{"product_id":"neb-m0302s","title":"New England Biolabs, M0302S, Endonucleasa I T7","description":"\u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Validación de la edición genética basada en CRISPR, Exonucleasas y endonucleasas no específicas, Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e Amplificación del genoma completo y amplificación por desplazamiento múltiple \u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e \u003cb\u003ede especificación\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para convertir \u0026gt; 90% de 1 μg de pUC(AT) cruciforme superenrollado a \u0026gt; 90% de forma lineal en un volumen de reacción total de 50 μl en 1 hora a 37 °C. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e 1X NEBuffer™ 2 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 2 50 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT (pH 7,9 a 25 °C) \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 20 mM Tris-HCl 200 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % Glicerol 0,15 % Triton® X-100 pH 7,5 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e No \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Hay alguna forma de inactivar la endonucleasa I T7? R: Sí, para inactivar la endonucleasa I T7, recomendamos usar proteinasa K e incubar a 37 °C durante 5 minutos. Consulte el protocolo: \"Detección de mutaciones basada en la endonucleasa I T7 con el kit de detección de mutaciones EnGen®\" para obtener más detalles. P: ¿Reconoce la endonucleasa T7 I los desajustes de un solo par de bases? R: Aunque la endonucleasa T7 I tiene actividad en el ADN desajuste, no es una enzima ideal para escindir todos los desajustes de un solo par de bases en el ADN heterodúplex. Dependiendo de los desajustes en su experimento, puede observar diferentes eficiencias de escisión (Guan, C. et al. (2004) Biochemistry, 43, 4313-4322). La endonucleasa T7 I puede no ser la mejor opción para detectar desajustes de composición desconocida. Sin embargo, si se sabe que su desajuste contiene C, puede usar esta enzima para su ensayo. Recomendamos titular la enzima para optimizar la escisión. P: ¿Qué aditivos comunes inhiben la endonucleasa T7 I? R: La endonucleasa T7 I requiere Mg2+ o Mn2+ para su actividad. Un agente quelante, como el EDTA, inhibirá la reacción. P: ¿Cuál es el peso molecular de la endonucleasa T7 I? R: La endonucleasa I T7 suministrada está fusionada a la proteína de unión a maltosa de E. coli. El peso molecular de toda la proteína de fusión es de 60.302 daltons. P: ¿Qué reactivos de PCR recomiendan para la amplificación de ADN en ensayos de detección de desajustes de edición genómica (CRIPSR\/Cas9, TALEN, ZFN)? R: Recomendamos la ADN polimerasa de alta fidelidad Q5® con tampón de reacción Q5® o la mezcla maestra 2X de alta fidelidad Q5 Hot Start debido a la alta fidelidad y robustez de las ADN polimerasas Q5. El kit de detección de mutaciones EnGen proporciona reactivos para la detección de eventos de edición genómica en el objetivo. El kit viene con enzimas optimizadas (incluidos reactivos de PCR), protocolos e incluye un control. Notas: La endonucleasa I T7 es una enzima selectiva de la estructura. Actúa en una variedad de sustratos de ADN con diferentes actividades específicas. Es importante controlar la cantidad de enzima y el tiempo de reacción utilizados para la escisión de un sustrato en particular. Las temperaturas superiores a 42 °C provocan un aumento de la actividad de las nucleasas inespecíficas y deben evitarse. pUC(AT) se deriva de pUC19 con una modificación del polienlazador entre el sitio EcoRI y el sitio PstI. P: ¿Puedo utilizar ensayos de detección de desajustes de la endonucleasa I de T7 (CRIPSR\/Cas9, TALEN, ZFN) utilizando productos de PCR sin purificar? R: Recomendamos utilizar de 1 a 4 μL de la reacción de PCR adecuada directamente en una reacción de 50 μL de la endonucleasa I de T7 cuando se utilizan los siguientes reactivos de PCR: -Q5® ADN polimerasa de alta fidelidad con tampón de reacción Q5® -OneTaq® ADN polimerasa. En estas condiciones, la purificación de los productos de PCR antes de la digestión con la endonucleasa I de T7 es opcional. Para la purificación de los productos de PCR, recomendamos el kit Monarch PCR \u0026amp; DNA Cleanup. P: ¿Puedo utilizar la endonucleasa I de T7 para aplicaciones de edición genómica? R: Sí. La endonucleasa T7 I se puede utilizar para detectar la formación de indeles (eventos de edición en el objetivo) en flujos de trabajo de edición genómica. El kit de detección de mutaciones EnGen® proporciona reactivos para la detección de eventos de edición genómica en el objetivo. El kit contiene la endonucleasa T7 I en una formulación optimizada, así como los reactivos de PCR, el sustrato de control y los protocolos necesarios. La endonucleasa T7 I también se puede adquirir como reactivo independiente. Consulte este protocolo al utilizar este producto. P: ¿Cuál es el peso molecular de la endonucleasa T7 I? R: La endonucleasa T7 I suministrada está fusionada a la proteína de unión a maltosa de E. coli. El peso molecular de la proteína de fusión completa es de 60.302 daltons. P: ¿Qué reactivos de PCR recomiendan para la amplificación de ADN en ensayos de detección de desajustes de edición genómica (CRIPSR\/Cas9, TALEN, ZFN)? R: Recomendamos la ADN polimerasa de alta fidelidad Q5® con tampón de reacción Q5® o la mezcla maestra Q5 Hot Start de alta fidelidad 2X. La alta fidelidad y robustez de la ADN polimerasa Q5 la convierten en una excelente opción para este ensayo. El kit de detección de mutaciones EnGen® proporciona reactivos para la detección de eventos de edición genómica en el objetivo. El kit incluye enzimas optimizadas (incluidos reactivos de PCR), protocolos e incluye un control.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835532300457,"sku":"M0302S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-m0302s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}