{"product_id":"neb-m0523s","title":"New England Biolabs, M0523S, ARNasa H termoestable","description":"La ARNasa termoestable H reconoce y escinde específicamente los enlaces fosfodiéster de una cadena de ARN en un híbrido ARN-ADN, dejando intacta la cadena de ADN. Esta nucleasa termoestable exhibe las mismas propiedades enzimáticas que las ARNasas \u003cb\u003ede categorías relacionadas\u003c\/b\u003e , síntesis de ADNc y transcriptasas inversas, \u003cb\u003eaplicaciones,\u003c\/b\u003e amplificación mediada por transcripción y NASBA, síntesis de ADNc, PCR. \u003cb\u003eEspecificación:\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eDefinición de la unidad\u003c\/b\u003e : Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir 1 nmol de ribonucleótidos a partir de 40 pmol de un híbrido ARN:ADN de 25 pares de bases marcado con fluorescencia en un volumen total de reacción de 50 μl en 20 minutos a 50 °C. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e Tampón de reacción 1X RNase H Incubar a ≥50 °C Tampón de reacción 1X RNase H 50 mM Tris-HCl 75 mM KCl 3 mM MgCl2 10 mM DTT (pH 8,3 a 25 °C) \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 50 mM Tris-HCl 100 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 0,1 % Triton® X-100 50 % Glicerol pH 7,5 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e No \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: Cuando descongelo el tampón de reacción 10X RNase H, veo un precipitado blanco. ¿Qué es y qué debo hacer al respecto? R: El precipitado blanco es DTT en el tampón 10X y se resuspenderá cuando se descongele y se mezcle. El tampón resuspendido es completamente funcional para su uso previsto. P: ¿Cuál es la diferencia entre la ARNasa H de E. coli (NEB #M0297) y la ARNasa H termoestable (NEB #M0523)? R: Tanto la ARNasa H termoestable como la ARNasa H de E. coli escinden el ARN en una molécula híbrida de ADN:ARN, dejando el ADN intacto; no escinden ARN ni ADN monocatenarios ni bicatenarios. Sin embargo, la ARNasa H termoestable es activa en un rango de temperatura más amplio que la enzima de E. coli, con una actividad óptima a 65 °C y un rango de actividad de 37 °C a 95 °C. P: ¿Qué lado de la base del ARN corta la ARNasa H termoestable? R: Al igual que la ARNasa H de E. coli, la ARNasa H termoestable actúa como una endorribonucleasa y escinde el enlace fosfodiéster del ARN, generando hidroxilos 3' y fosfatos 5'. P: ¿Cuál es la temperatura de reacción óptima para la ARNasa H termoestable? R: La ARNasa H termoestable es activa en un amplio rango de temperaturas (37 °C–95 °C). La actividad dependerá de la Tm del sustrato híbrido ARN:ADN y de la capacidad del sustrato para permanecer bicatenario a la temperatura de reacción seleccionada. P: ¿Es activa la ARNasa H termoestable en otros tampones? R: La ARNasa H termoestable requiere Mg₂ para su actividad; por lo tanto, los tampones que contienen MgCl₂ pueden ser adecuados para las reacciones con ARNasa H termoestable. El tampón de reacción óptimo es el tampón de reacción de ARNasa H 1X, pero hemos probado los tampones NE 1–4, los tampones NE r1.1–r3.1 y el tampón rCutSmart®: Tampón 37 °C 50 °C 65 °C \u0026gt;65 °C Tampón de ARNasa H +++ +++ +++ +++ Tampón NE 1 ++ ++ ++ ++ Tampón NE 2; +++ +++ ++ ++ NEBuffer 3 +++ +++ +++ + NEBuffer 4 ++ +++ +++ +++ NEBuffer r1.1 ++ ++ +++ - NEBuffer r2.1 ++ ++ ++ ++ NEBuffer r3.1 +++ +++ +++ - rCutSmart Buffer ++ ++ ++ + P: ¿La ARNasa termoestable H corta el ARN monocatenario? R: No. La ARNasa termoestable H solo escinde la cadena de ARN en una molécula híbrida ARN:ADN. P: ¿La ARNasa termoestable H requiere cofactores para su actividad? R: Sí. La ARNasa termoestable H requiere Mg2+ para su actividad, que está incluido en el tampón de reacción de ARNasa H 10X suministrado con la enzima. P: ¿Se puede inactivar la ARNasa termoestable H mediante calor? R: No. La ARNasa H termoestable es estable a altas temperaturas (\u0026gt; 95 °C) y no se inactiva con calor. La inactivación de la enzima se puede lograr mediante incubación con proteinasa K o la adición de EDTA. P: ¿Para qué aplicaciones es adecuada la ARNasa H termoestable? R: La ARNasa H termoestable puede utilizarse como sustituto de la ARNasa H de E. coli en ensayos como el mapeo estructural del ARN, la escisión específica del sitio del ARN, los métodos de amplificación isotérmica, la eliminación de ARNm durante la síntesis de ADNc de segunda cadena y la eliminación de colas de poli(A) en ARNm al hibridar con oligo(dT). Debido a la mayor estabilidad de la ARNasa H termoestable a temperaturas más altas, los ensayos que requieren mayor rigurosidad pueden beneficiarse del uso de esta enzima.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835515719849,"sku":"M0523S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-m0523s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}