{"product_id":"neb-e3321s","title":"New England Biolabs, E3321S, Kit de detección de mutaciones EnGen®","description":"\u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Validación de la edición genética basada en CRISPR, Enzimas reparadoras de ADN y endonucleasas específicas de la estructura \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eMateriales necesarios pero no suministrados\u003c\/b\u003e Cebadores de oligodesoxirribonucleótidos para PCR Tubos o tiras de reacción de PCR Agua libre de nucleasas Termociclador Puntas de aerosol para PCR \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Por qué veo una banda adicional cuando corro el heterodúplex sin digerir en un gel de agarosa? R: En algunos casos, el ADN heterodúplex sin digerir se ejecutará ligeramente más lento que el ADN homodúplex. Dependiendo de la composición de las mutaciones, esto a veces se puede ver como una banda que corre por encima del homodúplex en un gel de agarosa. P: ¿Por qué veo muy poco ADN en mi gel o baja señal en el analizador de fragmentos? R: Verifique que el rendimiento de la reacción de PCR fue suficiente antes de continuar con la digestión y el análisis. Realice la reacción de control para asegurarse de que el kit esté funcionando correctamente. P: ¿Reconocerá la EnGen® T7 Endonuclease I los desajustes de una sola base y las inserciones o deleciones de una sola base (indels)? R: La Endonuclease T7 no reconoce eficazmente los indels ni los desajustes de menos de dos bases. P: ¿Se pueden utilizar lisados ​​celulares en la reacción de PCR? R: Hemos probado con éxito el extracto crudo preparado con QuickExtract™ (Epicentre n.° QE09050) y DNAzol® Direct (Molecular Research Center, INC n.° DN 131). No recomendamos el uso de otros reactivos. Se incluyen reactivos de PCR adicionales para optimizar la amplificación. P: ¿Cuáles son los resultados esperados utilizando el control incluido? R: La mezcla de plantilla de control y cebador incluida contiene dos plásmidos que, al amplificarse, producirán amplicones con y sin una inserción de 10 pb. Los cebadores incluidos en esta mezcla amplificarán una región de ~600 pb alrededor de esta inserción. Tras la desnaturalización y la reasociación de estos productos de PCR, algunos formarán heterodúplex. La endonucleasa I T7 detectará los heterodúplex y los cortará para producir fragmentos de ~200 pb y ~400 pb. Los fragmentos se pueden detectar mediante electroforesis en gel de agarosa estándar o utilizando analizadores de fragmentos. P: El rendimiento de mi reacción de PCR es bajo, ¿puedo agregar más de 5 µl de la reacción de PCR a la reacción de digestión? R: La digestión ha sido optimizada para su uso con hasta 5 µl de reacción de PCR sin purificar. Agregar más de 5 µl de la reacción de PCR podría interferir con la reacción de digestión. Recomendamos optimizar la reacción de PCR para obtener un mayor rendimiento o concentrar la reacción de PCR mediante purificación en columna utilizando el kit NEB Monarch PCR \u0026amp; DNA Cleanup (5 μg) (NEB #T1030). P: ¿Hay un precipitado en el fondo del tubo de Master Mix? ¿Es esto normal? R: Q5® Master Mix puede precipitar al congelar y descongelar. Esto no indica un problema con el producto. Para un rendimiento óptimo, descongele completamente y resuspenda cualquier precipitado calentándolo a temperatura ambiente e invirtiéndolo suavemente hasta que se disuelva por completo.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835500646569,"sku":"E3321S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-e3321s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}