{"product_id":"neb-r0711s","title":"مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0711S، NmeAIII","description":"تم تضمين SAM الآن في تركيبة الإنزيم - ولم يعد يُباع في قارورة منفصلة. \u003cb\u003eالفئات ذات الصلة\u003c\/b\u003e : إنزيمات القطع المحددة: لا توجد \u003cb\u003eتطبيقات.\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eمواصفات\u003c\/b\u003e هضم إنزيم القطع. \u003cb\u003eتعريف الوحدة:\u003c\/b\u003e تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي ΦX174 RF I في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. \u003cb\u003eشروط التفاعل:\u003c\/b\u003e محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام\/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). \u003cb\u003eالنشاط في محاليل\u003c\/b\u003e NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 10%، NEBuffer™ r2.1: 10%، NEBuffer™ r3.1: أقل من 10%، محلول rCutSmart™: 100%. \u003cb\u003eتوافق المخفف\u003c\/b\u003e : المخفف B، \u003cb\u003eمحلول التخزين\u003c\/b\u003e : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 0.32 ملي مولار إس-أدينوسيل ميثيونين (SAM)، 500 ميكروغرام\/مل ألبومين مصل البقر 50% جلسرين، درجة حموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية \u003cb\u003e، تعطيل حراري\u003c\/b\u003e عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة، \u003cb\u003eحساسية المثيلة\u003c\/b\u003e : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: كيف يمكنني البحث عن إنزيم تقييد باستخدام التسلسل أو الطرف البارز أو الاسم؟ ج: يمكن استخدام أداة البحث عن الإنزيمات، وهي أداة جديدة متوفرة على موقعنا الإلكتروني في الشريط الجانبي ضمن \"الأدوات المفضلة\"، للبحث عن إنزيمات التقييد باستخدام الاسم أو التسلسل أو الطرف البارز أو النوع. تتضمن إنزيمات NEB أيقونات خصائص الإنزيم وتُعرض كرابط. س: كيف أوقف عملية هضم التقييد؟ ج: إذا لم تكن هناك أي عمليات أخرى مُخطط لها على الحمض النووي المهضوم، فيمكن إنهاء التفاعل بإضافة محلول إيقاف. في شركة NEB، نستخدم محلول الإيقاف التالي: 50% جلسرين، 50 ملي مولار EDTA (الأس الهيدروجيني 8.0)، و0.05% بروموفينول أزرق (10 ميكرولتر \/ 50 ميكرولتر حجم التفاعل). إذا لزم إجراء المزيد من التعديلات على الحمض النووي المهضوم، فإن التثبيط الحراري (رفع درجة الحرارة إلى 65 أو 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة) هو أبسط طريقة لإيقاف التفاعل. ولأن هذه الطريقة لا تُجدي مع جميع إنزيمات القطع، يُرجى الرجوع إلى معلومات الكتالوج الخاصة بالإنزيمات المستخدمة. يُعد استخلاص الفينول\/الكلوروفورم وسيلة أخرى لتثبيط إنزيم القطع. س: ما مدى استقرار إنزيم قطع معين؟ ج: تُفحص جميع الإنزيمات للتأكد من نشاطها كل 3-6 أشهر؛ ويُذكر تاريخ أحدث فحص على الملصق المرفق بكل قارورة من الإنزيم. بعد ثلاثين عامًا من الخبرة في مجال إنزيمات القطع، وجدنا أن معظمها يتمتع بثبات عالٍ عند تخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية في محلول التخزين الموصى به. يجب تقليل التعرض لدرجات حرارة أعلى من -20 درجة مئوية قدر الإمكان. س: متى يجب عليّ اختيار نسخة HF من الإنزيم؟ ج: تتمتع نسخة HF من الإنزيم بنفس خصوصية القطع التي يتمتع بها الإنزيم الأصلي، ويجب اختيارها إذا كان النشاط النجمي مصدر قلق، أو إذا كان المحلول الموصى به أكثر ملاءمة للهضم المزدوج أو أي بروتوكول متعدد الخطوات. لا توجد أي عيوب لاستخدام نسخة HF. س: متى يكون النشاط النجمي مصدر قلق؟ ج: يكون النشاط النجمي مصدر قلق إذا كان ظهور نطاقات إضافية قد يؤدي إلى سوء تفسير النتائج في إجراءات تحديد النمط الجيني وتحليل الطفرات. يمكن أن يعزز التصميم التجريبي النشاط النجمي. من المرجح أن تحتوي أحجام التفاعل الصغيرة على تركيزات من الجلسرين بنسبة 5% أو أكثر، وهي حالة معروفة بزيادة النشاط النجمي. يُلاحظ تركيز جلسرين بنسبة 5% عند تحضير تفاعل هضم مزدوج في حجم 20 ميكرولتر باستخدام 1 ميكرولتر من كل إنزيم. يزداد احتمال ظهور نشاط غير مرغوب فيه في عمليات الهضم التي تُجرى طوال الليل. للاطلاع على نصائح حول تجنب هذا النشاط، يُرجى النقر هنا. س: ما معنى أن يكون الإنزيم مؤهلاً لتقنية Time-Saver™؟ ج: الإنزيمات المؤهلة لتقنية Time-Saver™ تهضم وحدة واحدة من ركيزة الاختبار في غضون 5-15 دقيقة في ظل ظروف التفاعل الموصى بها، ويمكن استخدامها بأمان في عمليات الهضم التي تُجرى طوال الليل. س: كيف يُمكنني تحضير تفاعل هضم باستخدام إنزيمات القطع؟ ج: يتبع معظم الباحثين القاعدة العامة التي تنص على أن 10 وحدات من إنزيمات القطع كافية للتغلب على التباين في مصدر الحمض النووي وكميته ونقائه. بشكل عام، يُضاف 1 ميكرولتر من الإنزيم إلى 1 ميكروغرام من الحمض النووي النقي في حجم نهائي قدره 50 ميكرولتر من محلول NEBuffer المناسب بتركيز 1X، ثم يُحضن المزيج لمدة ساعة واحدة عند درجة الحرارة الموصى بها. في حال استخدام كمية زائدة من الإنزيم، يمكن غالبًا تقليل مدة الحضانة لتوفير الوقت. بدلاً من ذلك، يمكنك إجراء عملية هضم فعالة باستخدام عدد أقل من وحدات الإنزيم لمدة تصل إلى 16 ساعة مع العديد من إنزيمات التقييد. للحفاظ على تركيز الجلسرين أقل من 5% في التفاعل، يجب ألا تتجاوز كمية إنزيم التقييد، المُزوَّد في محلول جلسرين بنسبة 50%، 10% من إجمالي حجم التفاعل. يُعدّ الخلط عنصرًا بالغ الأهمية، ولكنه غالبًا ما يُغفل عنه، في عملية الهضم الناجحة باستخدام إنزيمات التقييد. يجب خلط التفاعل جيدًا لتحقيق هضم كامل. نوصي بسحب خليط التفاعل برفق باستخدام ماصة أو \"نقر\" أنبوب التفاعل. بعد ذلك، قم بتدوير سريع (\"لمسة\") في جهاز طرد مركزي صغير. لا تقم برجّ التفاعل. سؤال: لا أرى أي انقسام بعد عملية الهضم باستخدام إنزيمات التقييد. ما هي العوامل التي قد تؤثر على الانقسام؟ ج: يجب أن يكون تحضير الحمض النووي المراد قطعه خاليًا من الملوثات مثل الفينول، والكلوروفورم، والكحول، وEDTA، والمنظفات، أو الأملاح الزائدة، حيث يمكن أن تتداخل جميعها مع نشاط إنزيمات القطع. يُعد مثيلة الحمض النووي عنصرًا مهمًا في عملية القطع. إذا واجهت صعوبة في قطع ركيزة الحمض النووي، نوصي بإجراء تفاعلات التحكم التالية: حضن الحمض النووي التجريبي بدون إنزيم القطع (يشير تحلل الحمض النووي إلى وجود تلوث في تحضير الحمض النووي أو محلول التفاعل) مع الحمض النووي الضابط (حمض نووي يحتوي على مواقع متعددة معروفة للإنزيم، مثل حمض نووي لامدا أو أدينوفيروس-2) مع إنزيم القطع لتقييم اكتمال التفاعل بدقة أكبر. إذا تم قطع الحمض النووي الضابط بينما قاوم الحمض النووي التجريبي القطع، يمكن مزج الحمضين النوويين لتحديد ما إذا كان هناك مثبط موجود في العينة التجريبية. في حال وجود مثبط (غالبًا ما يكون ملحًا، أو EDTA، أو فينول)، فلن يتم قطع الحمض النووي الضابط بعد المزج. س: كيف يمكنني إنشاء خريطة مواقع إنزيمات التقييد لتسلسلي؟ ج: يتوفر برنامج NEBcutter®، وهو برنامج حاسوبي لرسم خرائط مواقع إنزيمات التقييد، على موقع NEB الإلكتروني في الشريط الجانبي ضمن \"الأدوات المفضلة\". يقبل البرنامج التسلسلات المسترجعة من ملف محلي أو من GenBank. كما يقبل أيضًا تسلسلًا مُدخلًا يُلصق في حقل مُخصص. عند إدخال تسلسل، سيجد NEBcutter أكبر إطارات القراءة المفتوحة داخل التسلسل ويُشير إلى إنزيمات التقييد التي يُمكن استخدامها لاستئصال الجين. كما يُحدد مواقع جميع إنزيمات التقييد التي تقطع مرة واحدة فقط داخل التسلسل المُختار. يُدرك NEBcutter أيضًا معلومات حساسية إنزيمات التقييد للمثيلة، ويُنبه المستخدم إلى المثيلة المتداخلة بواسطة dam وdcm، إلخ. س: ما المعلومات المُتاحة في قاعدة بيانات إنزيمات التقييد (REBASE)؟ ج: قاعدة بيانات إنزيمات التقييد (REBASE)، الموجودة في الشريط الجانبي ضمن \"الأدوات المفضلة\" على موقعنا الإلكتروني، هي قاعدة بيانات شاملة تحتوي على معلومات حول إنزيمات التقييد والبروتينات ذات الصلة. تتضمن مراجع منشورة وغير منشورة، ومواقع التعرف والقطع، والمتماثلات، والتوافر التجاري، وحساسية المثيلة، وبيانات البلورات والتسلسل. كما تشمل أيضًا ناقلات مثيل الحمض النووي، والإنزيمات الداخلية الموجهة، وإنزيمات القطع، ووحدات التخصص، وبروتينات التحكم. ومؤخرًا، أُضيفت ناقلات مثيل الحمض النووي وإنزيمات التقييد المفترضة، كما تم التنبؤ بها من تحليل التسلسلات الجينومية. س: هل يُنصح بالهضم المطول (فترات حضانة تزيد عن ساعة واحدة)؟ ج: يعتمد تعريف وحدة إنزيمات التقييد لدينا على فترة حضانة مدتها ساعة واحدة. يمكن تقصير فترة الحضانة في حال إضافة وحدات إضافية من إنزيم التقييد إلى التفاعل. في المقابل، غالبًا ما تُستخدم فترات حضانة أطول للسماح للتفاعل بالاكتمال باستخدام عدد أقل من وحدات الإنزيم. يعتمد هذا على مدة بقاء الإنزيم (الحفاظ على نشاطه) في التفاعل. بعض الإنزيمات تبقى فعّالة لفترات طويلة (أكثر من 16 ساعة)، بينما لا يبقى البعض الآخر إلا ساعة واحدة أو أقل. لكل إنزيم تقييد، نُحدد الحد الأدنى من الوحدات (1.0، 0.5، 0.25، أو 0.13) اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) خلال 16 ساعة. يمكن استخدام الإنزيمات التي تتطلب أقل من وحدة واحدة بتراكيز أقل لفترات حضانة أطول. تجدر الإشارة إلى أن ركائز الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) تُهضم بمعدلات متفاوتة، وبالتالي يختلف عدد الوحدات اللازمة للهضم الكامل من ركيزة إلى أخرى. يُرجى مراجعة معلومات كل إنزيم تقييد على حدة قبل تمديد فترات التفاعل، حيث يجب استخدام الإنزيمات التي تُظهر نشاطًا غير طبيعي وفقًا للشروط الموصى بها لمنع الانقسام غير التقليدي. سؤال: هل يجب أن تكون مواقع التعرف المتغيرة متناظرة؟ ج: معظم مواقع التعرف على إنزيمات القطع متناظرة وتتضمن أزواج قواعد محددة فقط (مثلًا، EcoRI يتعرف على GAATTC). مع ذلك، تحتوي بعض الإنزيمات على مواقع متغيرة، أي أنها تحتوي على زوج أو أكثر من أزواج القواعد غير المحددة (مثلًا، BsrFI-v2 يتعرف على RCCGGY، حيث R = A أو G و Y = C أو T). بالنسبة للإنزيمات المتغيرة، يمكن أن توجد أي قاعدة ممثلة بالرمز المكون من حرف واحد في أي من موقعي التعرف لحدوث القطع. على سبيل المثال، يتعرف BsrFI-v2 على جميع التسلسلات التالية: ACCGGC، ACCGGT، GCCGGC، GCCGGT. س: اختبرت إنزيم القطع الخاص بكم على الحمض النووي الموصى به من قبل NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبَّط إنزيمات القطع النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و\/أو r3.1 (محاليلنا ذات التركيز الملحي العالي)، بفعل الملح في التفاعل. قد تُنتج إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الملح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. ولمنع ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. هذا الإنزيم غير حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على معلومات مُحدَّثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يتطلب NmeAIII وجود SAM للنشاط؟ ج: نعم، يُعدّ S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) ضروريًا لتحقيق النشاط الأمثل (يُضاف SAM إلى تركيبة الإنزيم اعتبارًا من أكتوبر 2020). إذا لم تكن متأكدًا من وجود SAM في تركيبة الإنزيم، ولديك قارورة من SAM من شركة NEB، فلا بأس من إضافته إلى التفاعل وفقًا للإرشادات السابقة. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نشعر أن الابتعاد عن المنتجات التي تحتوي على مكونات حيوانية هو خطوة في الاتجاه الصحيح، ونحن قادرون على تقديم هذا التحسين بنفس السعر.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835496353961,"sku":"R0711S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-r0711s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}