{"product_id":"neb-m0678s","title":"New England Biolabs, M0678S, Endonucleasa I con desajuste","description":"\u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura \u003cb\u003eDefinición\u003c\/b\u003e \u003cb\u003ede la unidad\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir el 50 % de 0,2 pmol de un dúplex de oligonucleótido de 60 mer marcado con fluorescencia que contiene un único desajuste T:T en 30 minutos a 37 °C en un volumen de reacción total de 20 μl en 1X NEBuffer r2.1. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e 1X NEBuffer™ r2.1 Incubar a 37 °C NEBuffer™ r2.1 50 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg\/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 10 mM Tris-HCl 500 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % glicerol pH 7,4 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 70 °C durante 5 minutos \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Cuál es la actividad de Mismatch Endonuclease I en otros tampones? A: La actividad relativa de Mismatch Endonuclease I en los siguientes tampones se indica en la tabla a continuación: Tampón % Actividad1 NEBuffer r1.1 50% NEBuffer r2.1 100% NEBuffer r3.1 25% Tampón rCutSmart™ 75% Tampón de reacción Q5®2 0% Tampón de reacción ThermoPol2 25% Tampón de reacción Taq estándar2 75% Tampón Phusion HF2 100% 1 % La actividad se muestra en comparación con el tampón óptimo, NEBuffer r2.1. 2 Complementado con 10 mM MgCl2 P: ¿Se puede inactivar Mismatch Endonuclease I? R: Sí, Mismatch Endonuclease I se puede inactivar mediante la adición de EDTA (10 mM, concentración final) o mediante inactivación por calor durante 10 minutos a 70 °C. P: ¿Cuál es la actividad de la endonucleasa I desparejada a temperaturas distintas de 37 °C? R: 30 °C = 75 % 37 °C = 100 % 42 °C = 100 % 50 °C = 75 % P: ¿Requiere MgCl₂ la endonucleasa I desparejada? R: Sí, la endonucleasa I desparejada requiere MgCl₂. El MgCl₂ está presente en el tampón NE r2.1, por lo que si se utiliza la endonucleasa I desparejada con el tampón NE r2.1 suministrado, no es necesario añadir magnesio a la reacción. Si se utiliza la endonucleasa I desparejada en un tampón distinto del NE r2.1, podría ser necesario añadir magnesio para una función enzimática óptima. P: ¿Puede la endonucleasa I desparejada funcionar en presencia de otros cationes divalentes? R: Otros cationes divalentes, como Mn2+, Co2+, Ni2+ y Zn2+ desplazarán el Mg2+ necesario para la actividad e inhibirán la actividad de la endonucleasa I desparejada. La actividad de la endonucleasa I desparejada no se ve afectada por la presencia de iones Ca2+. P: ¿Es la endonucleasa I desparejada sensible a la sal? R: No, la endonucleasa I desparejada es relativamente insensible a la sal. Sin embargo, concentraciones de sal \u0026gt; 250 mM pueden disminuir la actividad de la endonucleasa I desparejada. Es importante tener en cuenta que la endonucleasa I desparejada se almacena en un diluyente con alto contenido de sal (500 mM), por lo que parte de la sal se transfiere a la reacción desde el tampón de almacenamiento y debe tenerse en cuenta en la concentración final de sal de cualquier reacción. P: ¿Qué sustratos desparejados escindirá la endonucleasa I desparejada? R: La endonucleasa de desajuste I escinde preferentemente desajustes de ADN T:T, G:G y T:G, pero también escinde fácilmente desajustes de ADN T:I, G:I y G:U. Además, la endonucleasa de desajuste I corta la hebra que contiene timina de un desajuste de ADN T:C y escinde desajustes T:G y T:U (ADN:ARN), aunque en menor medida que los desajustes ADN:ADN. P: ¿Escinde la endonucleasa de desajuste I desajustes consecutivos? R: Sí, la endonucleasa de desajuste I escinde un sustrato con desajustes de ADN secuenciales T:T, G:G o T:G. Sin embargo, la endonucleasa de desajuste I no puede escindir un sustrato de ADN abultado con múltiples (\u0026gt;2) desajustes consecutivos. Además, si su ADN contiene múltiples desajustes secuenciales, la Endonucleasa I de Desajustes escindirá preferentemente un desajuste T:T sobre un desajuste G:G o T:G. P: ¿Escinde la Endonucleasa I de Desajustes los desajustes en un híbrido ADN\/ARN? R: Sí, la Endonucleasa I de Desajustes escinde los desajustes T:G y T:U (ADN:ARN). P: ¿Qué desajustes no escinde la Endonucleasa I de Desajustes? R: La Endonucleasa I de Desajustes no escinde los desajustes de ADN A:A, A:C, A:G, C:C ni el ADN con pares de bases Watson-Crick. P: ¿Cuántos picomoles de ADN desincrónico puede escindir la Endonucleasa I de Desajustes? R: Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir el 50% de 0,2 pmol de un único desajuste T:T en 30 minutos a 37 °C en un volumen de reacción total de 20 µl en 1X NEBuffer r2.1. 1 µl de Mismatch Endonclease I contiene 80 U, por lo tanto, 1 µl de Mismatch Endonuclease I es capaz de escindir completamente 8 pmol de ADN desajuste. P: ¿En qué se diferencia Mismatch Endonuclease I de T7 Endonuclease I? R: Aunque T7 Endonuclease I tiene actividad en ADN desajuste, no es una enzima ideal para escindir todos los desajustes de pares de bases individuales en ADN heterodúplex. Sin embargo, si se sabe que su desajuste contiene C, puede utilizar esta enzima para su ensayo. Mismatch Endonuclease I no reconoce ni escinde todos los desajustes en el ADN. La endonucleasa de desajuste I es ideal para escindir desajustes T:T, G:G y T:G en el ADN, pero también escinde desajustes de ADN T:I, G:I y G:U, desajustes de ADN:ARN T:G y T:U, y mella la cadena de desajustes T:C que contiene timina en el ADN. P: ¿Cuáles son las diferencias entre la endonucleasa de desajuste I (NEB n.° M0678) y la autenticasa (NEB n.° M0689)? R: La endonucleasa de desajuste I solo escinde los siguientes desajustes de ADN: G\/G, G\/T y T\/T. La autenticasa escinde todos los desajustes de una sola base (excepto G\/A) y todos los desajustes de ADN de 2 o más pares de bases, así como las indeles (inserciones y\/o deleciones).","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835516145833,"sku":"M0678S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-m0678s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}