{"product_id":"neb-m5508s","title":"نيو إنجلاند بيولابس، M5508S، إنزيم USER® II غير مستقر حرارياً","description":"يتوفر أيضًا إصدار مقاوم للحرارة، وهو إنزيم USER III المقاوم للحرارة ( \u003cb\u003eالفئات ذات الصلة:\u003c\/b\u003e إنزيمات إصلاح الحمض النووي، وإنزيمات نوكلياز داخلية متخصصة في البنية، \u003cb\u003eتطبيقات\u003c\/b\u003e إنزيمات USER® وUSER II المقاومة للحرارة، USER®، الاستنساخ، تجميع الحمض النووي واستنساخه، \u003cb\u003eتعريف\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eالوحدة:\u003c\/b\u003e تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لقطع 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، مُوسَم بصبغة فلورية، يحتوي على قاعدة يوراسيل واحدة، في غضون 15 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر في محلول منظم T4 DNA Ligase بتركيز 1X. \u003cb\u003eشروط التفاعل:\u003c\/b\u003e محلول منظم rCutSmart™ بتركيز 1X، حضانة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، محلول منظم rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار من أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار من أسيتات التريس، 10 ملي مولار من أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام\/مل من الألبومين المؤتلف (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية) النشاط في \u003cb\u003eمحلول التخزين\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eNEBuffers:\u003c\/b\u003e 15 ملي مولار Tris-HCl، 35 ملي مولار NaCl، 25 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 100 ميكروغرام\/مل BSA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. \u003cb\u003eالتثبيط الحراري:\u003c\/b\u003e 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: ما هو نشاط إنزيم USER II الحراري في محاليل منظمة أخرى؟ ج: إنزيم USER II الحراري نشط بنسبة 100% في مجموعة متنوعة من المحاليل المنظمة، بما في ذلك محلول rCutSmart (NEB #B6004)، وNEBuffer r1.1، ومحلول تفاعل ربط الحمض النووي T4 (NEB #B0202)، ومحلول TE (10 ملي مولار Tris-HCl، الأس الهيدروجيني 8.0، 0.1 ملي مولار EDTA). النشاط في محاليل NEBuffers كما يلي: NEBuffer r1.1 r2.1 r3.1 rCutSmart™ % النشاط 100 100 100 100 بالإضافة إلى ذلك، فإن إنزيم USER II الحراري فعال بنسبة 100% في العديد من محاليل البوليميراز ومحاليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (انظر الجدول أدناه). المحلول % النشاط محلول تفاعل Thermopol (NEB #B9004) 100% محلول تفاعل Q5® (NEB #B9027) 100% محلول Phusion™ HF (NEB #B0518) 100% محلول تفاعل البوليميراز المتسلسل (Roche) 100% محلول GoTaq® (Promega®) 100% محلول تفاعل البوليميراز المتسلسل (Qiagen®) 100% محلول Pfu Turbo Cx (Agilent Technologies) 100% محلول AmpliTaq Gold® 360 (ThermoFisher®) 100% محلول Fast Start™ Taq DNA Pol PCR (سيجما ألدريتش) 100% محلول منظم لتفاعل البوليميراز المتسلسل (أبلايد بيوسيستمز) 100% محلول منظم لتفاعل البوليميراز المتسلسل (إنزيماتيكس) 100% AmpliTaq Gold® وPhusion® وThermo Fisher® هي علامات تجارية مسجلة مملوكة لشركة Thermo Fisher Scientific. s.GoTaq® وPromega® هما علامتان تجاريتان مسجلتان لشركة Promega, Inc. Qiagen® هي علامة تجارية مسجلة لشركة Qiagen, Inc. Fast Start™ هي علامة تجارية لشركة Sigma Aldrich. س: هل يمكن تعطيل إنزيم USER الحساس للحرارة بالحرارة؟ ج: نعم، على عكس إنزيم USER (NEB #M5505)، الذي لا يمكن تعطيله بالحرارة ويجب إزالته بطرق أخرى (مثل تنقية العمود\/استخلاص الفينول والكلوروفورم)، يمكن تعطيل إنزيم USER الحساس للحرارة بالحرارة عند 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. س: ما الفرق بين إنزيم USER® II الحساس للحرارة وإنزيم USER؟ ج: إنزيم USER II الحساس للحرارة يشبه هذا الإنزيم إنزيم USER (كاشف استئصال اليوراسيل المحدد) (NEB #M5505)، حيث يُحدث كلاهما فجوة نيوكليوتيدية واحدة في موقع اليوراسيل، مع ميزة إضافية تتمثل في تعطيله بالكامل بالحرارة عند 65 درجة مئوية. يكسر نشاط اللياس لإنزيم Endonuclease VIII في إنزيم USER العمود الفقري للفوسفودايستر ويترك فوسفاتًا في الموضعين 3' و5'، بينما يكسر نشاط اللياس لإنزيم Endonuclease III في إنزيم USER II الحراري العمود الفقري للفوسفودايستر ويترك فوسفاتًا في الموضع 3' من نوع α، β-ألدهيد غير مشبع ومجموعة فوسفات في الموضع 5'. س: هل يزيل إنزيم USER II الحراري (NEB #M5508) اليوراسيل من الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) وثنائي السلسلة (dsDNA)؟ ج: يزيل إنزيم USER II الحراري اليوراسيل من كل من الحمض النووي أحادي السلسلة وثنائي السلسلة. مع ذلك، فإن إنزيم USER II الحراري غير المستقر يتميز بنشاط أقل بثلاثة أضعاف تقريبًا على الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) مقارنةً بالحمض النووي ثنائي السلسلة. ولا يُظهر إنزيم USER II الحراري أي نشاط على النيوكليوتيدات (dUTP) في المحلول. س: ما هي التطبيقات الأنسب لإنزيم USER II الحراري؟ ج: يُمكن استخدام إنزيم USER II الحراري في العديد من التطبيقات التي تستخدم حاليًا إنزيم USER (NEB #M5505)، مثل استنساخ USER، وقطع محولات NEBNext® أثناء تحضير مكتبة NGS، والإزالة الانتقائية للسلسلة الثانية المحتوية على dU أثناء سير عمل NEBNext Directional RNA-seq. يُرجى زيارة قسم تطبيقات إنزيمات USER II و USER II الحراري غير المستقر لمزيد من المعلومات. س: أثناء تحضير مكتبة NEBNext DNA، ما هو الإنزيم الذي يقطع محولات حلقات NEBNext DNA والحلقات أحادية السلسلة المحتوية على اليوراسيل؟ ج: USER يتكون الإنزيم من UDG وإنزيم Endonuclease VIII. يساعد UDG في إحداث فجوة عند موقع اليوراسيل، ثم ينتقل إنزيم Endonuclease VIII إلى هذا الموقع ويقطع الرابطة الفوسفودايسترية عند طرفي 3' و5'، مُحررًا ديوكسي ريبوز خاليًا من القاعدة. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح. التوجيه، ونستطيع تقديم هذا التحسين بنفس السعر. س: ما الفرق بين مجموعة إنزيمات USER® (#M5505، #M5508، #M5509) وإنزيم Endonuclease Q المقاوم للحرارة (#M0701)؟ ج: منتجات USER (إنزيم USER (#M5505)، وإنزيم USER II المقاوم للحرارة (#M5508)، وإنزيم USER III المقاوم للحرارة (#M5509)) عبارة عن مزيج من إنزيمين: UDG وإنزيم نوكلياز داخلي. في المقابل، إن إنزيم Endonuclease Q المقاوم للحرارة (#M0701) هو إنزيم واحد. على الرغم من أن إنزيمات USER وإنزيم Endonuclease Q المقاوم للحرارة يتعرفان على ديوكسي يوراسيل في ركائز الحمض النووي ويقطعانه، إلا أن المنتجات الناتجة مختلفة. المنتجات النهائية لإنزيمات USER هي فجوات أحادية النوكليوتيد ذات نهايات وظيفية مختلفة بناءً على نوع USER المستخدم؛ حيث تتم إزالة ديوكسي يوراسيل. منتجات إنزيم Endonuclease Q المقاوم للحرارة إن إنزيم إندونوكلياز Q يُحدث شقوقًا عند الطرف 3′-OH والطرف 5′-فوسفات؛ ويبقى ديوكسي يوراسيل موجودًا على الجزء 3′ من الحمض النووي. س: هل تُخلّف أي من إنزيمات USER نهايات قابلة للربط عند القطع عند اليوراسيل؟ ج: لا، لا يُخلّف أي من إنزيم USER (NEB #M5505)، أو إنزيم USER II غير المستقر حراريًا (NEB #M5508)، أو إنزيم USER III المستقر حراريًا (NEB #M5509) نهايات قابلة للربط عند القطع عند اليوراسيل. مع ذلك، يُحدث إنزيم إندونوكلياز Q المستقر حراريًا (NEB #M0701) شقًا عند الطرف 5′ لليوراسيل (مع الحفاظ على سلامة القاعدة النيتروجينية)، ولكنه يُخلّف نهايات قابلة للربط عند الطرف 3′ OH والطرف 5′ P بعد القطع. س: ما مدى قرب إنزيم USER II غير المستقر حراريًا (NEB #M5508) من نهايات الحمض النووي التي يمكنه القطع عندها؟ ج: يقوم إنزيم USER® II الحراري بفصل ديوكسي يوراسيل في غضون 3 أزواج قاعدية فقط من الطرف 5' للحمض النووي المزدوج، أو 12 نيوكليوتيدًا على الأقل من الطرف 5' للحمض النووي المفرد. كما يقوم بفصل ديوكسي يوراسيل في غضون 3 أزواج قاعدية فقط من الطرف 5' للحمض النووي المزدوج، أو 6 نيوكليوتيدات على الأقل من الطرف 3' للحمض النووي المفرد. لمزيد من المعلومات، يُرجى مراجعة قسم \"فصل ديوكسي يوراسيل بالقرب من نهايات الحمض النووي المزدوج والمفرد\".","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835510476969,"sku":"M5508S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-m5508s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}