{"product_id":"neb-p0872s","title":"نيو إنجلاند بيولابس، P0872S، بروتين رابط لـ N-جليكوبروتين","description":"\u003cb\u003eالفئات ذات الصلة\u003c\/b\u003e : علم الأحياء السكرية، \u003cb\u003eتطبيقات\u003c\/b\u003e تحليل البروتينات، علم الأحياء السكرية وعلم البروتينات، \u003cb\u003eمواصفات\u003c\/b\u003e تحليل البروتينات السكرية. \u003cb\u003eمحلول التخزين:\u003c\/b\u003e 20 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار NaCl، 0.2 ملي مولار TCEP، درجة الحموضة 8. \u003cb\u003eالتعطيل الحراري\u003c\/b\u003e : لا. \u003cb\u003eالوزن الجزيئي\u003c\/b\u003e النظري: 45 كيلو دالتون \u003cb\u003e. شروط اختبار الوحدة\u003c\/b\u003e : الاختبار الوظيفي (إثراء N-جليكان): تفاعل حجمه 200 ميكرولتر في محلول يحتوي على 20 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار NaCl، 0.2 ملي مولار TCEP، 10% أسيتونيتريل، درجة الحموضة 8.0، يحتوي على 1 نانومول من سياليل جليكوبروتين موسوم بالفلورسنت و100 ميكروغرام من بروتين ربط N-جليكوبروتين، يُحضن لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية، ينتج عنه إثراء ≥40% كما تم تحديده بواسطة مطيافية الأشعة فوق البنفسجية والمرئية عند 520 نانومتر. سؤال \u003cb\u003eوجواب\u003c\/b\u003e : كيف يُحسّن بروتين ربط N-جليكوبروتين تحليل البروتينات السكرية؟ جواب: عادةً ما تُشكّل N-جليكوبروتينات جزءًا صغيرًا فقط من إجمالي مجموعة الببتيدات المُحلّلة في عينة بروتينية مُعقّدة؛ لذلك، غالبًا ما تُطغى عليها الببتيدات غير الجليكوبروتينية الأكثر وفرةً في تجربة LC-MS. بالإضافة إلى ذلك، يتم اختيار الأيونات ذات كفاءة التأين الأعلى، والتي عادةً ما تكون من الببتيدات غير الجليكوبروتينية، لتجزئة MS\/MS لإنتاج معلومات عن تركيب السكريات وتمكين اكتشاف الجليكوبروتينات. قد يؤدي هذا إلى نقصٍ كبير في تمثيل الجليكوبروتينات في تشغيل LC-MS. يُقلّل الإثراء بواسطة بروتين ربط N-جليكوبروتين بشكلٍ كبير من العدد الإجمالي لأنواع الببتيدات غير الجليكوبروتينية في العينة. سيتم تخصيص وقت أطول لدورة MS\/MS للببتيدات السكرية N المُثرية، مما يُحقق تحسينًا كبيرًا في مطابقة أطياف الببتيدات السكرية N وتحديد واكتشاف البروتينات السكرية. س: ما هي خصوصية بروتين ربط الببتيدات السكرية N؟ ج: صُمم بروتين ربط الببتيدات السكرية N ليرتبط بالببتيدات والبروتينات المُغلْكَزة N ذات مجموعة واسعة من أشكال N-الغليكوبروتينات، بما في ذلك المانوز العالي، والمعقد، والهجين، بالإضافة إلى المُفَكوزة وغير المُفَكوزة، والمُسيَلة وغير المُسيَلة، ذات البنى ثنائية وثلاثية ورباعية التفرع. كما يرتبط أيضًا بأشكال الغليكوبروتينات غير الناضجة مثل قليل المانوز وتلك التي تحتوي على مانوز-6-فوسفات. ومع ذلك، فهو لا يرتبط بالغليكانات N التي تحتوي على GlcNAc ثنائي التفرع. س: ما مدى قوة ارتباط بروتين ربط N-جليكوبروتين بالجليكوبروتين؟ ج: وفقًا لهذه الدراسة: Chen 2017، فإن ثابت التفكك (Kd) بين بروتين ربط N-جليكوبروتين ونموذج سياليل جليكوبروتين يقع في نطاق الميكرومولار أو ما دونه. 1. Chen M. et al. (2017). An engineering high affinity Fbs1carb binding protein for selective capture of N-glycans and N-glycopeptides. Nat Commun. May 23;8, 15487. س: هل يستطيع بروتين ربط N-جليكوبروتين الارتباط بالجليكانات الحرة وإثرائها؟ ج: نعم، يستطيع بروتين ربط N-جليكوبروتين الارتباط بالجليكانات الحرة إذا كان GlcNAc الموجود على الطرف المختزل في صورته الحرة، حيث يكون شكل البيرانوز والحلقة المفتوحة في حالة توازن. مع ذلك، فإن بنية الحلقة السداسية (البيرانوز) ضرورية للارتباط. لن ترتبط السكريات الحرة ذات بنية الحلقة المفتوحة تمامًا، مثل تلك الموسومة بالأمينة الاختزالية، ببروتين ربط N-جليكوبروتين. كما لن ترتبط السكريات الحرة ذات الوسوم الفورية (مثل وسم Waters GlycoWorks RapiFluor-MS) ببروتين ربط N-جليكوبروتين. لا يُشترط وجود الأسباراجين المرتبط بالسكر الحر للارتباط، ولا أي تسلسل ببتيدي. س: هل يستطيع بروتين ربط N-جليكوبروتين الارتباط ببروتين سكري سليم؟ ج: نعم، يستطيع بروتين ربط N-جليكوبروتين الارتباط ببروتينات سكرية سليمة. مع ذلك، يتأثر الارتباط بين بروتين ربط N-جليكوبروتين والبروتين السكري السليم بالبنية عالية الترتيب للبروتين، وموقع الارتباط، وبنية السكريات. نتيجةً لذلك، على الرغم من إمكانية إثراء البروتينات السكرية السليمة باستخدام هذا البروتين الرابط (في شكل مُثبَّت، ولكن ليس في عملية ترشيح)، فإن فعالية عملية الترسيب تعتمد على نوع البروتين السكري. س: ما الذي يؤثر على قوة ارتباط البروتين الرابط لـ N-جليكوبروتين؟ ج: بالإضافة إلى شرط بنية جليكان البيرانوز، هناك عدة عوامل تؤثر على قوة ارتباط هذا البروتين بركائزه. انخفاض الرقم الهيدروجيني يؤدي إلى انخفاض الارتباط؛ والرقم الهيدروجيني الأمثل هو 7.0 - 8.5. تركيز الملح لا يؤثر بشكل ملحوظ على الارتباط. يجب تجنب استخدام المواد المُفسِّخة للبروتين والمواد الخافضة للتوتر السطحي.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835530072233,"sku":"P0872S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-p0872s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}