{"product_id":"neb-p0774s","title":"نيو إنجلاند بيولابس، P0774S، مثبط نوكلياز GamS من NEBExpress®","description":"مثبط نوكلياز NEBExpress GamS هو بروتين مُعاد التركيب يُثبط نشاط إكسونوكلياز V (RecBCD) ويُثبّت قوالب الحمض النووي الخطي. \u003cb\u003eالتصنيفات ذات الصلة\u003c\/b\u003e : NEBExpress®، نظام تخليق البروتين الخالي من الخلايا، الإشريكية القولونية، التعبير عن البروتين الخالي من الخلايا، \u003cb\u003eتطبيقات\u003c\/b\u003e التعبير عن البروتين. \u003cb\u003eمواصفات\u003c\/b\u003e نظام تخليق البروتين الخالي من الخلايا NEBExpress® في الإشريكية القولونية: \u003cb\u003eمحلول التخزين:\u003c\/b\u003e 50 ملي مولار تريس-أسيتات، درجة الحموضة 8.2. \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: كيف يُحسّن مثبط نوكلياز NEBExpress® GamS إنتاج البروتين؟ ج: صُمم نظام تخليق البروتين الخالي من الخلايا NEBExpress في الإشريكية القولونية ليكون متوافقًا مع الحمض النووي الخطي. ومع ذلك، فإن إنتاج البروتين من قالب الحمض النووي الخطي عادةً ما يكون أقل من إنتاج البروتين من الحمض النووي البلازميدي. يعود ذلك إلى وجود إنزيم إكسونوكلياز من الإشريكية القولونية، يُسمى RecBCD (Exo V)، المسؤول عن تحطيم قالب الحمض النووي الخطي. يمكن إضافة GamS إلى تفاعل التخليق لتثبيط نشاط RecBCD بفعالية، مما يُساهم في استقرار الحمض النووي الخطي لضمان استمرار عملية النسخ. س: ما هي كمية قالب الحمض النووي الخطي ومثبط النيوكلياز GamS من NEBExpress® التي يجب إضافتها إلى التفاعل؟ ج: كبداية، نقترح إضافة 250 نانوغرام من الحمض النووي الخطي و1.5 ميكروغرام من GamS (1 ميكرولتر) في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر لزيادة إنتاج البروتين. يُساهم حجم الجين وبنية الحمض النووي في استقرار الحمض النووي الخطي ومعدل النسخ. لذلك، قد تتطلب أهداف البروتين المختلفة مزيدًا من التحسين لتحديد النسبة المثلى للقالب وGamS. أثناء إعداد التجربة، يُنصح بإضافة قالب الحمض النووي الخطي في الخطوة الأخيرة للسماح لـ GamS بالارتباط بـ RecBCD وتثبيطه قبل أن تتاح لـ RecBCD فرصة التأثير على الحمض النووي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن زيادة حجم تفاعل تخليق البروتين، وفي هذه الحالة يجب تعديل كمية الحمض النووي الخطي وGamS بما يتناسب مع حجم التفاعل. س: هل زيادة مثبط النيوكلياز GamS من NEBExpress® أفضل دائمًا؟ ج: لا! هناك نطاق مثالي لـ GamS في تفاعل تخليق البروتين الخالي من الخلايا. في نظام تخليق البروتين الخالي من الخلايا E. coli من NEBExpress، تم تحديده بحوالي 2.4 ميكرومول، أو 1.5 ميكروغرام لكل 50 ميكرولتر من التفاعل. قد تؤدي إضافة المزيد من GamS إلى انخفاض إنتاج البروتين. ويرجع ذلك على الأرجح إلى أن GamS بروتين حمضي ويعمل كمحاكي للحمض النووي. عند التركيزات العالية، قد يتفاعل مع إنزيمات أخرى ويتداخل مع عملية النسخ والترجمة. س: هل يمكنني تجميد وإذابة مثبط نوكلياز NEBExpress® GamS؟ ج: يُخزَّن مثبط نوكلياز NEBExpress GamS في محلول منظم مائي بنسبة 100% لضمان التوافق الأمثل مع تفاعلات تخليق البروتين. يجب تخزينه عند درجة حرارة -20 درجة مئوية، ويُفضَّل تجنُّب دورات التجميد والإذابة المتكررة. في حال توقع تكرار دورات التجميد والإذابة، نوصي بتقسيم البروتين إلى حصص صغيرة عند الاستخدام الأول. س: كيف أُحضِّر الحمض النووي الخطي؟ ج: يمكن لمجموعات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، مثل مجموعة NEB Q5® عالية الدقة لتفاعل البوليميراز المتسلسل (NEB #E0555)، إنتاج كمية وفيرة من الحمض النووي الخطي. يجب تنقية الحمض النووي الخطي قبل استخدامه في تفاعل تخليق البروتين الخالي من الخلايا. نوصي بالتنقية باستخدام مجموعة Monarch® لتنقية الحمض النووي وتفاعل البوليميراز المتسلسل (5 ميكروغرام) (NEB #T1030).","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835538493609,"sku":"P0774S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-p0774s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}