{"product_id":"revvity-62kb01redc","title":"Revvity, 62KB01REDC, ligando rojo de estaurosporina HTRF, 1 nmol","description":"\u003cp\u003e Descripción general\u003cbr\u003e\n Este compuesto se deriva de la estaurosporina, un alcoide natural presente en Streptomyces Staurosporeus. Es un inhibidor prototípico de quinasas ATP-competitivas y ha demostrado ser altamente promiscuo, por lo que resulta muy útil para abordar múltiples quinasas en la plataforma de ensayo de unión a quinasas HTRF. El colorante fluorescente «d2» utilizado absorbe con su máximo cerca de 650 nm y fluoresce cerca de 670 nm. Es una molécula aceptora implementada en ensayos HTRF.\u003cbr\u003e\n Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:\u003c\/p\u003e\n\n\n \u003cp\u003eFormato homogéneo de adición y lectura\u003cbr\u003e\n Sin pasos de lavado\u003cbr\u003e\n Fondo bajo\u003cbr\u003e\n Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.\u003cbr\u003e\n Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.\u003cbr\u003e\n Cómo funciona\u003cbr\u003e\n Principio del ensayo de determinación de Kd\u003cbr\u003e\n La unión de la Estaurosporina Roja se detecta mediante un ensayo sándwich utilizando el Anti-Tag marcado con criptato de europio (donador), que se une a la quinasa marcada, y un trazador fluorescente rojo marcado con d2 (aceptor). El principio de detección se basa en la tecnología HTRF. La relación HTRF (665\/620) aumentará al añadir más trazador y se saturará en función de la constante de disociación (Kd) del trazador a la quinasa marcada. Para determinar si la Estaurosporina Roja es el trazador más adecuado para la quinasa marcada que le interesa, le recomendamos probar primero los kits de Descubrimiento de Unión a la Kinasa. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n \n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003cbr\u003e\n Protocolo de ensayo para la determinación de Kd\u003cbr\u003e\n Los experimentos de unión de saturación de estaurosporina roja se pueden realizar en placas de 96 o 384 pocillos (volumen final de 20 µL).\u003cbr\u003e\n En primer lugar, se prepara una serie de diluciones que oscilan entre 0 y 1 µM de estaurosporina roja en el tampón de unión a la quinasa en una placa de 96 pocillos sin unión.\u003cbr\u003e\n A continuación, se añaden 5 µL de tampón de unión a quinasa a la placa final de 96 o 384 pocillos. A continuación, se añaden 5 µL de quinasa marcada, seguidos de 5 µL de Eu-criptato anti-etiqueta. Finalmente, se añaden 5 µL de la solución trazadora roja.\u003cbr\u003e\n La relación HTRF se mide después de 1 hora de incubación. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003cbr\u003e\n Principio del ensayo de determinación de IC50\/Ki\u003cbr\u003e \nLa unión de la estaurosporina roja se detecta mediante un ensayo sándwich utilizando un anticuerpo específico anti-GST, 6HIS o estreptavidina marcado con criptato de europio (donante), que se une a la quinasa marcada, y una estaurosporina roja fluorescente marcada con d2 (aceptor). El principio de detección se basa en la tecnología HTRF®. La proporción HTRF (665\/620) aumentará con la adición de estaurosporina roja y se saturará en función de la constante de disociación (Kd) de la estaurosporina roja con respecto a la quinasa marcada. Al añadir un inhibidor de la quinasa, la estaurosporina roja se desplazará y la señal HTRF desaparecerá, dependiendo de la dosis. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003cbr\u003e\n Protocolo de ensayo para la determinación de IC50\/Ki\u003cbr\u003e\n Las evaluaciones farmacológicas de los inhibidores de interés se pueden realizar en placas de 96 o 384 pocillos.\u003cbr\u003e \nPrimero se prepara una dilución seriada del inhibidor entre 40 µM y 0,23 nM, y se dispensan 5 µL de cada concentración en la placa. A continuación, se añaden 5 µL de quinasa marcada, seguidos de 5 µL de Eu-criptato anti-marcador. Finalmente, se añaden 5 µL de solución de rojo de estaurosporina, preparada al cuádruple de la concentración final. La razón HTRF se mide tras 1 h de incubación.\u003cbr\u003e\n Los análisis de los datos arrojan curvas dosis-respuesta típicas que oscilan entre 10 µM y 56 pM, lo que permite evaluar los valores de CI50\/Ki del inhibidor de interés. Aplicación: Ensayo enzimático bioquímico.\u003cbr\u003e\n Marca-HTRF\u003cbr\u003e\n Modalidad de detección-HTRF\u003cbr\u003e\n Grupo de productos: reactivo fluorescente\u003cbr\u003e\n Condiciones de envío - Envío en hielo seco\u003cbr\u003e\n Clase objetivo: quinasas\u003cbr\u003e\n Tecnología-TR-FRET\u003cbr\u003e\n Área terapéutica: Metabolismo\/Diabetes, Neurociencia, Oncología e Inflamación\u003cbr\u003e\n Tamaño de la unidad: 1 nmol\u003c\/p\u003e","brand":"Revvity","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46775317332137,"sku":"62KB01REDC","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/revvity-62kb01redc","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}