{"product_id":"neb-m0439l","title":"نيو إنجلاند بيولابس، M0439L، WarmStart® RTx Reverse Transcriptase (خالي من الجلسرين)","description":"\u003cb\u003eالفئات ذات الصلة:\u003c\/b\u003e تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) وإنزيمات النسخ العكسي، التضخيم متساوي الحرارة وإزاحة السلسلة، تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) وتقنيات التضخيم. \u003cb\u003eالتطبيقات:\u003c\/b\u003e التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة، تضخيم الحمض النووي، \u003cb\u003eمواصفات\u003c\/b\u003e تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) \u003cb\u003e. المواد المطلوبة (غير متوفرة\u003c\/b\u003e ): مزيج محلول ديوكسي نيوكليوتيد (dNTP) (NEB #N0447)، ماء خالٍ من النيوكلياز (NEB #B1500)، مثبط RNase، فأري (NEB #M0314). \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: ما هو التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) والتضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة العكسية (RT-LAMP)؟ ج: التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) هو طريقة تضخيم متساوية الحرارة مصممة للكشف عن حمض نووي مستهدف دون الحاجة إلى معدات معقدة. يستخدم بوليميراز الحمض النووي لإزاحة السلسلة، مثل بوليميراز الحمض النووي Bst، و4-6 بادئات تتعرف على 6-8 مناطق مميزة من الحمض النووي المستهدف لتفاعل تضخيم عالي التخصص. توفر تقنية LAMP حساسية عالية (تصل إلى فيمتوغرام أو أقل من 10 نسخ من الهدف) مع نتائج سريعة: إذ يمكن إتمام التفاعلات في غضون 5-10 دقائق فقط. يمكن إجراء التفاعلات بموارد محدودة، باستخدام حمام مائي للحضانة والكشف عن النتائج بالعين المجردة، أو باستخدام أجهزة قياس فورية وأجهزة عالية الإنتاجية. يتم الكشف عن أهداف الحمض النووي الريبي (RNA) ببساطة عن طريق إضافة إنزيم النسخ العكسي إلى تفاعل LAMP، حيث يتم إجراء RT-LAMP كعملية متساوية الحرارة من خطوة واحدة. إن إنزيم النسخ العكسي WarmStart RTx (NEB #M0380) هو بوليميراز DNA موجه للحمض النووي الريبي (RNA) مقترن بأبتامر قابل للعكس يثبط نشاط RTx عند درجة حرارة أقل من 40 درجة مئوية، مما يجعله مناسبًا بشكل خاص لتقنية RT-LAMP. لمعرفة المزيد والاطلاع على منتجاتنا من تقنية LAMP، يرجى زيارة صفحة نظرة عامة على تطبيقات LAMP. س: ما هي مزايا WarmStart® RTx؟ ج: على غرار استخدام بوليميرازات الحمض النووي ذات البدء الساخن، يُمكّن إنزيم النسخ العكسي ذو البدء الدافئ من الحصول على أداء ثابت في تفاعلات التضخيم. بفضل خاصية WarmStart®، يُمكن إجراء أي تفاعل RT-LAMP باستخدام WarmStart RTx أو بوليميراز الحمض النووي Bst 2.0 WarmStart (NEB #M0538) في درجة حرارة الغرفة، دون تضخيم خارج الهدف. توفر هذه الخاصية درجة أعلى من الخصوصية لتفاعلات الكشف عن الحمض النووي الريبي وتضخيمه، وتُتيح مرونة في الإعداد عالي الإنتاجية أو بدون استخدام الثلج. س: ما مدى حساسية تضخيم الحمض النووي الريبي باستخدام WarmStart® RTx؟ ج: يُمكن لتفاعلات RT-LAMP أحادية الخطوة باستخدام WarmStart RTx أن تُوفر تضخيمًا للهدف بشكل روتيني باستخدام 1 بيكوغرام فقط من الحمض النووي الريبي المُدخل. يُمكن لتفاعلات RT-PCR باستخدام WarmStart RTx أو Hot Start Taq أن تُوفر تضخيمًا للهدف باستخدام 10 فيمتوغرام فقط من الحمض النووي الريبي المُدخل. س: هل يُمكن تعطيل WarmStart® RTx؟ ج: نوصي بالتسخين إلى 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. س: هل يعمل WarmStart® RTx في محاليل منظمة أخرى؟ ج: نعم، يعمل WarmStart® RTx بشكل عام في محاليل منظمة ذات درجة حموضة أعلى من 7.5، وتركيز ملح أحادي التكافؤ من 10 إلى 200 ملي مولار، وتركيز أيونات المغنيسيوم (Mg2+) من 2 إلى 20 ملي مولار. نسبة النشاط في محاليل NEB المنظمة الأخرى: NEBuffer1.1: 10%، NEBuffer2.1: 75%، NEBuffer3.1: 75%، CutSmart™ Buffer: 90%، ThermoPol™: 90%. س: ما هو أقصى طول لمنتج cDNA الناتج عن WarmStart® RTx؟ ج: طُوّر WarmStart RTx لتحقيق أفضل أداء مع القطع المضخمة القصيرة في تفاعلات التضخيم التشخيصية (مثل RT-LAMP وRT-PCR). ومع ذلك، فإنه يعمل بشكل جيد في تخليق cDNA، مع منتجات يصل طولها إلى 5 كيلوبايت. لمنتجات الحمض النووي التكميلي الأطول، نوصي باستخدام ProtoScript® II (NEB #M0368) أو مجموعة ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit (NEB #E6560). أما لمنتجات الحمض النووي التكميلي الأطول، فنوصي باستخدام إنزيم النسخ العكسي Induro® (NEB #M0681)، وهو إنزيم نسخ عكسي مشفر بواسطة إنترون من المجموعة الثانية. س: هل يمتلك WarmStart® RTx نشاط RNase H؟ ج: نعم، يحتوي WarmStart® RTx على نطاق RNase H نشط. س: هل يمكن استخدام الحمض النووي كقالب لـ WarmStart® RTx؟ ج: نعم، ولكن التفاعل أقل كفاءة بكثير مقارنةً بتخليق الحمض النووي الموجه بالحمض النووي الريبي. تبلغ كفاءة تخليق الحمض النووي الموجه بالحمض النووي حوالي 10-20% من كفاءة التخليق الموجه بالحمض النووي الريبي عند 45 درجة مئوية، وحوالي 50% عند 55 درجة مئوية. س: ما هما بوليميراز Hot Start وWarmStart®، ومتى يُستخدمان؟ ج: عند تحضير تفاعلات درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الجليد، وعند ملاحظة تضخيم غير نوعي، ما المقصود بـ \"البدء الساخن\/البدء الدافئ\"؟ تستخدم بوليميرازات البدء الساخن والبدء الدافئ لدينا أبتاميرات تثبط نشاط الإنزيم في درجة حرارة الغرفة، مما يمنع تكوين نواتج غير نوعية. لا يؤثر وجود هذه الأبتاميرات على وظيفة الإنزيم الأساسية. يكمن الفرق بين البدء الساخن والبدء الدافئ في أن إنزيمات البدء الساخن محبة للحرارة، بينما إنزيمات البدء الدافئ محبة للحرارة المعتدلة؛ ويتشابه النطاق الديناميكي الحراري للأبتاميرات لإنزيمات البدء الساخن والبدء الدافئ إلى حد كبير. الأبتاميرات عبارة عن قليل النوكليوتيدات المُهندسة التي ترتبط بجزيء هدف محدد من خلال تفاعلات غير تساهمية، وتتضمن تعديلات محددة على قواعد النوكليوتيدات، مما يُحسّن من خصائص التثبيط و\/أو يقلل من الآثار الجانبية غير المقصودة. تتمثل ميزة التثبيط القائم على الأبتاميرات مقارنةً بتقنيات البدء الساخن الأخرى (مثل الأجسام المضادة) في أنها لا تتطلب خطوة تنشيط، وترتبط بشكل عكسي بطريقة تعتمد على درجة الحرارة. تُقدّم شركة NEB بوليميرازات مزودة بأبتاميرات لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الروتيني، وتفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الدقة، والتضخيم متساوي الحرارة، والنسخ العكسي. تستهدف هذه الأبتاميرات وظائف إنزيمية مختلفة لبوليميرازات مختلفة. لماذا يُطلق عليه اسم \"البدء الساخن\"؟ مثل العديد من بوليميرازات الحمض النووي من عائلة A غير المُدققة، يمتلك بوليميراز Taq القدرة على إضافة قواعد إلى نهاية الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) بطريقة مستقلة عن القالب حتى في درجة حرارة الغرفة، وقد يؤدي ذلك إلى إضافة قواعد غير مُحددة إلى نهايات بادئات الحمض النووي في التفاعل، مما يُتيح التهجين خارج الهدف ويُقلل من خصوصية التفاعل الإجمالية. في المقابل، عند درجات حرارة أعلى، يقل الارتباط غير المُحدد حيث تُصبح عملية التلدين أكثر صرامة. ركزت الطرق المبكرة للتخفيف من النشاط غير المرغوب فيه عند درجات الحرارة المنخفضة على استبعاد مكونات التفاعل الرئيسية حتى يتم رفع درجة حرارة التفاعل، والتي يُمكن إضافتها بعد ذلك إلى الخليط، مما يُحفز التفاعل في ظل ظروف أكثر تقييدًا ودرجة حرارة عالية. اقرأ مقالنا المميز، \"استخدام الأبتاميرات للتحكم في نشاط إنزيمات Hot Start Taq وما بعدها\"، للاطلاع على بيانات تقارن تكوين المنتج للإنزيمات مع وبدون تثبيط النشاط باستخدام الأبتاميرات. س: ما الفرق بين المحلولين المنظمين B1714: محلول التضخيم متساوي الحرارة 10X (متوافق مع التجفيف بالتجميد) وB0537: محلول التضخيم متساوي الحرارة 10X؟ ج: سيكون الإنزيم الخالي من الجلسرين نشطًا في كلا محلولي التضخيم متساوي الحرارة، ولكن المحلول المتوافق مع التجفيف بالتجميد (NEB #B1714) مُحسَّن للاستخدام في عمليات التجفيف بالتجميد. س: ما تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg2+) في محلول التضخيم متساوي الحرارة 10X (متوافق مع التجفيف بالتجميد)؟ ج: يحتوي محلول التضخيم متساوي الحرارة 10X (متوافق مع التجفيف بالتجميد) على 80 ملي مولار من كبريتات المغنيسيوم (MgSO4)، وبالتالي 8 ملي مولار من كبريتات المغنيسيوم في التفاعل النهائي 1X. س: هل يحتوي محلول التضخيم متساوي الحرارة B1714 (متوافق مع التجفيف بالتجميد) على أي سواغات؟ ج: لا، لا يحتوي محلول التضخيم متساوي الحرارة 10X (متوافق مع التجفيف بالتجميد) على أي سواغات للتجفيف بالتجميد. يجب على المستخدم النهائي فحص السواغات واختيارها في التطبيق المطلوب. بانوز-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4؛ mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-469750017 -1040178053 9 0 511 0;}p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-unhide:no; mso-style-qformat:yes; mso-style-parent:\"\"; الهامش:0 بوصة؛ MSO-ترقيم الصفحات:أرملة يتيمة؛ حجم الخط: 12.0 نقطة؛ عائلة الخط:\"Times New Roman\"،serif؛ mso-fareast-font-family:\"Times New Roman\";}.MsoChpDefault {mso-style-type:export-only; mso-default-props:yes; mso-ascii-font-family:Calibri؛ mso-ascii-theme-font:minor-latin; mso-fareast-font-family:Calibri; MSO-fareast-theme-font:minor-latin; mso-hansi-font-family:Calibri; mso-hansi-theme-font:minor-latin; mso-bidi-font-family:\"Times New Roman\"; mso-bidi-theme-font:minor-bidi; mso-font-kerning:0pt; mso-ligatures:none;}div.WordSection1 {page:WordSection1; س: هل يمكن تخفيف إنزيم النسخ العكسي WarmStart® RTx (الخالي من الجلسرين) بتركيز 75000 وحدة\/مل قبل الاستخدام؟ ج: نعم، يمكن تخفيف الإنزيم بتركيز 75000 وحدة\/مل في محلول التضخيم متساوي الحرارة 1X (متوافق مع التجميد) إلى تركيز 15000 وحدة\/مل قبل الاستخدام. ويكون هذا التخفيف بتركيز 15000 وحدة\/مل مستقرًا عند درجة حرارة 4 مئوية لمدة 7 أيام على الأقل. mso-font-signature:-536870145 1107305727 0 0 415 0;}@font-face {font-family:Calibri; بانوز-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4؛ mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-469750017 -1040178053 9 0 511 0;}p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-unhide:no; mso-style-qformat:yes; mso-style-parent:\"\"; الهامش:0 بوصة؛ MSO-ترقيم الصفحات:أرملة يتيمة؛ حجم الخط: 12.0 نقطة؛ نوع الخط: \"Times New Roman\", serif؛ mso-fareast-font-family: \"Times New Roman\";}.MsoChpDefault {mso-style-type:export-only; mso-default-props:yes; mso-ascii-font-family:Calibri; mso-ascii-theme-font:minor-latin; mso-fareast-font-family:Calibri; mso-fareast-theme-font:minor-latin; mso-hansi-font-family:Calibri; mso-hansi-theme-font:minor-latin; mso-bidi-font-family: \"Times New Roman\"; mso-bidi-theme-font:minor-bidi; mso-font-kerning:0pt; mso-ligatures:none;}div.WordSection1 {page:WordSection1;} س: كم عدد دورات التجميد\/الإذابة التي يتحملها إنزيم النسخ العكسي WarmStart® RTx (الخالي من الجلسرين)؟ ج: تم اختبار إنزيم النسخ العكسي WarmStart® RTx (الخالي من الجلسرين) حتى 10 دورات تجميد\/إذابة بتركيز 75000 وحدة\/مل، ولم يُظهر أي فقدان في النشاط في تفاعل RT-LAMP. مع ذلك، يجب تجنب التجميد والإذابة المتكررين لهذا المنتج. يمكن تخزين الإنزيم (75000 وحدة\/مل) عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى شهر واحد. @font-face {font-family:\"Cambria Math\"; panose-1:2 4 5 3 5 4 6 3 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:roman; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-536870145 1107305727 0 0 415 0;}@font-face {font-family:Calibri; بانوز-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4؛ mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-469750017 -1040178053 9 0 511 0;}p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-unhide:no; mso-style-qformat:yes; mso-style-parent:\"\"; الهامش:0 بوصة؛ mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:\"Times New Roman\",serif; mso-fareast-font-family:\"Times New Roman\";}.MsoChpDefault {mso-style-type:export-only; mso-default-props:yes; mso-ascii-font-family:Calibri; mso-ascii-theme-font:minor-latin; mso-fareast-font-family:Calibri; mso-fareast-theme-font:minor-latin; mso-hansi-font-family:Calibri; mso-hansi-theme-font:minor-latin; mso-bidi-font-family:\"Times New Roman\"; mso-bidi-theme-font:minor-bidi; mso-font-kerning:0pt; الحروف المركبة mso:none;}div.WordSection1 {page:WordSection1;}","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835543867561,"sku":"M0439L","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-m0439l","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}