{"product_id":"neb-r0613s","title":"Laboratorios Biológicos de Nueva Inglaterra, R0613S, BaeI","description":"BaeI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10281538. \u003cb\u003eCategorías relacionadas\u003c\/b\u003e Endonucleasas de restricción B,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo \u003cb\u003eAplicaciones\u003c\/b\u003e Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB,, \u003cb\u003eEspecificación\u003c\/b\u003e de digestión con enzimas de restricción \u003cb\u003eDefinición de unidad\u003c\/b\u003e Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN Lambda en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. \u003cb\u003eCondiciones de reacción\u003c\/b\u003e Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg\/ml (pH 7,9 a 25 °C) \u003cb\u003eActividad en tampones\u003c\/b\u003e NE Tampón NE™ r1.1: 50 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 50 % Tampón rCutSmart™: 100 % \u003cb\u003eCompatibilidad del diluyente\u003c\/b\u003e Diluyente A \u003cb\u003eTampón de almacenamiento\u003c\/b\u003e Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg\/ml Albúmina recombinante 0,32 mM S-adenosilmetionina (SAM) 50% glicerol pH 7,4 a 25 °C \u003cb\u003eInactivación por calor\u003c\/b\u003e 65 °C durante 20 minutos \u003cb\u003eSensibilidad a la metilación\u003c\/b\u003e dam metilación: No sensible dcm metilación: No sensible CpG metilación: Bloqueada por algunas combinaciones de \u003cb\u003eactividad superpuesta a temperatura\u003c\/b\u003e a 25 °C: 100% \u003cb\u003ePreguntas frecuentes\u003c\/b\u003e P: ¿BaeI tiene algún requisito especial? R: Sí, se requiere S-adenosilmetionina (SAM) para una actividad óptima (SAM se suministra en la formulación enzimática a partir de enero de 2022). Si no está seguro de si SAM está en la formulación enzimática y tiene un vial de SAM de NEB, está bien agregar SAM a la reacción según las pautas anteriores. P: ¿BaeI escinde el ADN dos veces? R: BaeI escinde los sustratos de ADN dos veces para escindir su sitio de reconocimiento, lo que genera un fragmento de 28 pares de bases con salientes 3' de 5 bases. P: ¿Tengo que preparar las digestas con enzimas con certificación Time-Saver™ durante 5 a 15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de actuar rápidamente (5 a 15 minutos), pero también están diseñadas y certificadas para soportar digestaciones nocturnas sin degradar el ADN. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activa; sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden verse inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de reacción según corresponda. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que están bloqueados por algunas combinaciones de metilación de CpG superpuesta. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Podrían darme más información sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los NEBuffers? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Consideramos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: Con el objetivo de estandarizar las condiciones de reacción, se ha modificado la temperatura de incubación recomendada para ApaI (NEB n.° R0114), BaeI (NEB n.° R0613), BsrDI (NEB n.° R0574) y SmaI (NEB n.° R0141). ¿Qué temperatura de incubación debo usar? R: Se puede incubar con seguridad a cualquiera de las dos temperaturas. Tenga en cuenta que, para SmaI, sugerimos incubar a 25 °C si realiza digestiones prolongadas (más de 1 hora). P: ¿Son ciertas enzimas de restricción más activas a temperaturas de incubación superiores a las recomendadas? R: Las enzimas de restricción NEB son 100 % activas a la temperatura de incubación recomendada en el tampón recomendado que se incluye con cada enzima. Con algunas enzimas de restricción aisladas de especies termófilas, es posible que observe un aumento de su actividad a temperaturas de incubación más altas. No recomendamos aumentar la temperatura, ya que podrían aparecer actividades nucleasas adicionales a temperaturas no recomendadas.","brand":"New England Biolabs","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46835506610345,"sku":"R0613S","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/neb-r0613s","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}