{"product_id":"neb-m0204l","title":"New England Biolabs, M0204L, T4 ARN ligasa 1 (ssRNA ligasa)","description":"También hay disponible una versión de alta concentración (30 000 unidades\/ml) de esta enzima, T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase), Alta concentración ( \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eAplicaciones de\u003c\/b\u003e ligadura de ARN Clonación de ARN \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eMateriales necesarios pero no suministrados\u003c\/b\u003e Agua libre de nucleasas (NEB n.º B1500) Inhibidor de ARNasa, murino (NEB n.º M0314) (opcional) \u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para convertir 1 nanomol de rA16 marcado con fluorescencia en una forma resistente a la fosfatasa en 30 minutos a 37 °C. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e 1X tampón de reacción de T4 RNA Ligase Suplemento con 1 mM de ATP Incubar a 25 °C 1X tampón de reacción de T4 RNA Ligase 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT (pH 7,5 a 25 °C) \u003cb\u003eAlmacenamiento Tampón\u003c\/b\u003e Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 65 °C durante 15 minutos \u003cb\u003eCondiciones del ensayo unitario\u003c\/b\u003e Se mezcla tampón de reacción de la ARN ligasa T4 1X, suplementado con ATP 1 mM, con el sustrato de ARN (10 µM de rA16 marcado con fluorescencia) y cantidades variables de enzima. La incubación se realiza a 37 °C durante 15 minutos (8). Concentración: 10 000 unidades\/ml \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Cuál es la temperatura y el tiempo de reacción óptimos para la ARN ligasa T4 I? R: En general, un mayor tiempo de reacción y una menor temperatura de reacción producen reacciones de ligadura más completas. Una reacción de ligadura típica debe llevarse a cabo a 25 °C durante un máximo de 2 horas. Para oligos más largos, 2 horas de incubación a 25 °C seguidas de una incubación durante la noche a 16 °C puede mejorar el rendimiento. P: ¿Se puede usar la ARN ligasa 1 de T4 para marcar los extremos de ADN o ARN monocatenario? R: La ARN ligasa 1 de T4 se puede usar para marcar el extremo 3' del ARN monocatenario. La transferasa terminal (#M0315) se puede usar para marcar el extremo 3' del ADN monocatenario. La T4 PNK (#M0201) se puede usar para marcar el extremo 5' del ADN monocatenario. P: ¿La ARN ligasa 1 de T4 ligará el ADN bicatenario? R: No, no significativamente. Contrariamente a los primeros informes, la ARN ligasa 1 de T4 no mejora significativamente la ligadura de extremos romos cuando se usa con la ADN ligasa 1 de T4. (1). (1) Sugino, A. et al. (1977) J. Biol. Chem. 252, 3987-3994. P: ¿Cuál es la causa más común de fallo de ligadura cuando se usa la ARN ligasa 1 de T4? R: La estructura secundaria del ARN que protege los extremos puede inhibir la ligadura. La adición de DMSO al 10 % (v\/v) puede aumentar la ligadura en estos casos. P: ¿Por qué el nuevo tampón de reacción de la ARN ligasa T4 no contiene ATP? R: Para ofrecer a los clientes mayor flexibilidad en el uso de este producto, ahora ofrecemos soluciones de ATP 10 mM y PEG8000 al 50 % como componentes separados del tampón enzimático. El tampón de reacción de la ARN ligasa T4 (NEB n.° B0216) también es compatible con la ARN ligasa T4 2 truncada (NEB n.° M0242) y la ARN ligasa T4 2 truncada K227Q (NEB n.° M0351). P: ¿La reacción de ligadura con la ARN ligasa T4 1 producirá círculos o productos dúplex? R: La reacción puede producir ambos. La unidad se define por la producción de círculos utilizando rA-20mer como sustrato. Aumentar la concentración y la longitud, y añadir PEG, puede aumentar el número. de ligaduras intermoleculares. Bloquear un extremo de la molécula con un terminador didesoxi evitará que la molécula forme un círculo. P: ¿Se puede usar la ARN ligasa 1 de T4 para crear híbridos de ARN\/ADN monocatenarios? R: Sí. P: ¿Puede la ARN ligasa 1 de T4 ligar trifosfatos? R: No. Sin embargo, el ARN se puede tratar primero con CIP para eliminar el trifosfato y luego con una quinasa para añadir un solo fosfato. Los fragmentos que contienen estos monofosfatos 5' se pueden ligar mediante la ARN ligasa 1 de T4. P: ¿Se puede usar la ARN ligasa 1 de T4 para añadir colas al ADN dúplex lineal? R: Sí, los oligos de ARN se pueden ligar a ADN dúplex de extremo romo o cohesivo. Los oligos de ADN se ligan a una velocidad muy reducida (3). (3) Higgins, NP et al. (1979) NAR 6, págs. 1013-1024. P: ¿Puede un didesoxi ¿Se puede usar para bloquear la ligadura con la ARN ligasa 1 de T4? R: Sí (2). (2) Troutt, AB, et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, págs. 9823-9825. P: ¿Se puede usar la ARN ligasa 1 de T4 para incorporar aminoácidos artificiales a las proteínas? R: Sí, véase la referencia Noren, CJ et al. (1989) Science 244, 182-188. P: ¿Mejorará el PEG la ligadura con la ARN ligasa 1 de T4? R: Sí (4), el tampón del kit de ligadura rápida (NEB n.° M2200) se puede usar con la ARN ligasa 1 de T4. (4) Harrison, B. y Zimmerman, SB, (1984) NAR 12, 8235-8251. P: ¿La ARN ligasa 1 de T4 ligará el ADN monocatenario? R: Sí. La reacción es Más lento que el ARN\/ARN o el ARN\/ADN. Por ejemplo, los cebadores pueden ligarse al ADNc (2). (2) Troutt, AB, et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, págs. 9823-9825. P: ¿Está disponible el PEG 8000 para su compra? R: El PEG 8000 se incluye como componente del tampón de reacción de la ARN ligasa T4 (NEB n.° B0216). P: ¿Cuál es la tolerancia a la sal de esta ARN ligasa? R: NEB n.° ARN ligasa Tolerancia a la sal M0204 ARN ligasa T4 1 (ssRNA ligasa) ≤ 50 mM M0239 ARN ligasa T4 2 (dsRNA ligasa) ≤ 50 mM M0242 ARN ligasa T4 2, truncada ≤ 100 mM M0351 T4 ARN ligasa 2, trunc. K277Q ≤ 100 mM M0373 T4 ARN ligasa 2, trunc. KQ ≤ 100 mM M0375 SplintR Ligasa ≤ 50 mM E2610 5' Adenylation Kit (Mth Ligasa) ≤ 300 mM M0319 Termoestable 5' App ADN\/ARN Ligasa ≤ 50 mM","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835516309673,"sku":"M0204L","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-m0204l","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}