{"product_id":"neb-g8024l","title":"New England Biolabs, G8024L, nucleasa activa de sal NEBExpress®, grado GMP","description":"\u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Herramientas para proteínas,, Enzimas modificadoras de ADN y tecnologías de clonación \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e Purificación de proteínas,, Herramientas de análisis de proteínas,, \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e de expresión de proteínas \u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para liberar 32 pmol de FAM del oligonucleótido de horquilla marcado con FAM-BHQ1 en 1 minuto a 25 °C en una reacción de 50 µL en 25 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 0,005% Tween 20 (pH 8,5 a 25 °C). \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e Tris-HCl 25 mM NaCl 500 mM MgCl2 5 mM Glicerol al 50% pH 7,5 a 25 °C \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: Veo que NEB ofrece dos versiones de NEBExpress® Salt Active Nuclease. ¿Cuál es la diferencia entre la nucleasa activa salina NEBExpress (NEB #M0764) y la nucleasa activa salina NEBExpress, grado GMP (NEB #G8024)? R: La nucleasa activa salina NEBExpress, grado GMP se fabrica según los estándares de calidad GMP* de New England Biolab para garantizar una documentación de calidad rigurosa y cumplir con las necesidades de fabricación, e incluye pruebas adicionales como la de endotoxinas y carga microbiana. Ambas enzimas son enzimáticamente idénticas y están formuladas en el mismo tampón. Sin embargo, la nucleasa activa salina NEBExpress, grado GMP (NEB #G8024) se ofrece a una concentración diez veces mayor, 1 000 000 U\/ml (1 mg\/ml), para minimizar la dilución del cultivo celular\/muestra, en comparación con la nucleasa activa salina NEBExpress (NEB #M0764), que se ofrece a 100 000 U\/ml. P: ¿Puedo solicitar la nucleasa activa salina NEBExpress®, grado GMP (NEB n.° G8024) en un volumen mayor o con una concentración diferente? R: Sí. Para solicitar la nucleasa activa salina NEBExpress®, grado GMP (NEB n.° G8024) en un tamaño mayor o en un formato personalizado, contacte con nuestro equipo de Soluciones Personalizadas. P: ¿Cuáles son las ventajas de trabajar con un tampón con alto contenido de sal? R: Realizar un proceso de purificación con alto contenido de sal (≥ 200 mM NaCl) permite que las impurezas (ácidos nucleicos) se desprendan de las proteínas o los virus al interrumpir las interacciones electrostáticas entre estas moléculas. Un alto contenido de sal también puede mejorar la solubilidad de las proteínas cuando la agregación se debe a interacciones electrostáticas. Por estas razones, muchos métodos de bioprocesamiento requieren un alto contenido de sal. La nucleasa activa salina NEBExpress® se puede utilizar directamente en estas condiciones para mitigar aún más los problemas de alta viscosidad, reducir la contrapresión o eliminar el ácido nucleico. P: ¿Tiene la nucleasa activa salina NEBExpress® la misma eficiencia que la nucleasa de Serratia marcescens? R: No. La nucleasa activa salina NEBExpress es más activa (aproximadamente 4 veces, normalizada a la misma concentración) que la nucleasa de Serratia marcescens en ADN y ARN cuando se utiliza en un tampón con NaCl\/KCl ≥ 300 mM. P: ¿Cómo se compara la definición de unidad de la nucleasa activa salina NEBExpress® con la de otras nucleasas activas salinas similares? R: Aunque las condiciones del ensayo de definición de unidad de la nucleasa activa salina NEBExpress difieren (temperatura, sustrato y tampón) de las de otras nucleasas similares del mercado, estimamos que la nucleasa activa salina NEBExpress es hasta dos veces más activa que otras nucleasas salinas. Para cambiar de otra nucleasa salina a la nucleasa activa salina NEBExpress, recomendamos probar una sustitución 1:1 basada en las unidades. P: ¿Puedo usar la nucleasa activa salina NEBExpress® en un tampón con bajo contenido de sal? R: Sí. La nucleasa activa salina NEBExpress conserva el 60 % de su actividad con 250 mM de NaCl o KCl y el 15 % sin sal. Dependiendo de la aplicación (reducción de la viscosidad, degradación parcial o total de ácidos nucleicos), puede ser necesario aumentar la concentración de la enzima y el tiempo de incubación con bajo contenido de sal. P: ¿Es la nucleasa activa salina NEBExpress® compatible con columnas de afinidad como IMAC? R: La nucleasa activa salina NEBExpress no está marcada y puede usarse para purificar proteínas marcadas, como una proteína marcada con His mediante IMAC. P: ¿Puedo eliminar la nucleasa activa salina NEBExpress® de mi muestra? R: Sí. La nucleasa activa salina NEBExpress se une firmemente a una columna de intercambio catiónico debido a su alto pI y, por lo tanto, puede eliminarse fácilmente mediante captura en una resina de intercambio catiónico (se recomiendan las resinas Source 30S, SP HP y POROS 50HS). P: Después de su uso, ¿cómo puedo inactivar la nucleasa salina activa NEBExpress®? R: La nucleasa salina activa NEBExpress® se puede inactivar mediante uno de los siguientes métodos: Inactivación térmica: Incubar a 65 °C durante 2 h, a 80 °C durante 1 h o a 95 °C durante 20 min. Inactivación química: Añadir \u0026gt; 10 mM de EDTA, o SDS al 0,5 % o \u0026gt; 20 mM de TCEP. Inactivación química y térmica: Añadir 1 mM de DTT e incubar a 55 °C durante 30 min. Degradación enzimática: Añadir proteinasa K (NEB n.° P8107S) o proteinasa K termolábil (NEB n.° P8111S). P: ¿En qué se diferencian la nucleasa salina activa NEBExpress® y la DNasa I-XT (NEB n.° M0570)? R: La nucleasa activa salina NEBExpress degrada ADN y ARN, mientras que la DNasa I-XT solo degrada ADN. Es activa entre 0 y 1000 mM de concentración de sal (óptima a 500 mM), mientras que la DNasa-I XT ha sido diseñada para ser activa entre 0 y 300 mM de sal. Además, la nucleasa activa salina NEBExpress se puede eliminar fácilmente en una sola columna, ya que se une muy eficientemente a la resina de intercambio catiónico. P: ¿Cuál es el peso molecular de la nucleasa activa salina NEBExpress®? R: La nucleasa activa salina NEBExpress tiene un peso molecular de aproximadamente 25 kDa. P: ¿Está glicosilada la nucleasa activa salina NEBExpress®? R: No. La nucleasa activa salina NEBExpress se produce a partir de E. coli y, por lo tanto, no está glicosilada, presentándose como una sola banda de aproximadamente 25 kDa en un gel de proteínas.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835491274921,"sku":"G8024L","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-g8024l","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}