{"product_id":"neb-p0747s","title":"New England Biolabs, P0747S, α1-3,4,6-galactosidasa","description":"\u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eUna\u003c\/b\u003e unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir \u0026gt; 95% de la terminal, α-D-galactosa de 1 nmol Galα1-3Galβ1-4Gal-7-amino-4-metil-cumarina (AMC), \u003cb\u003een\u003c\/b\u003e 1 \u003cb\u003ehora\u003c\/b\u003e a 37 °C en un volumen de reacción total de 10 μl. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e 1X GlycoBuffer 1 suplementado con 100 µg\/ml de albúmina recombinante (bajo contenido de glicerol) Incubar a 37 °C 1X GlycoBuffer 1 5 mM CaCl2 50 mM acetato de sodio (pH 5,5 a 25 °C) \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 20 mM Tris-HCl 50 mM NaCl 1 mM EDTA pH 7,5 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 65 °C \u003cb\u003ePeso molecular\u003c\/b\u003e teórico: 39,7 kDa \u003cb\u003eCondiciones del ensayo unitario\u003c\/b\u003e Se incuban diluciones dobles de α1-3,4,6 galactosidasa con 1 nmol de sustrato marcado con AMC en 1X GlycoBuffer 1 y 1X rHSA en una reacción de 10 μl. La mezcla de reacción se incuba a 37 °C durante 1 hora. La separación de los productos de reacción se visualiza mediante cromatografía en capa fina (1). \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e : P: ¿Qué son las glicosidasas y cuáles son sus usos? R: Las glicosidasas se utilizan para obtener información sobre los grupos de carbohidratos unidos a las glicoproteínas y los glicopéptidos. Existen dos variedades: las endoglicosidasas, que escinden grupos de carbohidratos completos de las proteínas, y las exoglicosidasas, que eliminan los monosacáridos de los extremos no reducidos del carbohidrato. Un extremo reducido es aquel generado por una endoglicosidasa. Los investigadores suelen utilizar una endoglicosidasa seguida de una o más exoglicosidasas y luego analizan los productos mediante SDS-PAGE o diversos tipos de cromatografía líquida. P: ¿Cuál es la diferencia entre la α1-3,6-galactosidasa y la α1-3,4,6-galactosidasa? R: La α1-3,6-galactosidasa (NEB# P0731) se clona a partir de Xanthomonas manihotis y es específica para la escisión de únicamente los residuos de galactosa α1-3 y α1-6. La α1-3,4,6-galactosidasa (NEB# P0747) se clona a partir del grano de café verde y es una enzima con mayor especificidad que cataliza la hidrólisis de los residuos de galactosa unidos a α1-3, α1-4 y α1-6. P: ¿Puedo utilizar la α1-3,4,6-galactosidasa en una digestión doble con otras exoglucosidasas o endoglicosidasas? R: Sí. Recomendamos realizar una doble digestión de la α1-3,4,6-galactosidasa con otras exoglucosidasas utilizando el tampón glico 1X (50 mM de acetato de sodio, pH 5,5, 5 mM de CaCl₂). Para lograr una actividad óptima de la galactosidasa, complemente la reacción con rHSA. Recomendamos utilizar el tampón glico 2 1X (50 mM de fosfato de sodio, pH 7,5) para la digestión de la α1-3,4,6-galactosidasa con PNGasa F y\/o O-glucosidasa. P: ¿Cuál es un buen control positivo para la α1-3,4,6-galactosidasa? R: p-nitrofenil α-D-galactopiranósido (nombre alternativo: 4-nitrofenil α-D-galactopiranósido). P: ¿Esta enzima requiere condiciones desnaturalizantes para actuar sobre las glicoproteínas? R: No, en general, las exoglicosidasas pueden eliminar residuos de azúcar de las glicoproteínas nativas (plegadas) (los glicanos hidrófilos se alejan de la estructura proteica). Sin embargo, el plegamiento de la proteína alrededor de un sitio de glicano podría afectar la accesibilidad de la enzima. La digestión con exoglicosidasa de algunas proteínas requerirá tiempos de incubación más largos o, en algunos casos, una desnaturalización leve. P: ¿Cuál es un buen método para repurificar un glicano o glicopéptido después del tratamiento con exoglicosidasa? R: Filtración con filtros de microcentrifugación o extracción en fase sólida (por ejemplo, cartuchos de carbón grafitizado). P: ¿Los detergentes inhiben las glicosidasas? R: A niveles moderados (0,5-1,0 % de detergentes iónicos y no iónicos), la mayoría de las glicosidasas muestran una actividad satisfactoria o no se ven afectadas. Las excepciones incluyen PNGasa F, PNGasa F Recombinante, Remove-iT PNGasa F y O-Glicosidasa, que son inhibidas por SDS. P: ¿Cuánta exoglucosidasa se debe usar? R: La cantidad de enzima necesaria varía según el sustrato. Comience con 1-2 µl para 1 µg de glicoproteína o 100 nM de oligosacárido durante una hora en una reacción de 10-25 µl. Si aún queda material sin digerir, deje que la reacción continúe durante la noche.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835495403689,"sku":"P0747S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-p0747s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}