{"product_id":"neb-c3020k","title":"New England Biolabs, C3020K, NEB® 10-beta E. coli electrocompetente","description":"Suministrado con medio de crecimiento optimizado para NEB 10-beta y NEB Stable Competent \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Clonación Cepas celulares competentes \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e de transformación \u003cb\u003eAntibiótico para selección de plásmidos\u003c\/b\u003e Antibióticos para selección de plásmidos Concentración de trabajo Ampicilina 100 µg\/ml Carbenicilina 100 µg\/ml Cloranfenicol 33 µg\/ml Kanamicina 30 µg\/ml Tetraciclina 15 µg\/ml \u003cb\u003eNotas de envío\u003c\/b\u003e Envíos en hielo seco \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Cómo debo calcular la eficiencia de electrotransformación (C3020)? R: La eficiencia de transformación se define como el número de unidades formadoras de colonias (ufc) que se producirían al transformar 1 µg de plásmido en un volumen dado de células electrocompetentes. Por ejemplo, si una transformación de 10 pg con pUC19 produce 100 colonias cuando se siembran 100 µl de una dilución 1:100, entonces las ufc\/µg son 1,0 x 1010 (100 ufc\/10 pg x 106 pg\/µg x 1 ml\/0,1 ml sembrado x dilución 100). P: ¿Cuáles son las propiedades de la cepa (C3020)? R: Las propiedades de esta cepa que contribuyen a su utilidad como cepa de clonación se describen a continuación. Los genotipos subyacentes a estas propiedades aparecen entre paréntesis. Cribado azul\/blanco: (Φ80 Δ(lacZ)M15 produce el fragmento omega de β-gal; lacX74 elimina el gen β-gal en el cromosoma) pUC19 y plásmidos similares codifican el péptido α de la β-galactosidasa (lacZ). El α-péptido puede combinarse con el fragmento omega de la β-galactosidasa que se transporta en el F' (α-complementación). Cuando la β-galactosidasa se reconstituye de esta manera, puede escindir X-gal y da como resultado colonias azules en una placa de X-gal. Los insertos clonados en el polienlazador plasmídico interrumpen el gen del α-péptido y las colonias son blancas. Recombinación deficiente: (recA) E. coli tiene un sistema de reparación que recombinará secuencias homólogas. Los clones genómicos a menudo tienen regiones duplicadas, y los reordenamientos mediados por RecA pueden ser problemáticos, particularmente cuando las regiones de homología tienen más de 50 pb. Las cepas que son recA- tienden a crecer más lentamente que las cepas recA+. Endonucleasa I deficiente: (endA) El espacio periplásmico de las células de E. coli de tipo silvestre contiene una endonucleasa no específica. Se debe tener mucho cuidado para evitar la degradación de los plásmidos preparados a partir de estas células. La mutación endA elimina esta endonucleasa y puede mejorar significativamente la calidad de las preparaciones de plásmidos. Restricción deficiente: Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC). Las cepas silvestres de E. coli K12 poseen una endonucleasa de restricción que escinde el ADN con los sitios AAC(N6)GTGC y GCAC(N6)GTT. Si bien el ADN de E. coli está protegido de la degradación por una metiltransferasa afín, el ADN extraño se corta en estos sitios. La deleción descrita anteriormente elimina tanto la metilasa como la endonucleasa. Restricción deficiente de metilo: mcrA. Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC). E. coli posee un sistema de enzimas, mcrA, mcrB y mrr, que escinde el ADN con patrones de metilación presentes en eucariotas superiores, así como en algunas cepas vegetales y bacterianas. El ADN derivado de fragmentos de PCR, ADNc o ADN previamente propagado en E. coli no se metilará en estos sitios y no se escindirá. Las tres enzimas Mcr Se han inactivado en NEB 10-beta, lo que permite la introducción de ADN eucariota de origen genómico (p. ej., bibliotecas primarias) si se desea. Resistente al fago T1: (fhuA) T1, un fago extremadamente virulento, requiere el receptor de captación de hidroxamato férrico de E. coli para su infectividad. La eliminación de este gen confiere resistencia a este tipo de fago, pero no afecta significativamente las características de transformación o crecimiento de la célula. P: ¿Qué tipo de células competentes son adecuadas para la transformación de construcciones de ADN creadas mediante el ensamblaje de Gibson? R: Las construcciones de ADN resultantes son compatibles con la mayoría de las células competentes de E. coli. NEB recomienda utilizar NEB 5-alpha Competent E. coli (High Efficiency, NEB #C2987). Si los productos ensamblados superan los 10 kb, NEB recomienda utilizar NEB 10-beta Competent E. coli (High Efficiency, NEB #C3019) o NEB 10-beta Electrocompetent E. coli (NEB #C3020). Si los genes ensamblados contienen secuencias repetitivas, se debe utilizar la cepa NEB Stable Competent E. coli (NEB #C3040). P: ¿Qué tipo de células competentes son adecuadas para la transformación de las construcciones de ADN creadas con la mezcla maestra de ensamblaje de ADN NEBuilder HiFi? R: Las construcciones de ADN resultantes son compatibles con la mayoría de las células competentes de E. coli. NEB recomienda utilizar la cepa NEB 5-alpha Competent E. coli (High Efficiency, NEB #C2987). Si los productos ensamblados superan los 15 kb, NEB recomienda utilizar la cepa NEB 10-beta Competent E. coli (High Efficiency, NEB #C3019) o la cepa NEB 10-beta Electrocompetent E. coli (NEB #C3020). Si los genes ensamblados contienen secuencias repetitivas, se debe utilizar la cepa NEB Stable Competent E. coli (NEB #C3040). ¿No está seguro de qué cepa de clonación elegir? La cepa NEB Cloning Competent E. coli El muestreador (NEB n.° C1010) le permite muestrear 4 de nuestras cepas químicamente competentes más populares. P: ¿Cómo debo almacenar el medio de crecimiento SOC? El SOC que recibí con mis células competentes recomienda almacenarlo a temperatura ambiente o a 4 °C; sin embargo, al comprarlo por separado, recomienda almacenarlo a 4 °C. ¿Cuál es mejor? R: El medio SOC se puede almacenar a 4 °C o a temperatura ambiente, dependiendo de la rapidez con la que se vaya a usar. Almacenar a temperatura ambiente es conveniente y adecuado para usos a corto plazo (de semanas a un par de meses). Para almacenamiento a largo plazo, recomendamos almacenarlo a 4 °C. Tenga en cuenta que el medio de crecimiento 1.5 suministrado con NEB n.° C2987R (formato de placa de 1 x 384 pocillos) solo debe almacenarse a temperatura ambiente o se formarán cristales. P: ¿Cómo debo almacenar el medio de crecimiento NEB 10-beta\/estable? R: El medio de crecimiento NEB 10-beta\/estable se puede almacenar a 4 °C o temperatura ambiente, dependiendo de la rapidez con la que se vaya a usar. El almacenamiento a temperatura ambiente es conveniente y adecuado para usos a corto plazo (de semanas a un par de meses). Para almacenamiento a largo plazo, recomendamos almacenar a 4 °C. P: ¿Cómo se deben preparar los fragmentos para el ensamblaje con NEBuilder HiFi? R: Los fragmentos se pueden preparar mediante los siguientes métodos: Los fragmentos generados por PCR se pueden limpiar utilizando la columna Monarch PCR o el kit de limpieza rápida de PCR Exo-CIP si la pureza del amplicón es superior al 95 %. Si se utilizó ADN plasmídico como plantilla durante la PCR, se puede eliminar mediante tratamiento con DpnI si es necesario. Si se observan múltiples bandas, se recomienda optimizar la PCR. Si esto no es posible, se recomienda la purificación en gel. La extracción en gel puede introducir tiocianato de guanidina (del tampón de disolución), lo que puede reducir la eficiencia de la reacción de ensamblaje. Para minimizar esta contaminación, recorte el corte de gel para poder utilizar una menor cantidad de tampón de disolución. Se puede realizar la digestión con enzimas de restricción de un plásmido seguida de... Inactivación térmica o purificación en columna. Los fragmentos comercialmente ordenados pueden resuspenderse en agua sin nucleasas o tampón TE y usarse directamente en la reacción de ensamblaje.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835541278889,"sku":"C3020K","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-c3020k","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}