{"product_id":"revvity-alsu-tbckd-a50k","title":"Revvity, ALSU-TBCKD-A50K, kit de detección de BCKDHA total humana AlphaLISA, 50 000 puntos de ensayo","description":"\u003cp\u003e Descripción general\u003cbr\u003e \nLa cetoácido deshidrogenasa de cadena ramificada E1-alfa (BCKDHA) es la subunidad catalítica del complejo BCKDC, que cataliza la descarboxilación irreversible de los cetoácidos de cadena ramificada derivados de la leucina, la isoleucina y la valina. La BCKDHA representa el paso limitante en el catabolismo de los aminoácidos de cadena ramificada y se expresa predominantemente en hígado, músculo, riñón y cerebro. Las mutaciones en la BCKDHA causan la enfermedad de la orina con olor a jarabe de arce (MSUD), caracterizada por la acumulación de derivados tóxicos de los cetoácidos que provoca daño neurológico. La gravedad de la MSUD varía según la actividad enzimática residual, desde formas graves clásicas hasta variantes intermedias. La expresión alterada de BCKDHA se ha relacionado con el metabolismo del cáncer, la diabetes y las enfermedades cardiovasculares.\u003cbr\u003e\n AlphaLISA SureFire Ultra Human Total BCKDHA es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de BCKDHA total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.\u003cbr\u003e\n Formatos:\u003c\/p\u003e\n\n\n \u003cp\u003eEl kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.\u003cbr\u003e\n El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.\u003cbr\u003e\n El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.\u003cbr\u003e\n El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Lisados ​​de células y tejidos\u003cbr\u003e\n Moduladores de anticuerpos\u003cbr\u003e\n Anticuerpos bioterapéuticos\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Ensayos de quinasas celulares\u003cbr\u003e\n Estudios de activación de receptores\u003cbr\u003e\n Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos\u003cbr\u003e\n Cómo funciona\u003cbr\u003e\n Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e\n El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.\u003cbr\u003e \nEl ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cp\u003eProtocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e \nEl protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e\n La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.\u003cbr\u003e\n Versatilidad de ensayos\u003cbr\u003e\n Expresión de BCKDHA en varias líneas celulares\u003cbr\u003e \nLas células adherentes se cultivaron hasta la confluencia en un matraz T175 a 37 °C y 5 % de CO₂, y se lisaron con tampón de lisis a una densidad de 0,25 x 10⁻ células\/ml. Las células en suspensión se lavaron con HBSS y se lisaron con tampón de lisis a una densidad de 0,8 x 10⁻ células\/ml.\u003cbr\u003e\n Los niveles de BCKDHA se evaluaron con AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (2500 células adherentes o 8000 células en suspensión) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donante a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.\u003cbr\u003e\n Se detectó la expresión de BCKDHA en una amplia gama de líneas celulares humanas.\u003cbr\u003e\n Sensibilidad del ensayo\u003cbr\u003e\n Sensibilidad del ensayo BCKDHA: dilución del lisado celular\u003cbr\u003e\n El lisado celular se preparó a partir de células HeLa cultivadas hasta la confluencia en un matraz T175 y se lizaron en 4 ml de tampón de lisis.\u003cbr\u003e \nEl lisado se diluyó en serie en tampón de lisis y fosfo de BCKDHA (Ser292), y los niveles totales se evaluaron con AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.\u003cbr\u003e\n Se indica el número aproximado de células. La línea punteada representa el fondo del ensayo. El ensayo BCKDHA tiene un amplio rango dinámico y puede detectar la expresión de BCKDHA en menos de 50 células\/punto de datos.\u003cbr\u003e\n Aplicación: Señalización celular\u003cbr\u003e\n Compatible con automatización: Sí\u003cbr\u003e\n Marca AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e\n Modalidad de detección alfa\u003cbr\u003e\n Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente\u003cbr\u003e\n Volumen de muestra: 10 µL\u003cbr\u003e\n Condiciones de envío - Envío en Blue Ice\u003cbr\u003e\n Objetivo-BCKDHA\u003cbr\u003e\n Clase objetivo: fosfoproteínas\u003cbr\u003e\n Especie objetivo: humanos\u003cbr\u003e\n Tecnología-Alfa\u003cbr\u003e\n Área terapéutica-Neurociencia metabólica oncológica\u003cbr\u003e\n Tamaño de la unidad: 50 000 puntos de ensayo\u003c\/p\u003e","brand":"Revvity","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46774586343593,"sku":"ALSU-TBCKD-A50K","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/revvity-alsu-tbckd-a50k","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}