{"product_id":"neb-r0603l","title":"Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0603L, SgrAI","description":"SgrAI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10196887. \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Endonucleasas de restricción S \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e Digestión con enzimas de restricción \u003cb\u003eUnidad\u003c\/b\u003e \u003cb\u003ede especificación\u003c\/b\u003e Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de λDNA en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg\/ml (pH 7,9 a 25 °C) \u003cb\u003eActividad en tampones\u003c\/b\u003e NE Tampón NE™ r1.1: 100 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 10 % Tampón rCutSmart™: 100 % \u003cb\u003eCompatibilidad del diluyente\u003c\/b\u003e Diluyente A \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e Tris-HCl 10 mM NaCl 100 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg\/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7.4 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 65 °C durante 20 minutos \u003cb\u003eSensibilidad a la metilación\u003c\/b\u003e dam metilación: No sensible metilación dcm: No sensible Metilación CpG: Bloqueada \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿Qué es la actividad estrella y cómo se puede evitar? R: Se ha demostrado que en condiciones extremas no estándar, las endonucleasas de restricción son capaces de escindir secuencias que son similares pero no idénticas a su secuencia de reconocimiento definida. Esta especificidad alterada o relajada se ha denominado actividad \"estrella\". Se ha sugerido que la actividad estrella puede ser una propiedad general de las endonucleasas de restricción y que cualquier endonucleasa de restricción puede ser capaz de escindir sitios no canónicos en ciertas condiciones extremas. La manera en que se altera la especificidad de una enzima depende de la enzima y de las condiciones empleadas para inducir la actividad estrella. Los tipos más comunes de actividad alterada son las sustituciones de una sola base, el truncamiento de las bases externas en la secuencia de reconocimiento y el mellado de una sola cadena. La actividad estrella es completamente controlable en la gran mayoría de los casos y generalmente no es una preocupación cuando se realizan digestas de endonucleasas de restricción. Las enzimas de New England Biolabs no exhibirán actividad estrella cuando se usen bajo las condiciones recomendadas en sus NEBuffers suministrados. A continuación se enumeran las condiciones de reacción que se sabe que inducen o inhiben la actividad estrella. Condiciones que contribuyen a la actividad estrella 1. Alta concentración de glicerol [\u0026gt; 5% v\/v] 2. Alta proporción de unidades a µg de ADN [varía con cada enzima, usualmente \u0026gt;100 unidades\/µg] 3. Baja fuerza iónica [\u0026lt; 25 mM] 4. Alto pH [\u0026gt; pH 8.0] 5. Presencia de solventes orgánicos [DMSO, etanol, etilenglicol, dimetilacetamida, dimetilformamida, sulfalano] 6. Sustitución de Mg++ con otros cationes divalentes [Mn++, Cu++, Co++, Zn++] Inhibición de la actividad estrella Si le preocupa la actividad estrella, le recomendamos las siguientes pautas. 1. Use la menor cantidad de unidades posible para obtener una digestión completa. Esto evita la sobredigestión y reduce la concentración final de glicerol en la reacción. 2. Asegúrese de que la reacción esté libre de cualquier disolvente orgánico, como alcoholes, que puedan estar presentes en la preparación de ADN. 3. Aumente la fuerza iónica del tampón de reacción a 100-150 mM (siempre que la enzima no se inhiba por un alto contenido de sal). 4. Disminuya el pH del tampón de reacción a pH 7,0. 5. Use Mg++ como catión divalente. P: ¿Los sitios de reconocimiento degenerados deben ser palindrómicos? R: La mayoría de los sitios de reconocimiento de enzimas de restricción son palindrómicos e incluyen solo pares de bases específicos (es decir, EcoRI reconoce GAATTC). Sin embargo, algunas enzimas tienen sitios degenerados, lo que significa que contienen uno o más pares de bases que no están específicamente definidos (es decir, BsrFI-v2 reconoce RCCGGY, donde R = A o G e Y = C o T). En el caso de las enzimas degeneradas, cualquier base representada por el código de una sola letra puede estar presente en cualquier punto del sitio de reconocimiento para que se produzca la escisión. Por ejemplo, BsrFI-v2 reconoce todas las siguientes secuencias: ACCGGC, ACCGGT, GCCGGC, GCCGGT. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activo; sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden verse inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de reacción según corresponda. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que están bloqueados por la metilación de CpG. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Puede contarme más sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en NEBuffers? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción que contienen BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones que contienen albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de migrar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que alejarnos de los productos que contienen ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835532103849,"sku":"R0603L","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-r0603l","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}