{"product_id":"neb-p0761s","title":"مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، P0761S، O-جليكوبروتينيز (IMPa)","description":"إنزيم O-جليكوبروتياز (IMPa) هو بروتياز واسع التخصص يقوم بفصل الروابط الببتيدية للبروتين السكري أو الجليكوبروتين الموجود مباشرةً في الطرف الأميني (N-terminal) لبقايا السيرين أو الثريونين التي تحتوي على جليكان مرتبط بروابط O من نوع الميوسين، مع أو بدون سياليل. \u003cb\u003eالتصنيفات ذات الصلة:\u003c\/b\u003e أدوات البروتين، البروتيازات، علم الأحياء السكري، \u003cb\u003eتطبيقات\u003c\/b\u003e علم الجليكوميات وعلم البروتينات السكرية، هضم البروتين، علم الأحياء السكرية وعلم البروتينات. \u003cb\u003eتعريف\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eالوحدة:\u003c\/b\u003e وحدة واحدة من إنزيم O-جليكوبروتياز (IMPa) تقوم بفصل أكثر من 90% من 2 بيكومول من الجليكوبروتين O الموسوم بـ FAM في حجم تفاعل إجمالي قدره 20 ميكرولتر خلال ساعتين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في محلول Tris-HCl بتركيز 20 ملي مولار، ودرجة حموضة 8.0. \u003cb\u003eمحلول التخزين:\u003c\/b\u003e 20 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار NaCl، درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية. \u003cb\u003eالتثبيط الحراري\u003c\/b\u003e : 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. \u003cb\u003eالوزن الجزيئي\u003c\/b\u003e النظري: 97 كيلو دالتون. \u003cb\u003eشروط اختبار الوحدة\u003c\/b\u003e : يتم تحضين تخفيفات متسلسلة ثنائية من O-Glycoprotease (IMPa) مع 2 ميكرومولار من O-glycopeptide الموسوم بـ FAM و20 ملي مولار Tris-HCl بدرجة حموضة 8.0 في تفاعل حجمه 20 ميكرولتر. يُحضن مزيج التفاعل عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. يتم تحديد فصل نواتج التفاعل بواسطة تحليل الفصل الكهربائي الشعيري. \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: هل يمكن زيادة حجم تفاعل O-Glycoprotease (IMPa) خطيًا لاستيعاب هضم أكثر من 10 ميكروغرام من البروتين السكري؟ ج: نعم، يمكن زيادة حجم تفاعل O-Glycoprotease (IMPa) خطيًا. توصي ظروف التفاعل النموذجية باستخدام 1 ميكرولتر من إنزيم O-جليكوبروتينيز (IMPa) لكل 10 ميكروغرام من الركيزة؛ ويمكن زيادة حجم التفاعلات خطيًا بالحفاظ على نسبة الإنزيم إلى الركيزة 1:10. مع ذلك، يجب تحديد النسبة الدقيقة للإنزيم إلى الركيزة تجريبيًا، حيث أن نقاء الركيزة، ودقة طيها، ودرجة غلكزة البروتين، وتجمع مواقع O-جلكزة (IMPa) قد تؤثر على كفاءة الهضم. قد يكون من الضروري في بعض الحالات زيادة مدة الحضانة (18 ساعة) وكمية الإنزيم. يُنصح باختبار كفاءة الهضم أولًا على نطاق صغير (10 ميكروغرام) قبل زيادة الحجم، ومراقبة كفاءة التحلل باستخدام تحليل SDS-PAGE. س: هل إنزيم O-جليكوبروتينيز (IMPa) نشط في وجود عوامل الاختزال أو المنظفات؟ ج: لا، إنزيم O-جليكوبروتينيز (IMPa) غير نشط في وجود عوامل الاختزال أو المنظفات. تؤدي إضافة 1 ملي مول من ثنائي ثيوثريتول (DTT)، أو منظفات مثل إنفيتروسول (ثيرمو، #MS1007) وبروتياز ماكس (بروميج، #V2071)، إلى تعطيل الإنزيم تمامًا. في حال استخدام عوامل اختزال أو منظفات، يجب تنقية البروتين السكري قبل إضافة إنزيم O-جليكوبروتياز (IMPa). نوصي باستخدام عمود إزالة المنظفات HiPPR Detergent Removal Resin (كتالوج ثيرمو #88306)، والذي يجب استخدامه وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. س: هل إنزيم O-جليكوبروتياز (IMPa) نشط في محاليل منظمة أخرى غير محلول Tris-HCl بتركيز 20 ملي مول ودرجة حموضة 8.0؟ ج: نعم، النطاق الأمثل لدرجة الحموضة لإنزيم O-جليكوبروتياز (IMPa) هو 7.0-8.0. ينخفض ​​نشاط الإنزيم بشكل ملحوظ عند قيم درجة الحموضة الأقل من 7.0 والأعلى من 8.0. إنزيم O-Glycoprotease نشط بنسبة 100% في محلول HEPES بتركيز 20 ملي مولار، ودرجة حموضة 8.0. ينخفض ​​نشاط الإنزيم بنسبة 50% في محلول NH4CO3 بتركيز 15-25 ملي مولار، ويصبح غير نشط في محلول NH4CO3 بتركيز 50 ملي مولار. س: هل يستطيع إنزيم O-Glycoprotease (IMPa) فصل مواقع O-glycosylation المتجمعة بكفاءة؟ ج: قد يكون تحليل مواقع O-glycosylation المتجمعة بكثافة أمرًا صعبًا نظرًا لتنوع شغل هذه المواقع (عدم تجانسها الكلي) وقرب مواقع O-glycosylation في البروتينات السكرية. يمكن أن يساعد التحليل المتوازي لبروتين سكري طبيعي وآخر مُشوَّه بعد هضمهما بإنزيم O-Glycoprotease (IMPa) في الحصول على معلومات أكثر شمولًا. قد يتطلب الأمر في بعض الحالات فترات حضانة أطول (18 ساعة) وكمية أكبر من الإنزيم. بالإضافة إلى ذلك، لا يقوم إنزيم O-Glycoprotease (IMPa) بفصل الأحماض الأمينية المتجاورة المرتبطة بـ O-glycosylation. س: ألاحظ انقسامًا طفيفًا للبروتين السكري بعد معالجته بإنزيم O-Glycoprotease (IMPa). كيف يمكنني تحسين التفاعل؟ ج: قد تكون البروتينات السكرية المطوية بإحكام و\/أو البروتينات السكرية ذات مواقع O-glycosylation المتجمعة مقاومة للانقسام بواسطة البروتيازات. في هذه الحالات، قد يكون من الضروري تغيير طبيعة الركيزة قبل هضمها بإنزيم O-Glycoprotease (IMPa) للحصول على هضم أمثل. بالإضافة إلى ذلك، قد يكون من الضروري زيادة مدة الحضانة (18 ساعة) وكمية الإنزيم. مع ذلك، يُرجى ملاحظة أنه يجب إزالة المنظفات والكواشف الإضافية من التفاعل قبل إضافة إنزيم O-Glycoprotease (IMPa). س: هل من الضروري إزالة حمض السياليك من الركيزة أولًا قبل هضمها بإنزيم O-Glycoprotease (IMPa)؟ ج: لا، إنزيم O-Glycoprotease (IMPa) فعال تمامًا على البروتينات السكرية والببتيدات السكرية المحتوية على حمض السياليك. س: هل إنزيم O-Glycoprotease (IMPa) فعال على مستضد TF ومستضد Tn؟ ج: يقوم إنزيم O-Glycoprotease (IMPa) بتحليل الببتيدات التي تحتوي على جزيئات سكرية أصغر غير محتوية على حمض السياليك بكفاءة، مثل مستضد TF (Galβ1,3GalNAc-α-) ومستضد Tn ​​(GalNAc-α-). س: هل يحتاج إنزيم O-Glycoprotease (IMPa) إلى أيونات معدنية ليكون فعالًا؟ ج: إنزيم O-Glycoprotease (IMPa) هو إنزيم بروتيني معدني. يؤدي استخدام عوامل الاستخلاب مثل EDTA إلى تعطيل إنزيم O-Glycoprotease. كما أن إضافة أيونات Mn2+ وZn2+ وCu2+ ستؤدي إلى انخفاض نشاط الإنزيم.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835484131497,"sku":"P0761S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-p0761s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}