{"product_id":"neb-r0641l","title":"نيو إنجلاند بيولابس، R0641L، AcuI","description":"تمت إعادة صياغة إنزيم AcuI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10268407. لمزيد من المعلومات، يرجى زيارة \u003cb\u003eالفئات ذات الصلة\u003c\/b\u003e : إنزيمات القطع المحددة: أ، \u003cb\u003eتطبيقات\u003c\/b\u003e إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت: الاستنساخ السريع: سرّع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB، \u003cb\u003eمواصفات\u003c\/b\u003e هضم إنزيم القطع، \u003cb\u003eتعريف الوحدة:\u003c\/b\u003e تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. \u003cb\u003eشروط التفاعل:\u003c\/b\u003e محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام\/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). \u003cb\u003eالنشاط في محاليل\u003c\/b\u003e NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 50%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 50%، محلول rCutSmart™: 100%. \u003cb\u003eتوافق المخفف\u003c\/b\u003e : المخفف B، \u003cb\u003eمحلول التخزين\u003c\/b\u003e : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 0.32 ملي مولار إس-أدينوسيل ميثيونين (SAM)، 200 ميكروغرام\/مل ألبومين مُعاد التركيب 50% جلسرين، درجة حموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية، \u003cb\u003eتعطيل حراري\u003c\/b\u003e عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة، \u003cb\u003eحساسية المثيلة\u003c\/b\u003e : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: ما هو النشاط النجمي وكيف يمكن تجنبه؟ ج: لقد ثبت أنه في ظل ظروف غير قياسية قاسية، تكون إنزيمات القطع قادرة على قطع تسلسلات مشابهة ولكنها ليست مطابقة لتسلسل التعرف المحدد لها. يُطلق على هذه الخصوصية المتغيرة أو المتساهلة اسم \"النشاط النجمي\". وقد اقتُرح أن النشاط النجمي قد يكون خاصية عامة لإنزيمات القطع، وأنه يمكن جعل أي إنزيم قطع يقطع مواقع غير تقليدية في ظل ظروف قاسية معينة. تعتمد طريقة تغيير خصوصية الإنزيم على الإنزيم وعلى الظروف المستخدمة لتحفيز النشاط النجمي. تشمل أكثر أنواع النشاط المُعدَّل شيوعًا استبدال قاعدة واحدة، وقص القواعد الخارجية في تسلسل التعرُّف، وقطع السلسلة المفردة. يُمكن التحكُّم الكامل في النشاط النجمي في الغالبية العظمى من الحالات، ولا يُشكِّل عادةً مصدر قلق عند إجراء عمليات الهضم باستخدام إنزيمات التقييد. لن تُظهر إنزيمات شركة نيو إنجلاند بيولابس أي نشاط نجمي عند استخدامها في ظل الظروف الموصى بها في محاليل NEBuffers المُرفقة. فيما يلي شروط التفاعل المعروفة بتحفيز أو تثبيط النشاط النجمي. العوامل المساهمة في نشاط الإنزيم النجمي: 1. تركيز عالٍ من الجلسرين [\u0026gt; 5% حجم\/حجم] 2. نسبة عالية من الوحدات إلى ميكروغرام من الحمض النووي [تختلف باختلاف الإنزيم، وعادةً ما تكون \u0026gt; 100 وحدة\/ميكروغرام] 3. قوة أيونية منخفضة [\u0026lt; 25 ملي مولار] 4. درجة حموضة عالية [\u0026gt; 8.0] 5. وجود مذيبات عضوية [ثنائي ميثيل سلفوكسيد، إيثانول، إيثيلين جليكول، ثنائي ميثيل أسيتاميد، ثنائي ميثيل فورماميد، سلفالان] 6. استبدال أيونات المغنيسيوم (Mg++) بأيونات ثنائية التكافؤ أخرى [منغنيز (Mn++)، نحاس (Cu++)، كوبالت (Co++)، زنك (Zn++] تثبيط النشاط النجمي: إذا كنت قلقًا بشأن النشاط النجمي، نوصي باتباع الإرشادات التالية: 1. استخدم أقل عدد ممكن من الوحدات للحصول على هضم كامل. هذا يمنع الهضم الزائد ويقلل من تركيز الجلسرين النهائي في التفاعل. ٢. تأكد من خلو التفاعل من أي مذيبات عضوية، مثل الكحولات، التي قد تكون موجودة في عينة الحمض النووي. ٣. ارفع القوة الأيونية لمحلول التفاعل إلى ١٠٠-١٥٠ ملي مولار (شريطة ألا يكون الإنزيم مثبطًا بسبب ارتفاع تركيز الملح). ٤. اخفض الرقم الهيدروجيني لمحلول التفاعل إلى ٧.٠. ٥. استخدم أيونات المغنيسيوم (Mg++) كأيون ثنائي التكافؤ. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة ٥-١٥ دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (٥-١٥ دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: اختبرت إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الموصى به من NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبَّط إنزيمات القطع النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و\/أو r3.1 (محاليلنا ذات التركيز الملحي العالي)، بفعل الملح في التفاعل. قد تُنتج إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الملح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. ولمنع ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. هذا الإنزيم غير حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على معلومات مُحدَّثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يتطلب AcuI وجود SAM للنشاط؟ ج: نعم، يُعدّ S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) ضروريًا لتحقيق النشاط الأمثل (يُضاف SAM إلى تركيبة الإنزيم اعتبارًا من أكتوبر 2020). إذا لم تكن متأكدًا من وجود SAM في تركيبة الإنزيم، ولديك قارورة من SAM من شركة NEB، فلا بأس من إضافته إلى التفاعل وفقًا للإرشادات السابقة. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نشعر أن الابتعاد عن المنتجات التي تحتوي على مكونات حيوانية هو خطوة في الاتجاه الصحيح، ونحن قادرون على تقديم هذا التحسين بنفس السعر.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835499237545,"sku":"R0641L","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-r0641l","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}