{"product_id":"neb-p8112s","title":"New England Biolabs, P8112S, proteasa TEV","description":"La secuencia de reconocimiento de la proteasa TEV con la mayor eficiencia catalítica es ENLYFQ ▼S; sin embargo, el aminoácido en la posición P1' también puede ser G, A, M, C o H (1). \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Sistema de fusión y purificación de MBP NEBExpress, Expresión de proteínas bacterianas de E. coli, Purificación de níquel (etiqueta His), \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e Escisión de proteínas de fusión, Insolubilidad de la proteína diana, Purificación de proteínas, \u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e \u003cb\u003ede especificación\u003c\/b\u003e 1 unidad de proteasa TEV escindirá 2 µg de proteína de fusión MBP, MBP5-TEV-paramiosina ΔSal, hasta un 95% de finalización en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 30 °C en Tris-HCl 50 mM (pH 7,5 a 25 °C) con EDTA 0,5 mM y DTT 1 mM. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e Tampón de reacción de proteasa TEV 1X Incubar a 30 °C Tampón de reacción de proteasa TEV 1X Tris-HCl 50 mM EDTA 0,5 mM DTT 1 mM (pH 7,5 a 25 °C) \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e Tris-HCl 50 mM NaCl 250 mM TCEP 1 mM EDTA 1 mM Glicerol al 50 % pH 7,5 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 65 °C durante 10 minutos \u003cb\u003ePeso molecular\u003c\/b\u003e aparente: 28 kDa \u003cb\u003eCondiciones del ensayo unitario\u003c\/b\u003e Se incuban diluciones dobles de proteasa TEV con 2 μg de MBP5-TEV-paramiosina ΔSal y tampón de reacción de proteasa TEV 1X en una reacción de 10 μl. La mezcla de reacción se incuba a 30 °C durante 1 hora. La separación de los productos de reacción se visualiza mediante SDS-PAGE. \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e : P: ¿Puede la proteasa TEV reconocer y escindir una secuencia distinta a Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-(Gly\/Ser)? R: La secuencia de reconocimiento de la proteasa TEV con mayor eficiencia catalítica es ENLYFQ▼S. Sin embargo, el aminoácido en la posición P1' también puede ser G, A, M, C o H (1). Kapust, RB et al. (2002) Biochem. and Biophysical Research Comm. 294, 949-955. P: ¿Es necesario dializar la muestra antes de la escisión con la proteasa TEV? R: Si la muestra de proteína de fusión contiene \u0026gt;2 M de urea, \u0026gt;0,5 M de clorhidrato de guanidina, \u0026gt;50 mM de imidazol, valores de pH inferiores a 6 o superiores a 9, o inhibidores de la cisteína proteasa, será necesario dializar la proteína de fusión antes de la escisión con la proteasa TEV. P: ¿Se puede utilizar la proteasa TEV a temperaturas inferiores? R: Sí, la proteasa TEV se puede utilizar a temperaturas inferiores a 30 °C. La escisión a temperaturas inferiores, como 4 °C, requiere incubación durante la noche. P: ¿Es la proteasa TEV compatible con los inhibidores de la proteasa? R: La actividad de la proteasa TEV no se ve afectada por los siguientes inhibidores de la proteasa: aprotinina, benzamidina, leupeptina, pepstatina y PMSF. P: ¿Es la proteasa TEV compatible con diferentes tampones de reacción? R: Un tampón de reacción óptimo es el tampón de reacción de proteasa TEV 10X suministrado (Tris-HCl 0,5 M, pH 7,5, EDTA 5 mM, DTT 10 mM). Sin embargo, la enzima también es activa en tampones HEPES, fosfato de potasio y acetato de sodio con pH entre 6 y 9. P: ¿Se puede eliminar la proteasa TEV de la reacción tras la escisión? R: Sí, la proteasa TEV contiene una etiqueta de polihistidina en su extremo N-terminal. Tras la escisión de la proteína de fusión, se debe eliminar la proteasa TEV de la reacción de escisión mediante cromatografía de afinidad con metales inmovilizados.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835509264553,"sku":"P8112S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-p8112s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}