{"product_id":"neb-m0211s","title":"New England Biolabs, M0211S, EcoRI Metiltransferasa","description":"\u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Metiltransferasas para epigenética, enzimas modificadoras de bases \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eUnidad Definición\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para proteger 1 μg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 10 μl contra la escisión por la endonucleasa de restricción EcoRI \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e Suplemento de tampón rCutSmart™ 1X con 80 µM de S-adenosilmetionina (SAM) Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg\/ml (pH 7,9 a 25 °C) \u003cb\u003eEnsayo de protección de control\u003c\/b\u003e El tampón rCutSmart se incuba con 1 µg de ADN λ en 10 μl de 1X EcoRI Tampón de metiltransferasa, suplementado con 80 µM de S-adenosilmetionina, durante una hora a 37 °C, seguido de 15 minutos a 65 °C. El grado de protección de la metiltransferasa EcoRI se determina añadiendo 40 µl de tampón rCutSmart suplementado con 10 mM de MgCl₂ y 5 unidades de endonucleasa de restricción EcoRI. Tras la incubación a 37 °C durante 30 minutos, se realiza el análisis en un gel de agarosa. \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 100 mM KPO4 200 mM NaCl 10 mM β-ME 0,1 mM EDTA 200 µg\/ml BSA 50% Glicerol pH 7,4 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 65 °C durante 20 minutos \u003cb\u003ePeso molecular\u003c\/b\u003e teórico: 37911 daltons \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Se suministra S-adenosilmetionina (SAM) con la metiltransferasa? R: Sí, se proporciona una solución madre a 32 mM. También se puede pedir por separado como producto NEB n.º B9003S. La SAM es el componente más lábil de la reacción. Si la solución madre tiene más de 9 meses, debe reemplazarse. P: ¿Qué se debe tener en cuenta si la metilación no se completa? R: La SAM es el componente más lábil de la reacción. Si la solución madre tiene más de 6 meses, debe reemplazarse. P: ¿Se puede inactivar la EcoRI metiltransferasa por calor? R: Sí. Inactivar a 65 °C durante 20 minutos. P: ¿Requiere MgCl₂ la EcoRI metiltransferasa? R: No. P: ¿Bloqueará la metilación de EcoRI la enzima de restricción ApoI? R: ApoI (RAATTY) no corta en los sitios EcoRI si están metilados, pero sí escinde el subconjunto de sitios que no son sitios EcoRI. P: ¿Funcionan las metiltransferasas NEB (metilasas) en el ARN? R: Sí, la EcoGII metiltransferasa (NEB #M0603) produce entre un 5 % y un 10 % de residuos de adenosina metilados en sustratos de ARN. Sin embargo, otras metiltransferasas no lo hacen. Tenga en cuenta: NEB ha probado las siguientes transferasas\/metilasas (MT): dam metiltransferasa (NEB #M0222), AluI metiltransferasa (NEB #M0220), BamHI metiltransferasa (NEB #M0223), M.SssI metiltransferasa (NEB #M0226), EcoRI metiltransferasa (NEB #M0211), M.CviPI metiltransferasa (NEB #M0227), HaeIII metiltransferasa (NEB #M0224), HhaI metiltransferasa (NEB #M0217), HpaII metiltransferasa (NEB #M0214), MspI metiltransferasa (NEB #M0215) y TaqI metiltransferasa (NEB #M0219) utilizando sus tampones de reacción suministrados en dos sustratos: 1) Un ARNm transcrito in vitro que codifica la luciferasa de luciérnaga (1 µg) y 2) ARN HeLa total (250 ng). Cada sustrato se incubó con dos cantidades de enzima (1 y 5 µl) durante 1 hora a 37 °C (65 °C para Taq I MT), se purificó mediante una columna de centrifugación, se digirió a nucleósidos individuales mediante un cóctel de enzimas y se analizó por LC\/MS para identificar residuos modificados y no modificados. Ninguna de las metilasas examinadas logró transferir un grupo metilo a los sustratos de ARN examinados.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835515457705,"sku":"M0211S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-m0211s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}