{"product_id":"revvity-62kbhiskaf","title":"Revvity, 62KBHISKAF, kit de unión de MAb HTRF anti-6HIS-Eu cryptate Kinase, 1000 puntos de ensayo","description":"\u003cp\u003e Descripción general\u003cbr\u003e \nEl anticuerpo monoclonal anti-6HIS-Eu criptato quinasa de unión es una IgG2a generada contra una proteína de fusión marcada con polihistidina y Eu. Se ha demostrado que reacciona con quinasas marcadas con 6HIS.\u003cbr\u003e\n Este reactivo está diseñado para su uso en la plataforma bioquímica de unión a quinasa HTRF.\u003cbr\u003e\n Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Formato homogéneo de adición y lectura\u003cbr\u003e\n Sin pasos de lavado\u003cbr\u003e\n Fondo bajo\u003cbr\u003e\n Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.\u003cbr\u003e\n Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.\u003cbr\u003e\n Cómo funciona\u003cbr\u003e\n Principio del ensayo de determinación de Kd\u003cbr\u003e \nLa unión de los trazadores se detecta mediante un ensayo sándwich utilizando el anticuerpo anti-6HIS marcado con criptato de europio (donante), que se une a la quinasa marcada con 6HIS, y un trazador fluorescente rojo marcado con d2 (aceptor). El principio de detección se basa en la tecnología HTRF®. La relación HTRF (665\/620) aumentará al añadir más trazador y se saturará en función de la constante de disociación (Kd) del trazador a la quinasa marcada con 6HIS. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003cbr\u003e\n Protocolo de ensayo para la determinación de Kd\u003cbr\u003e \nLos experimentos de unión de saturación con los tres trazadores (es decir, rojo de estaurosporina, rojo de dasatinib y rojo de sunitinib) pueden realizarse en placas de 96 o 384 pocillos (volumen final de 20 µL). Primero, se prepara una dilución seriada del trazador entre 0 y 1 µM en el tampón de unión a quinasas en una placa de 96 pocillos sin unión. A continuación, se dispensan 5 µL de tampón de unión a quinasas en la placa final de 96 o 384 pocillos. A continuación, se añaden 5 µL de quinasa marcada con 6HIS, seguidos de 5 µL de Eu-criptato anti-6HIS. Finalmente, se añaden 5 µL de la solución del trazador rojo. La razón HTRF se mide después de 1 hora de incubación. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003cbr\u003e\n Principio del ensayo de determinación de IC50\/Ki\u003cbr\u003e \nPrincipio del ensayo de unión de la quinasa HTRF® (determinación de CI50\/Ki). La unión de los trazadores se detecta mediante un ensayo sándwich utilizando el anti-6HIS marcado con criptato de europio (donador), que se une a la quinasa marcada, y un trazador fluorescente rojo marcado con d2 (aceptor). El principio de detección se basa en la tecnología HTRF®. La relación HTRF (665\/620) aumentará al añadir más trazador y se saturará en función de la constante de disociación (Kd) del trazador a la quinasa marcada. Al añadir un inhibidor de la quinasa, el trazador se desplazará y la señal HTRF desaparecerá, dependiendo de la dosis. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003cbr\u003e\n Protocolo de ensayo para la determinación de IC50\/Ki\u003cbr\u003e \nLa evaluación farmacológica de los inhibidores de interés puede realizarse en placas de 96 o 384 pocillos. Primero, se prepara una dilución seriada de inhibidor entre 40 µM y 0,23 nM, y se dispensan 5 µL de cada concentración en la placa. A continuación, se añaden 5 µL de quinasa marcada, seguidos de 5 µL de criptato de Eu anti-6HIS. Finalmente, se añaden 5 µL de solución trazadora, preparada al cuádruple de la concentración final. La razón HTRF se mide tras 1 h de incubación. Los análisis de los datos arrojan curvas dosis-respuesta típicas que oscilan entre 10 µM y 56 pM, lo que permite evaluar los valores de CI50\/Ki del inhibidor de interés. Aplicación: Ensayo enzimático bioquímico.\u003cbr\u003e\n Marca-HTRF\u003cbr\u003e\n Modalidad de detección-HTRF\u003cbr\u003e\n Grupo de productos: reactivo fluorescente\u003cbr\u003e\n Volumen de muestra: 5 µL\u003cbr\u003e\n Condiciones de envío - Envío en hielo seco\u003cbr\u003e\n Clase objetivo: quinasas\u003cbr\u003e\n Tecnología-TR-FRET\u003cbr\u003e\n Área terapéutica: Metabolismo\/Diabetes, Neurociencia, Oncología e Inflamación\u003cbr\u003e\n Tamaño de la unidad: 1000 puntos de ensayo\u003c\/p\u003e","brand":"Revvity","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46775237312681,"sku":"62KBHISKAF","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/revvity-62kbhiskaf","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}