{"product_id":"neb-t2010s","title":"نيو إنجلاند بيولابس، T2010S، مجموعة تحضير الحمض النووي الريبوزي الكلي المصغرة Monarch®","description":"سيتم إيقاف إنتاج هذا المنتج بحلول أبريل 2026 أو قبل ذلك، ريثما تتوفر الكمية. يتوفر الآن إصدار جديد من هذا المنتج، مزود بأعمدة دوران مطورة. انتقل إلى \u003cb\u003eالفئات ذات الصلة\u003c\/b\u003e الجديدة: استخلاص وتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي، استخلاص وتنقية الحمض النووي الريبوزي، تنقية الأحماض النووية. \u003cb\u003eالأسئلة الشائعة\u003c\/b\u003e : س: هل مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit متوافقة مع كواشف Luna® RT-qPCR؟ ج: نعم. يمكن استخدام الحمض النووي الريبوزي المنقى باستخدام هذه المجموعات في تفاعل RT-qPCR مع جميع مجموعات Luna One-Step RT-qPCR من NEB ومنتجات LunaScript® RT. ينتج تفاعل RT-qPCR للحمض النووي الريبوزي المنقى باستخدام Monarch من أنواع مختلفة من العينات نتائج عالية الجودة باستمرار، مما يسمح بالقياس الكمي الدقيق والقابل للتكرار. ولإثبات جودة وفائدة Monarch Total RNA للقياس الكمي القائم على RT-qPCR، تم إجراء 16 تجربة وعرضها باستخدام أسلوب \"النقاط في المربعات\" الذي طورته NEB. تتضمن كل تجربة ثلاث تفاعلات متكررة لنطاق لوغاريتمي من تركيزات القالب المدخل، بالإضافة إلى عينات تحكم سلبية (NTC) (18 تفاعلًا إجمالًا). تُعرَّف تجربة RT-qPCR عالية الجودة، والمُمثلة بنقطة داخل المربع، بأنها ذات كفاءة تتراوح بين 90 و110%، وقيمة ΔCq ≥ 3 (حيث ΔCq هو الفرق بين متوسط ​​قيمة Cq لعينة التحكم السلبية وأقل تركيز مدخل)، ودرجة جودة ≥ 4 (بناءً على الخطية، وقابلية التكرار، وشكل المنحنى، ومعايير أخرى). استُخدمت بادئات تستهدف متغيرات GAPDH (في الجرذان والفئران والطماطم والخميرة)، ومتغيرات PGK (في الجرذان)، ومتغيرات β-actin (في الجرذان والفئران والطماطم) مع الحمض النووي الريبوزي الكلي المُستخلص من دماغ الجرذان وكبدها وكلى الجرذان وكلى الفئران وأوراق الطماطم والخميرة كقوالب. تم تحضير فحوصات RT-qPCR وفقًا للتعليمات باستخدام كواشف Luna RT-qPCR، وتم تشغيلها على جهاز Bio-Rad CFX384. ينتج عن RT-qPCR على الحمض النووي الريبي المنقى بواسطة Monarch منحنيات qPCR عالية الجودة تُظهر قياسًا كميًا دقيقًا عبر مجموعة واسعة من أنواع العينات. تم تخفيف الحمض النووي الريبي المنقى بواسطة Monarch من دم الإنسان الكامل، وكلى الفئران، وأوراق الطماطم، وخميرة S. cerevisiae لإنتاج نطاق خمسة لوغاريتمات من تركيزات القالب المدخل. تم استخدام البادئات التي تستهدف متغيرات GAPDH (الطماطم، الخميرة)، أو PGK (الفئران)، أو SMG1 (دم الإنسان) لفحوصات RT-qPCR، وتم تحضيرها وفقًا للتعليمات باستخدام كواشف Luna RT-qPCR (NEB #E3005) وتشغيلها على جهاز Bio-Rad CFX384. س: هل مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit متوافقة مع كواشف NEBNext® لتحضير مكتبة الحمض النووي الريبي؟ ج: نعم. يمكن استخدام الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى باستخدام هذه المجموعة لتحضير مكتبات الحمض النووي الريبوزي باستخدام كواشف NEBNext RNA Library Prep من شركة NEB. كما يمكن استخدام الحمض النووي الريبوزي المُنقّى باستخدام Monarch لتحضير مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) عالية الجودة لتحليل التعبير الجيني. تتم مقارنة مستويات النسخ في الحمض النووي الريبوزي المرجعي البشري العالمي (UHRR، من شركة Agilent) قبل وبعد إعادة التنقية باستخدام إما Qiagen RNeasy® أو مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit. لوحظ ارتباط قوي مع UHRR غير المعالج لكلا الطريقتين (معامل ارتباط بيرسون R \u0026gt; 0.99 لكلا العينتين). تُظهر جميع العينات تغطية متسقة من البداية إلى النهاية للنسخ، مما يشير إلى عدم وجود تحلل ملحوظ أثناء التنقية. تم اختيار الحمض النووي الريبوزي المُنتقى متعدد الأدينين (Poly-A RNA) من 100 نانوغرام من عينات غير معالجة، وعينات Qiagen، وعينات Monarch باستخدام وحدة العزل المغناطيسي للحمض النووي الريبوزي الرسول متعدد الأدينين (NEBNext Poly(A) mRNA Magnetic Isolation Module) (NEB #E7490). تم تحضير مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) باستخدام مجموعة NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina® (NEB #E7760) قبل التسلسل على جهاز Miseq® (2 x150). تم أخذ عينات عشوائية من 1.6 مليون قراءة من كل مكتبة، ثم تم تقليم المحولات (Seqprep v1.1). تم تقييم مستويات جميع نسخ Gencode v26 باستخدام Salmon (0.4) ورُسمت أعلاه (اللوحة أ). يُظهر أدناه (اللوحة ب) متوسط ​​تغطية 5'-3' لنسخ Gencode v26 (الذي تم تقييمه بواسطة Picard's CollectRnaSeqMetrics 1.56 بعد ربطه بالجينوم المرجعي GRCh38 باستخدام Hisat v2.0.3 ووضع علامة على النسخ المكررة باستخدام Picard's MarkDuplicates 1.56). س: ما هو أقل حجم يمكنني استخدامه لاستخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010)؟ ج: للحصول على أقصى استخلاص، نوصي باستخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام 50-100 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز لترطيب الغشاء بالكامل. مع ذلك، يوفر الاستخلاص باستخدام 30 ميكرولتر استخلاصًا يزيد عن 80%. يمكنك أيضًا الاستخلاص بحجم أقل للحصول على عينة حمض نووي ريبوزي (RNA) أكثر تركيزًا، ولكن سيقل الاستخلاص. في حال استخدام أقل من 50 ميكرولتر للاستخلاص، من المهم سحب الماء الخالي من النيوكلياز مباشرةً إلى مركز الغشاء أثناء عملية الاستخلاص. نسبة الاستخلاص كدالة لحجم الإذابة لمجموعة Monarch® لاستخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي (NEB #T2010): تم تحميل الحمض النووي الريبوزي الكلي (2 ميكروغرام، معيار الريبوسوم 16S و23S من الإشريكية القولونية، سيغما) على عمود تنقية الحمض النووي الريبوزي Monarch® (NEB #T2007) باتباع بروتوكول تنظيف التفاعل مع معالجة اختيارية بإنزيم DNase I لمجموعة Monarch® لاستخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي (NEB #T2010). أُجريت عمليات الإذابة باستخدام الأحجام المذكورة على ثلاث عينات متطابقة، وحُسبت نسبة الاستخلاص باستخدام قيم التركيز المقاسة بجهاز قياس الطيف الضوئي Nanondrop وتحويلها إلى نسبة مئوية من الكمية المدخلة. س: هل يمكن استخدام مجموعة Monarch® لاستخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي لتنقية الحمض النووي الريبوزي من الخميرة؟ ج: نعم. يمكن استخدام المجموعة لعزل الحمض النووي الريبوزي من الخميرة. يُوصى بالتحلل الميكانيكي والتجانس لهذه العينات التي يصعب تحللها. يمكن الاطلاع على التعليمات في دليل المنتج أو في البروتوكول المتاح عبر الإنترنت. س: هل يمكن استخدام مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit لتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) من البكتيريا؟ ج: نعم. يمكن استخدام المجموعة لعزل الحمض النووي الريبوزي من البكتيريا. يُنصح بالتحليل الميكانيكي والتجانس لهذه العينات التي يصعب تحليلها. يمكن الاطلاع على التعليمات في دليل المنتج أو في البروتوكول المتاح عبر الإنترنت. س: هل يمكن استخدام مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit لتنقية الحمض النووي الريبوزي من النباتات؟ ج: نعم. يمكن استخدام المجموعة لعزل الحمض النووي الريبوزي من أنسجة النبات. يُنصح بالتحليل الميكانيكي والتجانس لهذه العينات التي يصعب تحليلها. يمكن الاطلاع على التعليمات في دليل المنتج أو في البروتوكول المتاح عبر الإنترنت. س: كيف يمكنني حفظ عينتي إذا لم أكن مستعدًا لاستخلاص الحمض النووي الريبوزي مباشرة بعد الحصاد؟ ج: يُعد حفظ العينات خطوة مهمة للحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبوزي. يمكن حفظ العينات باستخدام كاشف Monarch® DNA\/RNA Protection Reagent (NEB #T2011). يمكنك الاطلاع على تعليمات الاستخدام في الدليل أو عبر الإنترنت في قسم \"إرشادات تثبيت العينات وتخزينها باستخدام كاشف حماية الحمض النووي DNA\/RNA من Monarch\". س: هل يمكنني شراء محاليل وأعمدة Monarch® بشكل منفصل؟ ج: تتوفر أعمدة الطرد المركزي من Monarch والعديد من محاليل وكواشف Monarch بشكل منفصل أيضًا. س: ألاحظ وجود الحمض النووي الجينومي في عينات الحمض النووي عند استخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit. ما المشكلة؟ ج: يُعد تلوث الحمض النووي الجينومي شائعًا جدًا في عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA). تُحقق المجموعات التجارية التقليدية نتائج جيدة في تقليل كمية الحمض النووي الجينومي. تستخدم مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit عمودًا خاصًا لالتقاط الحمض النووي الجينومي (NEB #T2017) ومعالجة إنزيمية منفصلة باستخدام إنزيم DNase I على العمود. تُقلل هذه العمليات مجتمعة مستويات الحمض النووي بأكثر من ستة أضعاف. قد يكون إزالة آثار الحمض النووي المتبقية أمرًا صعبًا، وللتطبيقات التي تتطلب ذلك، نقترح معالجة منفصلة باستخدام إنزيم DNase I خارج العمود متبوعة بعملية تنظيف. البروتوكول متاح عبر الإنترنت وفي دليل المنتج. س: هل يمكنني استخدام مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit لتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) بعد المعالجات الإنزيمية؟ ج: نعم، يمكن استخدام هذه المجموعة لتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) بعد المعالجات الإنزيمية، بما في ذلك الوسم ومعالجة DNase I. يمكن الاطلاع على التعليمات في دليل المنتج أو في البروتوكول المتاح عبر الإنترنت. س: هل يمكنني تخطي خطوة معالجة DNase I على العمود في بروتوكول مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit؟ ج: على الرغم من أن معالجة DNase I على العمود اختيارية، إلا أننا نوصي بإدراجها. إذا لم يكن تطبيقك حساسًا لتلوث الحمض النووي (DNA) وكنت تعاني من ضيق الوقت، فيمكنك تخطيها، ولكن من المحتمل أن تلاحظ تلوثًا بالحمض النووي الجينومي (gDNA). س: هل يمكنني تخطي خطوة عمود إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) في بروتوكول مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit؟ ج: لا نوصي بتخطي خطوة عمود إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA). بالإضافة إلى معالجة الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNase I)، يضمن عمود إزالة الحمض النووي الجينومي إزالة فعّالة للحمض النووي الجينومي. يُرجى ملاحظة أن خطوة عمود إزالة الحمض النووي الجينومي لا تُجرى عند العمل مع عينات الدم الكامل. س: هل يُمكنني استخدام ما تبقى من بروتينيز K وDNase I من مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit لتطبيقات أخرى؟ ج: نعم، ولكن تم تحسين التركيبات للاستخدام مع مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit ولم يتم اختبارها في تطبيقات أخرى. س: هل يُمكن استخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010) لتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) من اللعاب؟ ج: نعم. نوصي بتثبيت عينات اللعاب في كاشف حماية الحمض النووي\/الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA\/RNA) من Monarch (NEB #T2011) ومعالجة العينات كما هو موضح هنا. من المهم ملاحظة أن الحمض النووي الريبوزي (RNA) المنقى من اللعاب يكون عادةً متحللاً بقيم RIN تتراوح بين 2.0 و3.0. س: هل يمكن استخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit NEB T2010 لتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مسحات الخد؟ ج: نعم. نوصي بجمع مسحات الخد في محلول Monarch DNA\/RNA Protection Reagent (NEB #T2011) ومعالجة العينات كما هو موضح في هذا البروتوكول. س: هل يمكن استخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010) لتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) من البلازما أو المصل؟ ج: نعم. نوصي بتثبيت 200 ميكرولتر إلى 1 مل من البلازما أو المصل عن طريق مزجها مع حجم مماثل من محلول Monarch DNA\/RNA Protection Reagent (NEB #T2011) بتركيز 2X، واتباع بروتوكول الدم الكامل للثدييات. من المهم ملاحظة أن كمية الحمض النووي الريبوزي (RNA) المستخلصة من البلازما والمصل عادةً ما تكون منخفضة، وتتراوح بين 1 و100 نانوغرام\/مل. يمكن تركيز الحمض النووي الريبوزي (RNA) النقي بسرعة وسهولة باستخدام مجموعة تنقية الحمض النووي الريبوزي من مونارك (10 ميكروغرام) (NEB #T2030). س: هل يمكن استخدام مجموعة تحضير الحمض النووي الريبوزي الكلي المصغرة من مونارك (NEB #T2010) لتنقية الحمض النووي الريبوزي من الدم المُنَوّى (مثل دم الطيور، والأسماك، والزواحف)؟ ج: نعم. نوصي بتثبيت الدم المُنَوّى في كاشف حماية الحمض النووي\/الحمض النووي الريبوزي من مونارك (NEB #T2011) ومعالجة العينات كما هو موضح أدناه. تنقية الحمض النووي الريبوزي من الدم المُنَوّى: أضف 200 ميكرولتر من كاشف حماية الحمض النووي\/الحمض النووي الريبوزي بتركيز 1X إلى 10 ميكرولتر من الدم المُنَوّى. امزج المكونات باستخدام الماصة. أضف 160 ميكرولتر من محلول تفاعل بروتينيز K و4 ميكرولتر من بروتينيز K من مونارك. امزج جيدًا. حضّن المزيج عند 55 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة (ملاحظة: قد تختلف أوقات التحضين المثلى). أضف حجمًا مساويًا من الإيزوبروبانول واخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي. انقل العينة إلى عمود إزالة الحمض النووي الجينومي المزود بأنبوب تجميع، وقم بالتدوير لمدة 30 ثانية؛ تخلص من السائل المار. انقل العمود إلى أنبوب تجميع جديد. أضف 200 ميكرولتر من محلول تحلل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك إلى المادة الأساسية واتركها لمدة 5 دقائق. قم بالتدوير لمدة 30 ثانية. احتفظ بالسائل المار وتخلص من عمود إزالة الحمض النووي الجينومي. أضف حجمًا مساويًا من الإيثانول إلى السائل المار واخلط جيدًا باستخدام الماصة. انتقل إلى الخطوة 4 من الجزء 2: ربط الحمض النووي الريبوزي (RNA) وإذابته في دليل المنتج (تحميل العينة على عمود تنقية الحمض النووي الريبوزي). س: هل يمكن استخدام مجموعة مونارك لتحضير الحمض النووي الريبوزي الكلي المصغر لتنقية الحمض النووي الريبوزي من ذبابة الفاكهة؟ ج: نعم. بالنسبة للحشرات، نوصي بالتحلل الميكانيكي والتجانس في محلول تحلل الحمض النووي الريبوزي من مونارك (NEB #T2012)، متبوعًا بربط الحمض النووي الريبوزي وإذابته كما هو موضح أدناه. تنقية الحمض النووي الريبوزي من ذبابة الفاكهة: انقل ذبابة الفاكهة (حتى 10 ملغ) إلى أنبوب يحتوي على خرز للتجانس، وأضف 800 ميكرولتر من محلول تحلل الحمض النووي الريبوزي من مونارك. قم بتفتيت العينة ميكانيكيًا باستخدام جهاز تجانس الخرز. انقل المحلول\/المتجانس إلى أنبوب طرد مركزي صغير خالٍ من إنزيم RNase. قم بالطرد المركزي لمدة دقيقتين (16000 × g) لترسيب الحطام. انقل السائل الطافي إلى أنبوب طرد مركزي صغير خالٍ من إنزيم RNase. انتقل إلى الخطوة 1 من الجزء 2: ربط الحمض النووي الريبوزي وإذابته في دليل المنتج. سؤال: هل يمكن استخدام مجموعة مونارك لتحضير الحمض النووي الريبوزي الكلي لتنقية الحمض النووي الريبوزي من أجنة\/يرقات سمك الزيبرا؟ جواب: نعم. نوصي بتثبيت الأجنة أو اليرقات في محلول حماية الحمض النووي (DNA\/RNA) من مونارك (NEB #T2011)، ثم إجراء التحلل\/التجانس الميكانيكي والمعالجة كما هو موضح أدناه. تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) من أجنة ويرقات سمك الزيبرا: أضف ما يصل إلى 20 جنينًا أو يرقة إلى 300 ميكرولتر من محلول حماية الحمض النووي (DNA\/RNA) من مونارك 1X، وقم بالخلط لفترة وجيزة، ثم انقل العينة إلى أنبوب يحتوي على خرز للتجانس. قم بتفتيت العينة ميكانيكيًا باستخدام جهاز تجانس الخرز. انقل المستخلص إلى أنبوب طرد مركزي صغير خالٍ من إنزيم RNase. أضف 30 ميكرولتر من محلول تفاعل بروتينيز K و15 ميكرولتر من بروتينيز K من مونارك، واخلط لفترة وجيزة، ثم حضّن عند 55 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. قم بالخلط لفترة وجيزة ثم قم بالطرد المركزي لمدة دقيقتين (16000 × g) لترسيب الحطام. انقل السائل الطافي إلى أنبوب طرد مركزي صغير خالٍ من إنزيم RNase. أضف حجمًا مساويًا من محلول تحلل الحمض النووي الريبوزي (RNA Lysis Buffer) من مونارك، ثم رجّ الخليط لفترة وجيزة. انتقل إلى الخطوة 1 من الجزء 2: ربط الحمض النووي الريبوزي (RNA) وإذابته في دليل المنتج. س: هل يمكن إذابة الحمض النووي الجينومي الملتقط على عمود إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) من مونارك (NEB #T2017) واستخدامه في تطبيقات لاحقة؟ ج: نعم. على الرغم من أن المجموعة لم تُصمم لهذا التطبيق، إلا أنه يمكن إذابة الحمض النووي الجينومي من عمود إزالة الحمض النووي الجينومي لاستخدامه في عمليات أخرى. يُرجى تذكر غسل عمود إزالة الحمض النووي الجينومي بمحلول تحضير الحمض النووي الريبوزي (RNA Priming Buffer)، ثم بمحلول غسل الحمض النووي الريبوزي (RNA Wash Buffer) مرتين، قبل الإذابة بالماء الخالي من النيوكلياز أو محلول TE. لم تقم شركة NEB بتوصيف أو تحسين هذا التعديل على البروتوكول، لذلك لا تتوفر لدينا بيانات حول كفاءة الربط أو نقاء الحمض النووي المُستخلص. س: هل يمكنني تحليل الخلايا الملتصقة مباشرةً في آبارها عند استخدام مجموعة تحضير الحمض النووي الريبوزي الكلي المصغرة من مونارك (Monarch Total RNA Miniprep Kit)؟ ج: نعم. يمكن تعديل بروتوكولنا القياسي لخلايا الثدييات المستزرعة لتحليل الخلايا مباشرةً في آبار صفيحة متعددة الآبار. للمعالجة الفورية: أزل الوسط من البئر واشطفه بمحلول الفوسفات الملحي (PBS). أضف محلول تحليل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك (NEB #T2012) مباشرةً إلى البئر وفقًا للجدول أدناه: حجم صفيحة متعددة الآبار، حجم محلول تحليل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك: 6 آبار \u0026gt; 600 ميكرولتر، 12 بئرًا 300 - 600 ميكرولتر، 24 بئرًا 300 ميكرولتر، 48 بئرًا 300 ميكرولتر. اخلط جيدًا وانتقل إلى الخطوة 1 من الجزء 2: ربط الحمض النووي الريبوزي (RNA) وإذابته. للتخزين: أزل الوسط من الآبار واشطفها بمحلول الفوسفات الملحي (PBS). أضف محلول Monarch DNA\/RNA Protection Reagent بتركيز 1X (NEB #T2011) (مع التأكد من تخفيف المحلول المركز 2X) مباشرةً إلى البئر وفقًا للجدول أدناه: حجم صفيحة الآبار المتعددة، حجم محلول Monarch DNA\/RNA Protection Reagent بتركيز 1X، 6 آبار: \u0026gt;600 ميكرولتر، 12 بئرًا: 300 - 600 ميكرولتر، 24 بئرًا: 300 ميكرولتر، 48 بئرًا: 300 ميكرولتر. اخلط جيدًا واحفظ العينات لحين استخدامها. يمكن تجميد العينات للتخزين طويل الأمد، أو تبريدها أو حفظها في درجة حرارة الغرفة للتخزين متوسط ​​أو قصير الأمد (راجع تعليمات تثبيت العينات وتخزينها أو دليل المنتج لمزيد من التفاصيل). عند الاستعداد للمعالجة، أضف حجمًا مساويًا من محلول Monarch RNA Lysis Buffer (NEB #T2012) وانتقل إلى الخطوة 1 من الجزء 2: ربط الحمض النووي الريبي (RNA) وإذابته. س: أرغب في شراء محتويات مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010S) بشكل منفصل. ما هي المنتجات التي أحتاجها؟ ج: كما هو الحال مع جميع مجموعات تنقية الأحماض النووية من Monarch، فإن الأعمدة ومكونات مجموعة T2010 متوفرة للبيع بشكل منفصل. محتويات المجموعة موضحة أدناه، ولكن يُرجى ملاحظة أن بعض أنواع العينات لا تتطلب جميع المكونات. تجدون أدناه ملخصًا للمنتجات اللازمة لمعالجة أنواع العينات الشائعة، كما يوفر دليل المنتج معلومات تفصيلية حول معالجة مختلف أنواع العينات. المنتجات المطلوبة لمعالجة أنواع العينات المختلفة اسم المنتج NEB # خلايا الثدييات المستزرعة ** أنسجة الدم أو الكريات البيضاء اللعاب + مسحات في وسط النقل مسحات بدون وسط النقل عينات صعبة التحلل كاشف حماية الحمض النووي\/الرنا Monarch®* T2011 ✓ (2X) ✓ (1X) ✓ (2X) ✓ (1X) ✓*** محلول تحلل الرنا Monarch® T2012 ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ أعمدة إزالة الحمض النووي الجينومي Monarch T2017 ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ بروتينيز K + المحاليل المنظمة المرتبطة به مكونات T2019 – مجموعة إنزيمات الرنا الكلي Monarch ✓ ✓ ✓ ✓ ديوكسي ريبونيوكلياز I + المحلول المنظم المرتبط به مكونات T2019 – مجموعة إنزيمات مونارك للحمض النووي الريبوزي الكلي (اختيارية ولكن يُنصح بها لجميع أنواع العينات) أعمدة تنقية الحمض النووي الريبوزي مونارك® T2007 مطلوبة لجميع أنواع العينات محلول تحضير الحمض النووي الريبوزي مونارك® T2013 مطلوب لجميع أنواع العينات محلول غسل الحمض النووي الريبوزي مونارك® T2014 مطلوب لجميع أنواع العينات ماء خالٍ من النيوكلياز B1500 مطلوب لجميع أنواع العينات * يُقدم كاشف الحماية بتركيز 2X. للعينات السائلة (مثل الدم)، استخدم التركيز 2X، وللعينات الأخرى، حضّر تخفيفًا 1X. ** كاشف الحماية غير مطلوب لمعالجة خلايا الثدييات المستزرعة. ومع ذلك، يمكن تثبيت الخلايا وتخزينها في كاشف الحماية، إذا رغبت في ذلك، ثم معالجتها. *** كاشف الحماية مطلوب للتحلل الميكانيكي للعينات صعبة التحلل. لتحليل البكتيريا والخميرة إنزيميًا، لا يلزم استخدام كاشف الحماية. أما بالنسبة للمستخدمين الراغبين في استخدام بروتوكول بروتينيز K لعينات اللعاب، فيلزم أيضًا استخدام كاشف حماية الحمض النووي DNA\/RNA من Monarch وبروتينيز K. س: هل يمكن أتمتة استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام مجموعات Monarch؟ ج: نعم. نجحت شركة NEB في أتمتة استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي (بما في ذلك الحمض النووي الريبوزي الفيروسي) من عينات اللعاب على منصات الأتمتة KingFisher™ Flex باستخدام إجراءات العمل الخاصة بكل من مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010) ومجموعة Monarch RNA Cleanup Kit (NEB #T2040)، مع بعض التعديلات على البروتوكول. عند الأتمتة على منصة KingFisher Flex، لا تُستخدم أعمدة الطرد المركزي؛ بل تُستخدم بدلاً منها خرزات مغناطيسية (مثل خرزات Dynabeads® MyOne™ Silane المغناطيسية). لغرض استخلاص الحمض النووي الريبي الفيروسي، عند استخدام نظام Monarch RNA Cleanup Kit، يلزم إضافة خطوة باستخدام كاشف حماية الحمض النووي\/الرنا من Monarch (NEB #T2011)، والذي يُباع بشكل منفصل. تحتوي بروتوكولاتنا المفصلة على مزيد من المعلومات: أتمتة استخلاص الحمض النووي الريبي من اللعاب باستخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit، وأتمتة استخلاص الحمض النووي الريبي من اللعاب باستخدام مجموعة Monarch RNA Cleanup Kit. سؤال: هل يتم تعطيل فيروس SARS-CoV-2 الحي أثناء الاستخلاص باستخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit؟ جواب: على الرغم من أن شركة NEB لم تتحقق داخليًا من تعطيل الفيروس باستخدام مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit، فقد أكد مستخدمو منتجاتنا أن كلاً من محلول تحلل الحمض النووي الريبي من Monarch (NEB #T2012) وكاشف حماية الحمض النووي\/الرنا من Monarch (NEB #T2011) فعالان في تعطيل فيروس SARS-CoV-2 الحي في ظل ظروف معينة. تُباع مجموعات Monarch للاستخدام البحثي فقط، ويجب على المستخدمين الالتزام دائمًا بإرشادات السلامة الخاصة بمؤسساتهم. س: لاحظتُ أن أعمدة إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) في مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010) (NEB #T2017) أصبحت ملونة باللون البرتقالي. هل يؤثر ذلك على الأداء؟ ج: تم تلوين أعمدة إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) باللون البرتقالي لتسهيل تمييزها عن الأعمدة الأخرى في المجموعة. لا يؤثر اللون الملون على الأداء. اتبع إرشادات الاستخدام الموصى بها، بما في ذلك إرشادات الحد الأقصى للإدخال في الدليل. خزّن الأعمدة الملونة بعيدًا عن الضوء لتجنب بهتان اللون بمرور الوقت. قد توجد اختلافات طبيعية في درجة اللون بين الأعمدة. س: لاحظتُ أنني أبذل جهدًا لإدخال العمود في أنبوب التجميع. هل هذا صحيح؟ ما هي أنابيب التجميع المتوافقة مع الأعمدة؟ ج: يتم توفير أنابيب تجميع مناسبة في جميع مجموعات Monarch® لأعمدة الطرد المركزي. إذا كنت تستخدم أنابيب تجميع خارج المجموعة المحددة، فيُرجى استخدام أنابيب تجميع Monarch® Spin (NEB #T2118). تجنب إدخال أي أعمدة بالقوة في أنابيب تجميع غير مُوصى بها ذات إحكام شديد لتفادي تلف العمود. س: هل أعمدة إزالة الحمض النووي الجينومي Monarch (NEB #T2017) وأعمدة تنقية الحمض النووي الريبوزي Monarch (NEB #T2007) المُضمنة في مجموعة Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010) متوافقة مع نظام QIACube®؟ ج: لا، هذه الأعمدة غير متوافقة مع نظام QIACube. تجنب إدخال الأعمدة بالقوة في نظام QIACube لتفادي تلف النظام و\/أو الأعمدة. س: هل يمكن استخدام مكونات مجموعة Monarch® Total RNA Miniprep Kit القديمة (NEB #T2010) بدلاً من مكونات الإصدار الجديد من المجموعة (Monarch Spin RNA Isolation Kit (Mini), NEB #T2110)؟ ج: نعم، على الرغم من أن الإصدار الجديد من مجموعة عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك سبين (ميني) قد طُوّر بتحسينات على كلٍ من العمود الفيزيائي وتركيب المحلول المنظم، إلا أن مكونات الإصدار السابق متوافقة مع المجموعة المُحدّثة. يُرجى التواصل مع الدعم الفني لشركة NEB في حال الحاجة إلى إرشادات خاصة بكل مكون. س: هل العينات المخزنة في كاشف حماية الحمض النووي (DNA\/RNA) متوافقة مع الإصدار الجديد من المجموعة (مجموعة عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك سبين (ميني)، NEB #T2110)؟ ج: نعم، يمكن معالجة العينات المحفوظة في كاشف حماية الحمض النووي (DNA\/RNA) باستخدام مجموعة عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك سبين (ميني). نوصي بمتابعة التجنيس الميكانيكي و\/أو استخدام بروتينيز K في كاشف حماية الحمض النووي (DNA\/RNA) كما هو مُوصى به في بروتوكول مجموعة تحضير الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) المصغرة من مونارك® (NEB #T2010)، واستبدال إضافة محلول تحلل الحمض النووي الريبوزي (RNA Lysis Buffer) بمحلول مونارك ستابيلايز (Monarch StabiLyse DNA\/RNA Buffer) لمتابعة بروتوكول المجموعة الجديدة. س: لاحظتُ أن منتج T2019L (مجموعة إنزيمات تحضير الحمض النووي الريبوزي الكلي المصغرة من مونارك) قد توقف إنتاجه. ما هي الإنزيمات التي يُمكنني استخدامها بدلاً من مجموعة T2019L؟ ج: يُمكن استخدام بروتينيز K، بدرجة نقاء بيولوجية جزيئية (P8107) مع T2110 كبديل مباشر لبروتينيز K من مونارك (T2001). لا حاجة إلى محلول تفاعل بروتينيز K (T2003) مع P8107، لذا يُمكنك المتابعة بدونه. تُوفر شركة NEB إنزيم ديوكسي ريبونوكلياز I من مونارك، مُجفف بالتجميد (T2104) لمعالجة الحمض النووي ديوكسي ريبونوكلياز I داخل العمود أو داخل الأنبوب. س: كيف يُمكنني تقييم سلامة ونقاء الحمض النووي الريبوزي؟ ج: يُمكن تقييم نقاء عينات الحمض النووي الريبوزي المُستخلصة بسرعة من خلال مراجعة نسب الامتصاص الضوئي التي تم جمعها أثناء قياس الطيف الضوئي الروتيني. عادةً ما يكون للحمض النووي الريبي النقي نسبة امتصاص عند 260\/280 نانومتر تتراوح بين 1.9 و2.1، ونسبة امتصاص عند 260\/230 نانومتر تتراوح بين 2.0 و2.2. تؤثر عوامل عديدة على هذه القيم، مثل استخدام محلول مرجعي مناسب، ودرجة حموضة المحلول المنظم، والملوثات كالبروتينات وأملاح المحلول المنظم والإيثانول، وغيرها. لمزيد من المعلومات حول هذا الموضوع، يُرجى مراجعة قسم تقييم الحمض النووي الريبي. س: هل يُمكنني استخدام بروتينيز K من شركة NEB، بدرجة نقاء بيولوجية جزيئية (NEB #P8107S)، مع مجموعة Monarch® لاستخلاص الحمض النووي الريبي الكلي؟ ج: لا نوصي باستخدام بروتينيز K من شركة NEB مع هذه المجموعة. الإنزيمات الموجودة في المجموعة مُحسّنة للاستخدام في هذا التطبيق. يتوفر بروتينيز K من Monarch للشراء كجزء من حزمة إنزيمات Monarch لاستخلاص الحمض النووي الريبي الكلي (NEB #T2019). س: هل يُمكنني استخدام إنزيم DNase I من شركة NEB (#M0303) مع مجموعة Monarch لاستخلاص الحمض النووي الريبي الكلي؟ ج: لا نوصي باستخدام إنزيم DNase I من شركة NEB مع هذه المجموعة. الإنزيمات المضمنة في المجموعة مُحسَّنة للاستخدام في هذا التطبيق. يتوفر إنزيم Monarch DNase I للشراء كجزء من حزمة إنزيمات Monarch Total RNA (رقم NEB: T2019).","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835485835433,"sku":"T2010S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/ar\/products\/neb-t2010s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}