{"product_id":"neb-r0194l","title":"Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0194L, XmnI","description":"XmnI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10119487. \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Endonucleasas de restricción TZ,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e de digestión con enzimas de restricción \u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg\/ml (pH 7,9 a 25 °C) \u003cb\u003eActividad en tampones\u003c\/b\u003e NE Tampón NE™ r1.1: 50 % Tampón NE™ r2.1: 75 % Tampón NE™ r3.1: \u0026lt;10 % Tampón rCutSmart™: 100 % \u003cb\u003eCompatibilidad del diluyente\u003c\/b\u003e Diluyente A \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg\/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e a 25 °C 65 °C durante 20 minutos \u003cb\u003eSensibilidad a la metilación\u003c\/b\u003e Metilación en presas: no sensible Metilación en dcm: no sensible Metilación en CpG: no sensible \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Los sitios de reconocimiento degenerados deben ser palindrómicos? R: La mayoría de los sitios de reconocimiento de enzimas de restricción son palindrómicos e incluyen solo pares de bases específicos (es decir, EcoRI reconoce GAATTC). Sin embargo, algunas enzimas tienen sitios degenerados, lo que significa que contienen uno o más pares de bases que no están específicamente definidos (es decir, BsrFI-v2 reconoce RCCGGY, donde R = A o G e Y = C o T). Para las enzimas degeneradas, cualquier base representada por el código de una sola letra puede estar presente en cualquier ubicación en el sitio de reconocimiento para que se produzca la escisión. Por ejemplo, BsrFI-v2 reconoce todas las siguientes secuencias: ACCGGC, ACCGGT, GCCGGC, GCCGGT. P: ¿Qué es la actividad estrella y cómo se puede evitar? R: Se ha demostrado que, en condiciones extremas no estándar, las endonucleasas de restricción son capaces de escindir secuencias similares, pero no idénticas, a su secuencia de reconocimiento definida. Esta especificidad alterada o relajada se ha denominado actividad \"estrella\". Se ha sugerido que la actividad estrella puede ser una propiedad general de las endonucleasas de restricción y que cualquier endonucleasa de restricción puede escindir sitios no canónicos en ciertas condiciones extremas. La forma en que se altera la especificidad de una enzima depende de la enzima y de las condiciones empleadas para inducir la actividad estrella. Los tipos más comunes de actividad alterada son las sustituciones de bases individuales, el truncamiento de las bases externas en la secuencia de reconocimiento y el corte de hebras simples. La actividad estrella es completamente controlable en la gran mayoría de los casos y, por lo general, no es un problema al realizar digestores con endonucleasas de restricción. Las enzimas de New England Biolabs no exhibirán actividad estrella cuando se utilicen en las condiciones recomendadas en los NEBuffers suministrados. A continuación, se enumeran las condiciones de reacción que se sabe que inducen o inhiben la actividad estrella. Condiciones que contribuyen a la actividad estelar 1. Alta concentración de glicerol [\u0026gt; 5% v\/v] 2. Alta proporción de unidades a µg de ADN [varía con cada enzima, normalmente \u0026gt;100 unidades\/µg] 3. Baja fuerza iónica [\u0026lt; 25 mM] 4. pH alto [\u0026gt; pH 8,0] 5. Presencia de disolventes orgánicos [DMSO, etanol, etilenglicol, dimetilacetamida, dimetilformamida, sulfalano] 6. Sustitución de Mg++ por otros cationes divalentes [Mn++, Cu++, Co++, Zn++] Inhibición de la actividad estelar Si le preocupa la actividad estelar, le recomendamos las siguientes directrices. 1. Utilice la menor cantidad de unidades posible para obtener una digestión completa. Esto evita la sobredigestión y reduce la concentración final de glicerol en la reacción. 2. Asegúrese de que la reacción esté libre de disolventes orgánicos, como alcoholes, que podrían estar presentes en la preparación de ADN. 3. Aumente la fuerza iónica del tampón de reacción a 100-150 mM (siempre que la enzima no esté inhibida por un alto contenido de sal). 4. Disminuya el pH del tampón de reacción a pH 7,0. 5. Utilice Mg++ como catión divalente. P: ¿Tengo que configurar las digestiones con enzimas calificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de trabajar rápido (5-15 minutos), pero también están diseñadas y calificadas para soportar digestiones durante la noche sin degradación del ADN. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activa, sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores principales que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden ser inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de reacción según corresponda. P: ¿Qué enzimas de restricción NEB se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X)? R: Todas las enzimas de restricción HF y la mayoría de las enzimas de restricción NEB sin HF se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X) P: ¿Esta enzima es sensible a ¿Metilación de CpG de dam, dcm o mamíferos? R: No. Esta enzima no es sensible a la metilación de CpG de dam, dcm ni mamíferos. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y Metilación de CpG o REBASE. P: ¿Ofrece NEB enzimas de restricción sin BSA ni de origen animal para la linealización de plásmidos para el desarrollo de vacunas de ARNm? R: Sí, NEB ha formulado algunas enzimas de restricción (incluida BspQI, un isoesquizómero de SapI) sin componentes de origen animal y su formulación final no contiene BSA. Además, disponemos de varias enzimas de restricción sin BSA ni otros componentes de origen animal en su formulación final. Esta lista incluye: BbsI-HF BsaI-HFv2 BspQI, isoesquizómero de LguI, grado GMP* ahora disponible BspQI-HF ClaI HindIII-HF PacI SapI SpeI SwaI XbaI XhoI XmnI Se pueden formular otras enzimas a pedido. Consulte aquí. * “Grado GMP” y “grado GMP” son términos de marca que NEB usa para describir productos fabricados o terminados en las instalaciones de NEB en Rowley. Las instalaciones de Rowley fueron diseñadas para fabricar productos bajo controles de infraestructura y procesos más rigurosos para lograr especificaciones de producto y requisitos de los clientes más estrictos. Los productos fabricados en las instalaciones de NEB en Rowley se fabrican de conformidad con los estándares del sistema de gestión de calidad ISO 9001 e ISO 13485. Sin embargo, en este momento, NEB no fabrica ni vende productos conocidos como Ingredientes Farmacéuticos Activos (API), ni NEB fabrica sus productos de conformidad con todas las regulaciones actuales de Buenas Prácticas de Manufactura. P: ¿Podrían contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835514146985,"sku":"R0194L","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-r0194l","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}