كواشف بي دي الوظيفية القائمة على الخلايا لقياس التدفق الخلوي والتصوير

تجمع منصة Iright بين كواشف BD الوظيفية القائمة على الخلايا والأجسام المضادة NA/LE (الخالية من الأزيد/منخفضة السموم الداخلية) لتتمكن من دراسة موت الخلايا المبرمج، والتكاثر، وتلف الحمض النووي، وإشارات الفسفرة بثقة. تساعدك هذه الصفحة على اختيار الأصباغ والمجموعات والأهداف الفسفورية المناسبة، ثم الانتقال مباشرةً إلى منتجات BD المعتمدة التي تتوافق مع سير عملك.

مقدمة عن كواشف BD الوظيفية القائمة على الخلايا

بدءًا من الإجهاد الخلوي المبكر وصولًا إلى تنشيط المسارات الخلوية، تكشف المؤشرات الوظيفية ما لا تستطيع المؤشرات السطحية وحدها كشفه. تشمل منتجات BD أدوات الكشف عن موت الخلايا المبرمج، ودورة الخلية، والتكاثر، ومؤشرات تلف الحمض النووي (γ-H2AX)، وأجسام Phosflow™ المضادة للإشارات الخلوية الداخلية - مُحسَّنة خصيصًا لقياس التدفق الخلوي ومتوافقة مع التصوير، والتلوين المناعي النسيجي، والتلطيخ الغربي عند الاقتضاء. وبصفتها موزعًا، توفر Iright إمدادًا موثوقًا، ووثائق، وتنسيقًا فنيًا.

عائلات المنتجات: موت الخلايا المبرمج، والتكاثر، وتلف الحمض النووي، والتدفق الفوسفوري

يبدأ اختيار المقايسات الوظيفية بالسؤال البيولوجي. فيما يلي نظرة عامة موجزة على أهم المجموعات التي ستتعرف عليها في هذه الصفحة، مع تسليط الضوء على القراءات النموذجية وسبب اعتماد الباحثين على تنسيقات ومحاليل BD للحفاظ على جودة الإشارة واتساق التجربة عبر مختلف المنصات.

الاستماتة الخلوية والحيوية. تُظهر مجموعات Annexin V ظهور الفوسفاتيديل سيرين على السطح الخارجي للخلية؛ بينما يُمكّن 7-AAD أو PI من استبعاد الخلايا الميتة وإجراء اختبارات حيوية ثنائية المعايير باستخدام قياس التدفق الخلوي. توفر BD مجموعات Annexin V مع FITC أو PE مع محلول ربط لتسهيل إجراء التحليلات.

دورة الخلية والتكاثر. يوفر طقم BD Cycletest™ Plus إجراءات تلوين النوى لتحليل محتوى الحمض النووي وتحليل مراحل الخلية. لتتبع الانقسام، يمكن استخدامه مع أصباغ التكاثر التي تُقرأ بالتدفق الخلوي (مثل بدائل CFSE) أو استراتيجيات التحديد التكميلية.

تلف الحمض النووي وإصلاحه. يقوم مضاد H2AX (pS139)، أي γ-H2AX، بتحديد استجابات انقطاع السلسلة المزدوجة بشكل حساس ويتكيف مع التدفق أو التصوير أو التلطيخ مع تنسيقات PE أو التنسيقات المنقاة لتناسب بروتوكولك.

إشارات الفسفرة (Phosflow). تتحد الأجسام المضادة BD Phosflow (مثل p-STAT3 Y705) مع محلول التحلل/التثبيت المخصص ومحلول Perm Buffer III لتحديد كمية حالات الفسفرة داخل الخلايا عن طريق التدفق، مما يتيح تحليل المسار المعتمد على الوقت في الدم الكامل أو خطوط الخلايا.

الأجسام المضادة ذات الجودة الوظيفية (NA/LE). عندما تحتاج إلى التحفيز أو الحجب أو التحييد دون استخدام أزيد الصوديوم أو السموم الداخلية المربكة، فإن تنسيق BD NA/LE يقلل من التداخل في الاختبارات الحساسة في المختبر وفي الجسم الحي.

دليل الاختيار: هدف الفحص، وقراءة النتائج، واختيار الأجسام المضادة NA/LE

قبل إضافة المنتجات إلى سلة التسوق، تأكد من توافق تصميم التحليل مع النتائج والقيود. يساعدك الدليل المختصر أدناه على ربط الأهداف بكواشف BD والمحاليل المنظمة والصيغ، وتحديد متى تكون الأجسام المضادة NA/LE ضرورية لحماية القراءات الوظيفية من تأثيرات الأزيد/الذيفان الداخلي.

1. حدد السؤال البيولوجي. هل الهدف هو الكشف عن موت الخلايا المبرمج في مراحله المبكرة؟ أم قياس كمية الخلايا الميتة؟ أم تتبع الانقسامات أو رسم خريطة لتفعيل المسارات بعد تحفيز السيتوكينات؟ يشير كل هدف إلى مجسات بيولوجية أو أهداف فسفورية متميزة.
   
2. طابق القراءة. يظل قياس التدفق الخلوي هو الأساس لـ Annexin V/7-AAD، ومحتوى الحمض النووي Cycletest وPhosflow؛ ويمكن توسيع نطاق γ-H2AX ليشمل التصوير وWB للتأكيد المتعامد.
   
3. حدد طريقة التثبيت/النفاذية. عادةً ما يتم استخدام تقنية موت الخلايا المبرمج/الحيوية على الخلايا الحية (بدون تثبيت قبل التلوين)، بينما تتطلب تقنية Phosflow عملية التحلل/التثبيت ومحلول BD Perm Buffer III؛ خطط لترتيب اللوحات وفقًا لذلك.
   
4. استخدم الأجسام المضادة NA/LE عندما تكون الوظيفة مهمة. بالنسبة لأنظمة الحجب/التنشيط أو الزراعة المشتركة، اختر الأجسام المضادة NA/LE لتجنب سمية الأزيد وتأثيرات السموم الداخلية التي تشوه بيانات التكاثر أو استجابة السيتوكينات.
   
5. قم ببناء عناصر التحكم ونقاط الزمن. قم بتضمين محفزات إيجابية غير معالجة (مثل كامبتوثيسين للاستماتة؛ IL-6 لـ p-STAT3)، وضوابط FMO/التعويض، ومسارات زمنية مرحلية لالتقاط الديناميكيات بثقة.

جدول مقارنة: الأصباغ، والمجموعات، والأجسام المضادة الفوسفورية، وتنسيقات NA/LE

يلخص الجدول أدناه الخيارات الشائعة. استخدمه لتحديد العناصر قبل الخوض في المواصفات وتعليمات الاستخدام. ضع في اعتبارك نوع العينة، ومدى توافقها مع التثبيت، وما إذا كانت الكواشف المخصصة للاستخدام البحثي فقط (RUO) تلبي متطلبات الامتثال الخاصة بك.

الفئة الفرعية / الاستخدام	الهدف الأساسي / المسبار	القراءة الأساسية	مطلوب إصلاح/تثبيت	خيار NA/LE	عينة نموذجية	نموذج منتج BD
موت الخلايا المبرمج المبكر + قابلية البقاء	أنيكسين V + 7-AAD	تدفق	لا (بقعة حية)	غير متوفر	خطوط الخلايا، الخلايا الليمفاوية أحادية النواة في الدم المحيطي	مجموعة الكشف عن موت الخلايا المبرمج باستخدام FITC Annexin V I ( 556547 ) ؛ مجموعة الكشف عن موت الخلايا المبرمج باستخدام PE Annexin V I ( 559763 )
استبعاد الخلايا الميتة	7-AAD	تدفق	لا يوجد (بقعة نهاية)	غير متوفر	واسع	7-AAD ( 559925 )
محتوى الحمض النووي / دورة الخلية	مجموعة أدوات تعتمد على يوديد البروبيديوم	تدفق	نعم (التحضير النووي)	غير متوفر	الأنسجة، المعلقات	مجموعة كواشف الحمض النووي Cycletest™ Plus ( 340242 )
تلف الحمض النووي (استجابة كسر الحمض النووي المزدوج)	H2AX (pS139) / γ-H2AX	التدفق / التصوير / WB	يعتمد على التحليل	غير متوفر	واسع	مضاد H2AX النقي (pS139) ( 560443 ) ؛ مضاد H2AX PE (pS139) ( 562377 )
الإشارات الفسفورية	STAT3 (pY705)	التدفق (الفوسفور)	نعم (ليز/فيكس + بيرم 3)	غير متوفر	خلايا الدم الكامل	BD Phosflow PE anti-STAT3 (pY705) ( 612569 ) ; Perm Buffer III ( 558050 )
التعديل الوظيفي	الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الوظيفية من الدرجة NA/LE	الاختبارات الوظيفية	لا	نعم	في المختبر / في الجسم الحي	NA/LE ماوس مضاد للإنسان CD11b ( 555385 ) ؛ قائمة اللوحات NA/LE (راجع BD NA/LE PDF)

نصائح وأسئلة شائعة حول البروتوكول: تصميم اللوحة، عناصر التحكم، التعويض

بما أن التحليلات الوظيفية تتناول قابلية الخلايا للحياة، والتثبيت، والأهداف داخل الخلايا، فإن اتباع ترتيب دقيق للعمليات والضوابط أمر بالغ الأهمية. تُلخص الملاحظات أدناه الممارسات الموثقة من قبل BD حتى تتمكن من التركيز على علم الأحياء بدلاً من معالجة المشكلات التقنية.

1. كيف أرتب خطوات الخلايا الحية والخلايا الثابتة؟
قم بإجراء اختبار Annexin V/7-AAD على الخلايا الحية قبل أي تثبيت. بالنسبة للأهداف الفسفورية، اتبع سير عمل BD Phosflow: التحفيز ← التحلل/التثبيت ← محلول Perm Buffer III ← التلوين داخل الخلايا. حافظ على فصل اختبارات موت الخلايا المبرمج عن اختبارات الفسفرة، أو استخدم لوحات متوافقة مع توقيت دقيق.

2. ما هي الضوابط الإيجابية الموصى بها؟
تشمل المحفزات التقليدية الكامبتوثيسين لتحفيز موت الخلايا المبرمج (توفر مجموعات Annexin V مثالاً على ذلك مع خلايا Jurkat) والإنترلوكين-6 لفسفرة STAT3. قم بإنشاء سلاسل زمنية (على سبيل المثال، من 5 إلى 30 دقيقة لأحداث الفسفرة؛ ومن 3 إلى 6 ساعات لموت الخلايا المبرمج) لرصد الحركية.

3. متى يكون الحصول على تصريح أمني إلزاميًا؟
أي تجربة يمكن أن يؤدي فيها الأزيد أو السموم الداخلية إلى إضعاف أو تشويش الوظيفة - على سبيل المثال، تنشيط الخلايا التائية، أو الحجب/التحييد، أو الزراعة المشتركة، أو الجرعات في الجسم الحي - يجب أن تستخدم الأجسام المضادة NA/LE لتجنب السمية أو التنشيط الفطري من الملوثات.

4. كيف يمكنني منع التداخل الطيفي وانخفاض نسبة الإشارة إلى الضوضاء؟
استخدم FMO وعناصر التحكم أحادية التلوين؛ تجنب ازدحام الفلوروفور في القنوات المجاورة؛ عاير الأجسام المضادة؛ قلل من التعرض للضوء للأصباغ؛ وبالنسبة لخطوات الميثانول-perm (Perm III)، انتبه لحساسية الإبيتوب واغسل جيدًا.

5. ماذا عن تأكيد نتائج اختبار الدم الكامل/التصوير؟
يمكن التحقق من صحة γ-H2AX بواسطة WB (حزمة ~15 كيلو دالتون) أو تصويرها في النوى كفحص متعامد على نتائج التدفق؛ تأكد من أن التثبيت / النفاذية متوافق مع التنسيق الذي اخترته (منقى مقابل مقترن PE).

تحدث إلى إيرايت

إذا كنت تخطط لإجراء تحليل متعدد المعايير أو تنتقل من مرحلة الاكتشاف إلى مرحلة التحقق، يمكننا مساعدتك في تحديد النسخ المستنسخة، ومخاليط الفلور، ومجموعات المحاليل المنظمة، وتزويدك بعروض أسعار مع تحديد مواعيد التسليم. أخبرنا بجهازك، ونوع العينة، والمسارات المستهدفة؛ وسنؤكد لك أرقام كتالوج BD، وحالة البحث العلمي، ونزودك بمجموعات بيانات المنتج لحفظها في سجلاتك.

ما تحصل عليه من إيرايت

• توريد أصلي من شركة BD مع أرقام كتالوج متطابقة وأوراق بيانات فنية/تعليمات استخدام مطابقة.
• المساعدة في مواءمة سير عمل Lyse/Fix & Perm III مع لوحة النتائج واستراتيجية الجدوى الخاصة بك.
• إرشادات حول خيارات NA/LE للحجب/التنشيط والتوافق الحيوي.