{"product_id":"neb-p0749s","title":"New England Biolabs, P0749S, α1-2,4,6 Fucosidasa O","description":"La α1-2,4,6 fucosidasa O es una exoglucosidasa de amplia especificidad que cataliza la hidrólisis de los residuos de fucosa con enlaces terminales α1-2, α1-4 y α1-6 de oligosacáridos. La α1-2,4,6 fucosidasa O escinde los residuos de fucosa α1-6 de forma más eficiente que otros enlaces. \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Exoglucosidasas,, \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e de análisis del proteoma Secuenciación de glicanos,, Proteómica,, Expresión de glucoproteínas recombinantes, \u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e \u003cb\u003ede especificación\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir \u0026gt; 95% de la fucosa de 1 nmol de GlcNAc(Fucα1-6)β1-4GlcNAc-AMC en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 10 μl. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e 1X GlycoBuffer 1 Incubar a 37 °C 1X GlycoBuffer 1 5 mM CaCl2 50 mM acetato de sodio (pH 5,5 a 25 °C) \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 20 mM Tris-HCl 50 mM NaCl 1 mM EDTA pH 7,5 a 20 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 65 °C durante 10 minutos \u003cb\u003ePeso molecular\u003c\/b\u003e aparente: 49 kDa \u003cb\u003eCondiciones del ensayo unitario\u003c\/b\u003e Se incuban diluciones dobles de α1-2,4,6 Fucosidasa O con 1 nmol de sustrato marcado con AMC y 1X GlycoBuffer 1 en una reacción de 10 μl. La mezcla de reacción se incuba a 37 °C durante 1 hora. La separación de los productos de reacción se visualiza mediante cromatografía de capa fina (1). \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e : P: ¿Cuál es la diferencia entre la α1-2,3,4,6 fucosidasa y la α1-2,4,6 fucosidasa O? R: La α1-2,4,6 fucosidasa O, clonada de la bacteria Omnitrophica, es una exoglucosidasa de amplia especificidad que cataliza la hidrólisis de los residuos terminales de fucosa α1-6 con mayor eficiencia que la de los residuos de fucosa unidos a α1-2 y α1-4. Además, la α1-2,4,6 fucosidasa O puede escindir glicanos aminados reductivamente, así como glicanos con marcadores instantáneos. Considerando que la α1-2,3,4,6 fucosidasa (NEB# P0748) se clona a partir de riñón bovino y se expresa en E. coli. Es una enzima de amplia especificidad que cataliza la hidrólisis de residuos de fucosa con enlaces α1-2 y α1-6 con mayor eficiencia que la de los residuos de fucosa con enlaces α1-4 y α1-3. P: ¿Puede la α1-2,4,6 fucosidasa O escindir residuos de fucosa en presencia de glicanos marcados con marcadores instantáneos? R: Sí, la α1-2,4,6 fucosidasa O puede escindir residuos de fucosa de oligosacáridos o glicanos liberados que han sido marcados con marcadores instantáneos como Instant 2AB, Instant Procainamida o RapiFluor. Las muestras marcadas con marcadores instantáneos pueden requerir tiempos de incubación más prolongados (18 horas) para una digestión completa. P: ¿Puedo usar la α1-2,4,6 Fucosidasa O en una digestión doble con otras exoglucosidasas? R: Sí. Recomendamos la digestión simultánea con otras exoglucosidasas utilizando GlycoBuffer 1 1X (50 mM de acetato de sodio, pH 5,5, 5 mM de CaCl₂). Por ejemplo, la α1-2,4,6 Fucosidasa O se puede combinar en una digestión simultánea con otras exoglucosidasas como la α2-3,6,8,9 Neuraminidasa A (NEB# P0722), la α1-3,4,6 Galactosidasa (NEB# P0747), la β1-4 Galactosidasa S (NEB# P0745) y la β-N-Acetilglucosaminidasa S (NEB# P0744). P: ¿Puede la α1-2,4,6 Fucosidasa O escindir residuos de fucosa α1-3? R: No, la α1-2,4,6 Fucosidasa O no escinde residuos de fucosa α1-3. P: ¿Puede la α1-2,4,6 Fucosidasa O escindir sustratos ramificados y complejos? R: La α1-2,4,6 Fucosidasa O escinde residuos de fucosa α1-6 ramificados y presenta una actividad mínima en residuos de fucosa α1-4 ramificados. La enzima no escinde residuos de fucosa α1-2 ramificados. Para la digestión de sustratos de oligosacáridos complejos con múltiples ramificaciones, pueden requerirse tiempos de incubación más prolongados (de 4 horas a toda la noche). P: ¿Puede la α1-2,4,6 Fucosidasa O escindir residuos de fucosa de un anticuerpo intacto? R: La α1-2,4,6 Fucosidasa O solo es activa en un anticuerpo intacto si se recorta al núcleo trimanosilo. P: ¿Cuál es la temperatura óptima de incubación para la α1-2,4,6 Fucosidasa O? R: La temperatura óptima de incubación cuando se utiliza la enzima sola es de 50 °C. La definición de la unidad enzimática se calcula utilizando una temperatura de reacción de 37 °C para permitir la digestión simultánea con glicosidasa y los protocolos de secuenciación de N-glicanos. Una temperatura de reacción de 37 °C resulta en una actividad aproximadamente un 35 % menor. P: ¿Cuál es un buen método para repurificar un glicano o un glucopéptido tras el tratamiento con exoglicosidasa? R: Filtración con filtros de microcentrifugación o extracción en fase sólida (por ejemplo, cartuchos de carbón grafitizado).","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835514572969,"sku":"P0749S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-p0749s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}