كواشف Thermo Fisher RNAi وRNA لإسكات الجينات الموثوق به
172 productsتساعدك كواشف RNAi وRNA من Thermo Fisher على إسكات الجينات المستهدفة بثقة، سواء كنت بحاجة إلى إسكات سريع وعكسي عبر siRNA/miRNA أو كبح طويل الأمد باستخدام تقنيات shRNA. تضم هذه المجموعة عائلات منتجات مثبتة الفعالية، وضوابط شائعة، وأدوات نقل مُحسّنة لتقنية RNAi. وبصفتها موزعًا، تستطيع Iright توفير مجموعة واسعة من خيارات Thermo Fisher وتقديم الدعم لك من مرحلة الاختيار إلى مرحلة التحقق.
التسوق حسب التطبيق: تثبيط الجينات، وظيفة الحمض النووي الريبوزي الميكروي، والحمض النووي الريبوزي القصير المستقر
يُسهّل اختيار المواد الكيميائية المناسبة الوصول إلى البيانات. ابدأ بالسؤال البيولوجي - سواء كان تثبيطًا حادًا وقابلًا للعكس، أو تعديلًا للـ miRNA الداخلي، أو كبحًا طويل الأمد - ثمّ قم بمطابقته مع الكيمياء المناسبة وطريقة التوصيل. تُساعدك البطاقات أدناه في اختيار مجموعات الكواشف المناسبة ونقاط التحقق النموذجية.
-
إسكات الجينات الحاد (siRNA): إسكات سريع وقابل للعكس للـ mRNA للتحقق من صحة الهدف وفحص النمط الظاهري.
-
اكتساب/فقدان وظيفة miRNA: استخدم محاكيات mirVana™ (زيادة التنظيم) أو مثبطات (خفض التنظيم) لاستكشاف التنظيم الداخلي.
-
التثبيط المستقر (shRNA/lentiviral): دراسات طويلة الأمد وأعمال استنساخية حيث يكون التثبيط المستمر مطلوبًا.
-
الخلايا التي يصعب نقل الجينات إليها: أعط الأولوية لـ Lipofectamine™ RNAiMAX لتحقيق كفاءة عالية مع سمية خلوية منخفضة في تطبيقات RNAi.
نقل الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA)، والحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)، والحمض النووي الريبوزي المتداخل القصير (shRNA)، وتداخل الحمض النووي الريبوزي (RNAi) - عائلات المنتجات وحالات الاستخدام
تُعالج كل عائلة من هذه التقنيات قيودًا تجريبية مختلفة. يُمكّن الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) من تثبيط التعبير الجيني بسرعة وبشكل قابل للتعديل؛ بينما تُحاكي أدوات الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) التحكم الداخلي بعد النسخ؛ ويدعم الحمض النووي الريبوزي المتداخل القصير (shRNA) التأثيرات طويلة الأمد؛ أما كواشف نقل الحمض النووي الريبوزي المتداخل (RNAi) فتُعظّم توصيل جزيئات الحمض النووي الريبوزي الصغيرة مع تقليل السمية إلى أدنى حد. تُوضح الملاحظات الموجزة أدناه حالات الاستخدام الشائعة لخطوط الإنتاج.
-
Silencer™ Select siRNA: كيمياء ذات خصوصية محسنة؛ قم بإقرانها مع عناصر تحكم إيجابية/سلبية لإعداد الطريقة ومراقبة الجودة.
-
mirVana™ miRNA mimics/inhibitors: ضوابط تم اختبارها على مستوى المختبر وخيارات معايرة واسعة النطاق لمعايرة اضطرابات miRNA.
-
تنسيقات shRNA/الفيروسية: اختر متى تحتاج إلى كبت الفيروس لمدة أسابيع إلى شهور أو سير عمل قائم على الاختيار.
-
Lipofectamine™ RNAiMAX: كاشف نقل الحمض النووي الريبوزي المحسن والمتوفر بأحجام عبوات متعددة للفحص والتوسع.
كيف تعمل تقنية التداخل الرناوي (RNAi): تحميل معقد RISC، إسكات الرنا المرسال (mRNA)، وأساسيات التأثيرات الجانبية
تستخدم تقنية التداخل الرناوي جزيئات رنا صغيرة مزدوجة السلاسل لبرمجة معقد RISC على الرنا المرسال المكمل، مما يعزز انقسامه أو كبح ترجمته. عادةً ما تحفز جزيئات siRNA المزدوجة تثبيطًا قويًا وموجهًا بالتسلسل؛ بينما تحاكي جزيئات miRNA المحاكية/المثبطة التنظيم الداخلي. بالمقارنة مع تعطيل الجينات، فإن تقنية التداخل الرناوي قابلة للعكس وقابلة لضبط الجرعة، وهو أمر مفيد للجينات الأساسية والدراسات الزمنية.
اختر الكاشف المناسب: siRNA مقابل miRNA مقابل shRNA لنموذج الخلية الخاص بك
ابدأ بتحديد هدفك البيولوجي وقيود خط الخلية، ثم اختر الشكل والتوصيل المناسبين. ضع في اعتبارك ظروف المصل، وكثافة الخلايا عند النقل الجيني، وعتبات السمية، وفترات قراءة النتائج. عند الشك، جرّب مصفوفة صغيرة - جرعة × كثافة الخلايا - باستخدام ضوابط مُعتمدة لتثبيت الظروف قبل التوسع.
-
هل تحتاج إلى كبح سريع وقابل للعكس؟ استخدم Silencer™ Select siRNA مع عناصر تحكم غير مستهدفة وإيجابية لأداء خط الأساس.
-
هل تريد التحقق من التنظيم الداخلي؟ اختر محاكيات mirVana™ (زيادة) أو مثبطات (فقدان) مع عناصر تحكم سلبية متطابقة وقم بالتأكيد عن طريق qPCR/بروتين.
-
هل تحتاج إلى تأثيرات طويلة المدى أو انتقاء؟ انتقل إلى مناهج shRNA/lentiviral وخطط للتحقق من الاستنساخ.
-
هل تواجه صعوبة في التعامل مع الخلايا؟ استخدم Lipofectamine™ RNAiMAX ، ومحلول المعايرة، وكميات الحمض النووي الريبي لتقليل السمية الخلوية مع الحفاظ على الكفاءة.
الكواشف والضوابط الشائعة: Silencer Select وmirVana وLipofectamine RNAiMAX
فيما يلي بعض منتجات Thermo Fisher الشائعة الاستخدام والتي تُشكّل أساس معظم عمليات RNAi. استخدم عناصر التحكم السلبية لتقدير التأثيرات الأساسية، وعناصر التحكم الإيجابية للتحقق من استجابة المسار، وRNAiMAX للتوصيل.
| العائلة / العنصر | حالة الاستخدام | رقم الكتالوج | حجم العبوة |
|---|---|---|---|
| Silencer™ Select Negative Control No. 1 siRNA | التحكم الأساسي باستخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير غير المستهدف | 4390843 / 4390844 | 5 نانومول / 40 نانومول |
| Silencer™ Select GAPDH Positive Control siRNA | التحقق من الطريقة، معيار الإسقاط | 4390849 / 4390850 | 5 نانومول / 40 نانومول |
| Silencer™ Select Negative Control No. 2 siRNA | التحكم البديل غير المستهدف | 4390846 / 4390847 | 5 نانومول / 40 نانومول |
| mirVana™ miRNA Mimic، عنصر التحكم السلبي رقم 1 | خط الأساس لزيادة وظيفة الحمض النووي الريبوزي الميكروي | 4464058 / 4464059 / 4464060 / 4464061 | 5 / 20 / 50 / 250 نانومول |
| مثبط miRNA من نوع mirVana™، عنصر التحكم السلبي رقم 1 | خط الأساس لفقدان وظيفة الحمض النووي الريبوزي الميكروي | 4464076 / 4464077 / 4464078 / 4464079 | 5 / 20 / 50 / 250 نانومول |
| كاشف نقل الحمض النووي الريبوزي المتداخل Lipofectamine™ RNAiMAX | توصيل مُحسَّن بتقنية تداخل الحمض النووي الريبوزي، سمية منخفضة | 13778100 / 13778030 / 13778075 / 13778150 / 13778500 | 0.1 / 0.3 / 0.75 / 1.5 / 15 مل |
سير عمل تقنية التداخل الرناوي والتحقق من صحتها: النقل الجيني ← تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي/التحليل الغربي ← النمط الظاهري
خطط لإجراء عملية تحسين قبل التشغيل الرئيسي. حدد مستوى التكاثر وظروف المصل عند عملية النقل الجيني، وقم بمزج المركبات بعناية، وخذ عينات في فترات زمنية متعددة - 24 و48 و72 ساعة شائعة لدراسة حركية الحمض النووي الريبوزي المرسال/البروتين. استخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) للحصول على إشارة مبكرة، وفحوصات البروتين للتأكيد الوظيفي، ثم التقط النمط الظاهري باستخدام التصوير أو قراءات حيوية الخلايا.
قائمة التحقق المقترحة (مختصرة):
-
قم بزرع الخلايا حتى تصل إلى حوالي 70-80% من الكثافة عند عملية النقل الجيني؛ تأكد من خلوها من الميكوبلازما.
-
مركب RNAiMAX مع siRNA/miRNA بالنسب الموصى بها؛ يتضمن عنصر تحكم غير مستهدف وعنصر تحكم إيجابي GAPDH لمراقبة الجودة.
-
يتم جمع الحمض النووي الريبي (RNA) بعد 24-48 ساعة لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR)؛ ويتم جمع البروتين بعد 48-72 ساعة لإجراء تفاعل ويسترن/إليزا.
-
سجل النمط الظاهري (مثل التكاثر، علامات موت الخلايا المبرمج) وراقب السمية الخلوية؛ قم بمعايرة الكاشف والحمض النووي الريبي إذا انخفضت الحيوية.
نصائح لحل المشكلات:
-
انخفاض مستوى التثبيط: أعد معايرة جرعة siRNA وحجم RNAiMAX؛ تحقق من تسلسل الهدف وكثافة الخلايا.
-
السمية العالية: قلل كميات الكاشف/الحمض النووي الريبي، وتحول إلى ظروف متوافقة مع المصل، وقصّر مدة التعرض.
-
التأثيرات غير المستهدفة: استخدم تقنية Silencer Select الكيميائية والعديد من جزيئات siRNA المستقلة؛ تحقق من صحة النتائج باستخدام تقنية الإنقاذ حيثما أمكن ذلك.
الأسئلة الشائعة حول تقنية RNAi: نصائح حول إيقافها، وأدوات التحكم، واستكشاف الأخطاء وإصلاحها
تُسهّل الأسئلة الشائعة المختصرة عملية الإعداد للمستخدمين الجدد وتُسرّع عملية الإعداد المتكرر. استخدمها لربط الروابط الداخلية بمجموعات المنتجات، وأدوات التحكم، ومجموعات الملحقات في أماكن أخرى من الكتالوج.
س1. siRNA، أو miRNA mimic، أو المثبط - كيف أختار؟
ابدأ بالسؤال: هل هو تثبيط سريع للهدف (باستخدام siRNA)، أم نمذجة المسار الداخلي (باستخدام محاكي/مثبط miRNA)، أم تثبيط دائم (باستخدام shRNA)؟ ضع في اعتبارك توقيت قراءة النتائج وما إذا كان من المرغوب فيه عكس التأثير.
س2. ما هي الضوابط الأساسية؟
قم دائمًا بتشغيل عنصر تحكم سلبي غير مستهدف ، وعند الإمكان، عنصر تحكم إيجابي (مثل GAPDH siRNA) لتأكيد استجابة النقل/الفحص.
س3. ما الذي يميز Lipofectamine RNAiMAX لتقنية RNAi؟
تم تركيبه خصيصًا لتوصيل الحمض النووي الريبي الصغير، حيث يوازن بين الكفاءة العالية والسمية المنخفضة عبر العديد من الخطوط؛ وهو متوفر بدءًا من الفحص الصغير وحتى مقياس 15 مل.
س4. متى يجب عليّ قياس قوة السقوط؟
غالباً ما يظهر انخفاض مستوى الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) خلال 24-48 ساعة؛ وقد تتأخر التغيرات البروتينية إلى 48-72 ساعة، وذلك تبعاً لمعدل دوران البروتين. يجب التحقق من الفترة الزمنية المثلى في دراسة تجريبية.
تحدث إلى إيرايت
إذا كنت بحاجة إلى مساعدة في اختيار المزيج الأمثل من Silencer™ Select siRNA ، أو عناصر التحكم mirVana™ ، أو Lipofectamine™ RNAiMAX لتطبيقك، فتواصل مع Iright . يمكننا أن نوصي بحزم بداية (siRNA/miRNA + عناصر التحكم + عملية النقل الجيني)، ونُنسق أحجام العبوات مع إنتاجيتك، ونرتب توصيلًا سريعًا وفقًا لجدول مختبرك. شاركنا نموذج الخلية ونتائجك، وسنساعدك في تحديد الظروف النهائية والانتقال من الفرضية إلى عملية تثبيط جيني دقيقة وقابلة للتكرار.
