{"product_id":"revvity-alsu-tst3-b50k","title":"Revvity, ALSU-TST3-B50K, kit AlphaLISA de alto rendimiento para la detección de STAT3 total en humanos y ratones, 50 000 puntos de ensayo","description":"\u003cp\u003e Descripción general\u003cbr\u003e \nEl Transductor de Señales y Activador de la Transcripción 3 (STAT3) es un factor de transcripción que media las respuestas celulares a las citocinas y factores de crecimiento, regulando genes implicados en la proliferación, la supervivencia y la respuesta inmunitaria. STAT3 se activa por fosforilación en Tyr705, lo que conduce a la dimerización, la translocación nuclear y la unión al ADN. STAT3 regula la expresión de genes como c-MYC, ciclina D1, BCL-XL y VEGF, promoviendo la progresión del ciclo celular y la supervivencia. La activación constitutiva de STAT3 se encuentra en aproximadamente el 70 % de los tumores, donde impulsa la oncogénesis y crea un microambiente inmunosupresor. Se están desarrollando inhibidores de STAT3 como terapias contra el cáncer para atacar las células tumorales y restaurar la inmunidad antitumoral.\u003cbr\u003e\n AlphaLISA SureFire Ultra High Performance Human and Mouse Total STAT3 es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de STAT3 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.\u003cbr\u003e\n Formatos:\u003c\/p\u003e\n\n\n \u003cp\u003eEl kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.\u003cbr\u003e\n El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.\u003cbr\u003e\n El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.\u003cbr\u003e\n El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Lisados ​​de células y tejidos\u003cbr\u003e\n Moduladores de anticuerpos\u003cbr\u003e\n Anticuerpos bioterapéuticos\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:\u003c\/p\u003e\n\n\n\u003cp\u003e Ensayos de quinasas celulares\u003cbr\u003e\n Estudios de activación de receptores\u003cbr\u003e\n Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos\u003cbr\u003e\n Cómo funciona\u003cbr\u003e\n Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e\n El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.\u003cbr\u003e \nEl ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e\u003c\/p\u003e\n\n\n\n\u003cp\u003eProtocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e \nEl protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\u003cp\u003e Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e\n La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.\u003cbr\u003e\n Versatilidad de ensayos\u003cbr\u003e\n Expresión de STAT3 en varias líneas celulares\u003cbr\u003e \nLas células adherentes se cultivaron hasta confluencia en un matraz T175 a 37 °C y 5 % de CO₂, y se lisaron con tampón de lisis a una densidad de 100 000 células\/ml. Las células en suspensión se lavaron y se lisaron con tampón de lisis 5X a una densidad de 300 000 células\/ml.\u003cbr\u003e\n Los niveles de STAT3 se evaluaron mediante el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra High Performance. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (aproximadamente 1000 células adherentes y 3000 células en suspensión) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donante a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un analizador Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.\u003cbr\u003e\n Sensibilidad del ensayo\u003cbr\u003e\n Sensibilidad total del ensayo STAT3 de alto rendimiento\u003c\/p\u003e\n\n\n\n \u003cp\u003eLas células THP-1 se sembraron en una placa de 96 pocillos (50.000 células\/pocillo) en medio completo con 100 nM de PMA y se incubaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO₂. Los macrófagos derivados de THP-1 se mantuvieron en ayunas en HBSS + 0,1 % de BSA durante 2 horas y, posteriormente, se estimularon con concentraciones crecientes de IFNα durante 20 minutos.\u003cbr\u003e\n Tras el tratamiento, las células se lisaron con 100 µL de tampón de lisis durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación (350 rpm). Los niveles de STAT3 fosfo (Tyr705) y total se evaluaron mediante los respectivos ensayos AlphaLISA SureFire Ultra STAT3. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (aproximadamente 5000 células) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguidos de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un analizador Envision con la configuración estándar de AlphaLISA. \u003c\/p\u003e\n\n\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\u003cbr\u003e\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n \u003cp\u003eEl lisado celular se preparó a partir de células A431 cultivadas hasta confluencia en un matraz T175 tratado con 2 µg\/mL de EGF durante 10 minutos y lisado en 10 mL de tampón de lisis durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación.\u003cbr\u003e\n El lisado se diluyó en serie en tampón de lisis y STAT3 fosfo (Tyr705). Los niveles totales se evaluaron mediante los respectivos ensayos AlphaLISA SureFire Ultra High Performance STAT3. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguidos de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.\u003cbr\u003e\n Se indica el número aproximado de células. La línea punteada representa el fondo del ensayo. El ensayo STAT3 Total High Performance tiene un amplio rango dinámico y puede detectar la expresión de STAT3 en menos de 50 células\/punto de datos.\u003cbr\u003e\n Aplicación: Señalización celular\u003cbr\u003e\n Compatible con automatización: Sí\u003cbr\u003e\n Marca AlphaLISA SureFire Ultra\u003cbr\u003e\n Modalidad de detección alfa\u003cbr\u003e \nTiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente\u003cbr\u003e\n Volumen de muestra: 10 µL\u003cbr\u003e\n Condiciones de envío - Envío en Blue Ice\u003cbr\u003e\n Objetivo-STAT3\u003cbr\u003e\n Clase objetivo: fosfoproteínas\u003cbr\u003e\n Especie objetivo: ratón humano\u003cbr\u003e\n Tecnología-Alfa\u003cbr\u003e\n Área terapéutica-Neurociencia de la inflamación Oncología\u003cbr\u003e\n Tamaño de la unidad: 50 000 puntos de ensayo\u003c\/p\u003e","brand":"Revvity","offers":[{"title":"Default Title","offer_id":46774625140905,"sku":"ALSU-TST3-B50K","price":0.99,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"url":"https:\/\/iright.com\/es\/products\/revvity-alsu-tst3-b50k","provider":"Iright","version":"1.0","type":"link"}