{"product_id":"neb-r0104m","title":"Biolabs de Nueva Inglaterra, R0104M, HindIII","description":"HindIII se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10152649. \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Endonucleasas de restricción \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e de HM Digestión con enzimas de restricción \u003cb\u003eUnidad\u003c\/b\u003e \u003cb\u003ede especificación\u003c\/b\u003e Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e 1X NEBuffer™ r2.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r2.1 50 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg\/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) \u003cb\u003eActividad en NEBuffers\u003c\/b\u003e NEBuffer™ r1.1: 25 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 50 % Tampón rCutSmart™: 50 % \u003cb\u003eCompatibilidad del diluyente\u003c\/b\u003e Diluyente B \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e 300 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % Glicerol 500 µg\/ml Albúmina recombinante pH 7,4 a \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e a 25 °C a 80 °C durante 20 minutos \u003cb\u003eSensibilidad a la metilación\u003c\/b\u003e Metilación en dam: No sensible Metilación en dcm: No sensible Metilación en CpG: No sensible \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Qué es la actividad estrella y cómo se puede evitar? R: Se ha demostrado que, en condiciones extremas no estándar, las endonucleasas de restricción son capaces de escindir secuencias que son similares, pero no idénticas, a su secuencia de reconocimiento definida. Esta especificidad alterada o relajada se ha denominado actividad \"estrella\". Se ha sugerido que la actividad estrella puede ser una propiedad general de las endonucleasas de restricción y que cualquier endonucleasa de restricción puede ser capaz de escindir sitios no canónicos en ciertas condiciones extremas. La manera en que se altera la especificidad de una enzima depende de la enzima y de las condiciones empleadas para inducir la actividad estrella. Los tipos más comunes de actividad alterada son las sustituciones de bases individuales, el truncamiento de las bases externas en la secuencia de reconocimiento y el mellado de cadena sencilla. La actividad estrella es completamente controlable en la gran mayoría de los casos y generalmente no es una preocupación cuando se realizan digestas de endonucleasas de restricción. Las enzimas de New England Biolabs no exhibirán actividad estrella cuando se usen bajo las condiciones recomendadas en sus NEBuffers suministrados. A continuación se enumeran las condiciones de reacción que se sabe que inducen o inhiben la actividad estrella. Condiciones que contribuyen a la actividad estrella 1. Alta concentración de glicerol [\u0026gt; 5% v\/v] 2. Alta proporción de unidades a µg de ADN [varía con cada enzima, generalmente \u0026gt;100 unidades\/µg] 3. Baja fuerza iónica [\u0026lt; 25 mM] 4. Alto pH [\u0026gt; pH 8,0] 5. Presencia de disolventes orgánicos [DMSO, etanol, etilenglicol, dimetilacetamida, dimetilformamida, sulfalano] 6. Sustitución de Mg++ con otros cationes divalentes [Mn++, Cu++, Co++, Zn++] Inhibición de la actividad estrella Si le preocupa la actividad estrella, le recomendamos las siguientes pautas. 1. Use la menor cantidad de unidades posible para lograr una digestión completa. Esto evita la sobredigestión y reduce la concentración final de glicerol en la reacción. 2. Asegúrese de que la reacción esté libre de disolventes orgánicos, como alcoholes, que podrían estar presentes en la preparación de ADN. 3. Aumente la fuerza iónica del tampón de reacción a 100-150 mM (siempre que la enzima no se inhiba por un alto contenido de sal). 4. Reduzca el pH del tampón de reacción a pH 7.0. 5. Use Mg++ como catión divalente. P: ¿Qué enzimas de restricción NEB se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X)? R: Todas las enzimas de restricción con HF y la mayoría de las enzimas de restricción NEB sin HF se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X) P: ¿Esta enzima es sensible a ¿Metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: No. Esta enzima no es sensible a la metilación de dam, dcm ni a la de CpG de mamíferos. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Podrían darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de migrar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que alejarnos de los productos que contienen ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835508445353,"sku":"R0104M","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-r0104m","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}