{"product_id":"neb-p0774s","title":"New England Biolabs, P0774S, inhibidor de la nucleasa GamS NEBExpress®","description":"El inhibidor de nucleasa GamS de NEBExpress es una proteína recombinante que inhibe la actividad de la exonucleasa V (RecBCD) y estabiliza las plantillas de ADN lineal en \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e NEBExpress, ®, E. coli libre de células, Sistema de síntesis de proteínas, Expresión de proteínas libres de células, \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e de expresión de proteínas Sistema de síntesis de proteínas de E. coli libre de células NEBExpress®, Expresión de proteínas libres de células, \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e de expresión de proteínas \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 50 mM Tris-acetato pH 8,2 \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Cómo mejora el inhibidor de nucleasa GamS de NEBExpress® la producción de proteínas? R: El sistema de síntesis de proteínas de E. coli libre de células NEBExpress está diseñado para ser compatible con ADN lineal. Sin embargo, la producción de proteínas producida a partir de una plantilla de ADN lineal suele ser menor que la producción de proteínas producida a partir de ADN plasmídico. Esto se debe a la presencia de una exonucleasa de E. coli, RecBCD (Exo V), que es responsable de degradar la plantilla de ADN lineal. GamS se puede añadir a la reacción de síntesis para inhibir eficazmente la actividad de RecBCD, de modo que el ADN lineal se pueda estabilizar para una transcripción sostenible. P: ¿Cuánta plantilla de ADN lineal y cuánto inhibidor de nucleasa NEBExpress® GamS debo añadir a mi reacción? R: Como punto de partida, sugerimos añadir 250 ng de ADN lineal y 1,5 μg de GamS (1 μL) en una reacción de 50 μL para mejorar el rendimiento proteico. El tamaño del gen y la construcción de ADN pueden contribuir a la estabilidad del ADN lineal y a la velocidad de transcripción. Por lo tanto, diferentes dianas proteicas pueden requerir una mayor optimización para determinar la mejor proporción de plantilla y GamS. Durante la configuración experimental, se recomienda añadir la plantilla de ADN lineal en el último paso para permitir que GamS se una e inhiba RecBCD antes de que RecBCD tenga la oportunidad de actuar sobre el ADN. Además, la reacción de síntesis de proteínas se puede escalar a volúmenes mayores, en cuyo caso la cantidad de ADN lineal y GamS también debe escalarse proporcionalmente al volumen de reacción. P: ¿Es siempre mejor una mayor cantidad de inhibidor de nucleasa NEBExpress® GamS? R: ¡No! Existe un rango óptimo de GamS en una reacción de síntesis de proteínas acelulares. En el sistema de síntesis de proteínas de E. coli acelular NEBExpress, se determina que es de ~2,4 μM, o 1,5 μg por 50 μL de reacción. Añadir más GamS puede causar una disminución en la producción de proteínas. Esto probablemente se deba a que GamS es una proteína ácida y actúa como un imitador del ADN. En altas concentraciones, puede interactuar con otras enzimas e interferir con el proceso de transcripción y traducción. P: ¿Puedo congelar-descongelar el inhibidor de nucleasa NEBExpress® GamS? R: El inhibidor de nucleasa GamS NEBExpress se almacena en un tampón acuoso al 100 % para una compatibilidad óptima con las reacciones de síntesis de proteínas. Debe almacenarse a -20 °C y evitarse los ciclos de congelación-descongelación. Si se prevén múltiples ciclos de congelación-descongelación, recomendamos alicuotar la proteína durante el primer uso. P: ¿Cómo debo preparar mi ADN lineal? R: Los kits de PCR como el kit de PCR de alta fidelidad NEB Q5® (NEB n.° E0555) pueden producir un excelente rendimiento de ADN lineal. El ADN lineal debe purificarse antes de utilizarse en una reacción de síntesis de proteínas acelular. Recomendamos la purificación con el kit de limpieza de PCR y ADN Monarch® (5 µg) (NEB n.° T1030).","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835538493609,"sku":"P0774S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-p0774s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}