{"product_id":"neb-p6042s","title":"New England Biolabs, P6042S, Fetuina","description":"La fetuina es una glicoproteína que contiene glicanos sialilados N-ligados y O-ligados que se pueden usar como control positivo para enzimas endoglicosidasas que escinden carbohidratos tanto N-ligados como O-ligados. \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Sustratos de glicoproteína \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e Sistemas de expresión,, Secuenciación de glicanos,, Expresión de glicoproteínas recombinantes, \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 1X Milli-Q agua \u003cb\u003ePeso molecular\u003c\/b\u003e Aparente: 48,4 kDa \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Cuál es un buen sustrato de control de endoglicosidasa? R: Para la O-glucosidasa (NEB# P0733) y la mezcla de desglicosilación de proteínas (NEB# P6039S), sugerimos fetuina (NEB# P6042). Para la PNGasa F (NEB n.° P0704, P0705, P0706), sugerimos la ARNasa B (NEB n.° P7817S) o la fetuina (NEB n.° P6042). P: ¿Por qué la fetuina es un buen sustrato de control tanto para la O-glicosidasa, la PNGasa F como para la mezcla de desglicosilación de proteínas? R: La fetuina es una glicoproteína que contiene glicanos sialilados, tanto N-ligados como O-ligados, y puede analizarse mediante análisis de desplazamiento en gel SDS-PAGE, espectrometría de masas u otros métodos. P: ¿Cuál es la condición típica de una reacción de desglicosilación de fetuina? R: Combine 2 μl de fetuina, 1 μl de tampón desnaturalizante de glicoproteínas 10X y 5 μl de H₂O. Incube a 95 °C durante 10 minutos. Añadir 1 μl de GlycoBuffer 2 10X y 1 μl de NP-40 al 10 %. Añadir 1 μl de endoglicosidasa. Incubar a 37 °C durante 1 hora. Visualizar los productos de reacción en un gel SDS-PAGE al 10-20 %. P: ¿Inhiben los detergentes las exoglicosidasas\/endoglucosidasas? R: A niveles moderados (0,5-1,0 % de detergentes iónicos y no iónicos), la mayoría de las glicosidasas muestran una actividad satisfactoria o no se ven afectadas. Las excepciones son: PNGasa F (todas las formulaciones), O-glicosidasa y β-N-acetilglucosaminidasa, que son inhibidas por SDS. Es imperativo añadir NP-40 a una concentración final del 1 % a la mezcla de reacción para contrarrestar la inhibición del detergente. La endoglucosidasa D también es inhibida por SDS; sin embargo, NP-40 no contrarresta esta inhibición. Finalmente, los reactivos estabilizadores comunes como Tween, Triton X-100, NP-40, octil glucósido y sulfobetaínas no detergentes, así como trazas de disolventes orgánicos, pueden impedir una desglicosilación rápida óptima mediante Rapid PNGase F. P: ¿Cuánta endoglicosidasa debo usar para desglicosilar la fetuína en condiciones nativas? R: Cuando la fetuína no se desnaturaliza, la endoglicosidasa puede tener más dificultades para alcanzar el sitio de escisión del carbohidrato (debido a la estructura secundaria y terciaria de la proteína). Una enzima adicional y tiempos de incubación más prolongados serán útiles, pero estos valores son específicos de cada proteína y deben determinarse empíricamente.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835489996969,"sku":"P6042S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-p6042s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}