي النيوكليوتيدات المبيوتينية.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835480690857,"sku":"M0315S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-m0315s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}