كواشف التصوير المجهري من BD لتقنيات التألق المناعي/التلوين المناعي الخلوي/التلوين المناعي النسيجي

عند التخطيط للتصوير متعدد الألوان - بدءًا من فحوصات ICC السريعة وصولًا إلى IHC بجودة النشر - توفر هذه المجموعة كواشف المجهر من BD في مكان واحد سهل الاستخدام. ستجد الأجسام المضادة الأساسية، وكواشف الخطوة الثانية، وأصباغ بوليمر Brilliant™، والمحاليل المنظمة، ومحاليل التثبيت/النفاذية واسترجاع المستضد، مع نصائح اختيار موجزة ووحدات SKU شائعة تم التحقق منها من كتالوج BD.

ما ستجده في إيرايت

صُممت هذه الصفحة لمساعدتك على الانتقال بسرعة من مرحلة التخطيط إلى اختيار المنتج. ستتعرف على كيفية توافق كواشف التألق المناعي (IF) والكيمياء المناعية الخلوية (ICC) والكيمياء المناعية النسيجية (IHC) من BD مع سير العمل المعتاد، ثم ستقارن بين الأصباغ وخيارات الخطوة الثانية، وأخيرًا ستختار من بين وحدات SKU المعتمدة التي يمكنك الحصول عليها مباشرةً من خلال Iright.

ما الذي تتضمنه مجموعة BD للمجهر والتصوير (التركيز على تقنيات التألق المناعي/التلوين المناعي الخلوي/التلوين المناعي النسيجي)؟

تغطي مجموعة منتجات المجهر من BD الأساسيات التي تستخدمها كل يوم: الأجسام المضادة الأولية لتقنية التألق المناعي/التلوين المناعي الخلوي/التلوين المناعي النسيجي، وأصباغ Brilliant™ بتقنية البوليمر (BV421، BV480) للحصول على إشارات أكثر سطوعًا، والأجسام المضادة والأنظمة المضادة للأنواع في الخطوة الثانية، والمحاليل المنظمة للحجب والتلوين، والمثبتات/كواشف النفاذية والاسترجاع للحصول على صور نظيفة وقابلة للتكرار.

لمحة سريعة (نطاق هذه المجموعة):

• المواد الأولية والكواشف المستخدمة في الخطوة الثانية، والتي تم التحقق من صحتها باستخدام تقنيات IF/ICC/IHC
• أصباغ البوليمر BD Horizon Brilliant™ (مثل BV421، BV480)
• مُلمّع البقع اللامع (والمُعزز) لتثبيت الألواح اللامعة المتعددة
• Cytofix/Cytoperm™، Perm/Wash™، ومحاليل الاسترجاع (pH 6.0/9.5)

نظرة عامة على عائلات المنتجات: الأجسام المضادة، والأصباغ البوليمرية، والمحاليل المنظمة، وغيرها

لتبسيط عملية الشراء، صنّف المنتجات حسب وظيفتها في غرفة المجهر. اطّلع على المجموعات أدناه، ثم انتقل إلى دليل الاختيار لمطابقة الأصباغ والمحاليل المنظمة مع جهازك ونوع النسيج لديك دون الحاجة إلى التخمين.

عائلات المنتجات (نظرة عامة):

• الأجسام المضادة الأولية (IF/ICC/IHC) - مستنسخات/مقترنات تم التحقق من صحتها لتحديد موقع البروتين.
• كواشف الخطوة الثانية - أنظمة مضادة للفئران/مضادة للأرانب، وأنظمة البيوتين/ستربتافيدين، وخيارات الامتزاز المتبادل.
• أصباغ البوليمر — BD Horizon Brilliant™ BV421/BV480 للسطوع العالي والتعدد.
• المحاليل المنظمة والمانعة للتسرب — محلول Brilliant Stain Buffer (BSB/BSB Plus)، محاليل مانعة للتسرب وغسيل.
• التثبيت والنفاذية — محلول/مجموعة Cytofix/Cytoperm™؛ Perm/Wash™.
• استرجاع المستضد - Retrievagen A (pH 6.0) و B (pH 9.5) لـ FFPE.

دليل الاختيار: اختر الأصباغ والأجسام المضادة والمحاليل المنظمة لمجهرِك

يعتمد اختيار التركيبة المناسبة على نوع العينة، ووفرة الهدف، والقنوات المتاحة، وما إذا كنت ستستخدم تقنية التعدد. استخدم القواعد السريعة أدناه لتحديد لوحة أولية، ثم اضبطها بدقة باستخدام جدول المقارنة في القسم التالي.

قواعد اتخاذ القرار السريع (قائمة التحقق):

• المنصة والليزر: إذا كان لديك قناة 405 نانومتر، فإن BV421 هو خيار ساطع ومنخفض الخلفية؛ قم بإقرانه مع BV480 لتوسيع القدرة المثارة بالبنفسجي في مجموعات الإرسال المتعدد.
  
• الأنسجة والاسترجاع: بالنسبة للأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين مع روابط متقاطعة من الفورمالين، ابدأ بـ Retrievagen A (الأس الهيدروجيني 6.0)؛ جرب Retrievagen B (الأس الهيدروجيني 9.5) للمستضدات التي تفضل الظروف القلوية.
  
• استقرار التعدد: عند دمج أصباغ Brilliant المتعددة، قم بتضمين محلول Brilliant Stain Buffer (BSB/BSB Plus) للتخفيف من تشوهات التلوين والحفاظ على الأنماط المتوقعة.
  
• الأهداف داخل الخلايا: استخدم Cytofix/Cytoperm™ (مع Perm/Wash™ ) للتثبيت المتسق والنفاذية القائمة على الصابونين.
  
• التحكم في الخلفية: يُفضل استخدام المواد الثانوية الممتصة بشكل متقاطع؛ الحفاظ على خطوات حجب وغسل متسقة؛ معايرة المواد الأولية. (انظر أفضل الممارسات.)

مقارنة الأصباغ الرئيسية وكواشف الخطوة الثانية: BV421/BV480، الإثارة/الانبعاث وحالات الاستخدام

قبل بناء لوحة، افهم النطاقات الطيفية والأدوار النموذجية لكل صبغة مُثارة بالبنفسجي، بالإضافة إلى طبقة الخطوة الثانية التي تحدد الخصوصية. يقدم الملخص أدناه إعدادات افتراضية عملية يمكنك تكييفها مع معظم تجهيزات التألق الضوئي والتصوير المجهري البؤري.

المرحلة الثانية (ما يجب مراعاته):

• المضيف والامتصاص المتبادل: مطابقة الأنواع المضادة (مثل مضاد الفأر / مضاد الأرنب) ويفضل الامتصاص المتبادل لتقليل الخلفية في الأنسجة المعقدة.
• الاقتران مقابل الإنزيمي: بالنسبة لـ IF النقي، اختر المواد الثانوية المقترنة بالفلوروفور؛ بالنسبة لـ IHC مع الكروموجينات، اتبع نظام DAB/AEC الخاص بك.
• عند استخدام عدة كواشف من نوع Brilliant: أضف محلول Brilliant Stain Buffer أو محلول Brilliant Stain Buffer Plus إلى المزيج؛ توصي BD بأحجام محددة لكل اختبار للحفاظ على الأنماط المتوقعة.

أفضل الممارسات لتقنية التألق المناعي/التلوين المناعي الخلوي/التلوين المناعي النسيجي: التثبيت/النفاذية، والحجب، والاسترجاع

تُبنى الصور الجيدة قبل وقت طويل من عملية التصوير. يلخص هذا القسم الخطوات الروتينية - التثبيت/النفاذية، والحجب، واستعادة المستضد - ويربطها بكواشف BD التي تجعل كل خطوة قابلة للتكرار عبر عمليات التشغيل والمشغلين.

نصائح بروتوكولية يمكنك تطبيقها اليوم:

• للتثبيت/النفاذية للأهداف داخل الخلايا: استخدم محلول BD Cytofix/Cytoperm™ (رقم المنتج 554722) مع Perm/Wash™ (رقم المنتج 554723)؛ ولتسهيل الأمر، تتضمن مجموعة التثبيت/النفاذية (رقم المنتج 554714) كلا المحلولين. حافظ على ثبات الوقت ودرجة الحرارة لحماية المستضدات.
  
• استرجاع المستضدات من عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين: ابدأ باستخدام محلول الاسترجاع Retrievagen A (الأس الهيدروجيني 6.0، رقم المنتج 550524)؛ ثم انتقل إلى محلول الاسترجاع Retrievagen B (الأس الهيدروجيني 9.5، رقم المنتج 550527) إذا كان المستضد المستهدف يفضل الكشف عنه في بيئة ذات أس هيدروجيني مرتفع. وثّق وقت الاسترجاع ودرجة الحرارة لكل جسم مضاد.
  
• نظام التعدد: عندما يكون هناك صبغتان أو أكثر من صبغات Brilliant في نفس المزيج، قم بتضمين Brilliant Stain Buffer (Cat. 563794/566349) أو BSB Plus لتقليل تفاعلات الصبغة مع الصبغة التي يمكن أن تشوه الأنماط.
  
• الحجب والغسل: استخدم الحجب الخالي من المصل عندما يكون هناك خطر ارتباط الأنواع المختلفة؛ حافظ على التحريك اللطيف وعدد مرات الغسل المتطابقة للحفاظ على انخفاض الخلفية.
• فحوصات سلامة الاستحواذ: قم بتشغيل عناصر تحكم التلوين الفردي لكل قناة؛ تحقق من التموضع المتوقع باستخدام هدف إيجابي معروف قبل التحجيم.

المنتجات الأكثر رواجاً ومجموعات البداية: الأجسام المضادة للتصوير من BD، والأصباغ البوليمرية، والمجموعات

تم استخلاص رموز المنتجات (SKUs) أدناه من صفحات منتجات BD وبياناتها لتزويدك بقائمة مواد أولية موثوقة. استخدمها كمكونات جاهزة للتجارب الأولية أو كعناصر أساسية في لوحة متعددة الألوان أكبر.

المخازن المؤقتة الأساسية والاسترجاع (وحدات SKU المعتمدة):

أمثلة على الأجسام المضادة المقترنة بـ Brilliant (أمثلة على IF/ICC/IHC):

الأسئلة الشائعة: التألق المناعي مقابل التلوين المناعي الخلوي مقابل التلوين المناعي النسيجي، المباشر مقابل غير المباشر، التحليل المتعدد ونصائح الخلفية

تعكس الأسئلة أدناه الغرض من البحث الذي نلاحظه فيما يتعلق بالتصوير باستخدام أصباغ ومحاليل BD. استخدمها لتصحيح أخطاء التجارب الأولية وتحديد الإعدادات الافتراضية على مستوى المختبر لتقليل الحاجة إلى إعادة التشغيل. تشير كل إجابة إلى إرشادات الاختيار والمقارنة المذكورة أعلاه.

س1. متى يجب عليّ اختيار BV421 بدلاً من BV480؟
ابدأ باستخدام BV421 للحصول على أقل تركيز للهدف على مسار 405 نانومتر؛ أضف BV480 للحصول على لون ثانٍ مُثار بالبنفسجي ذي أطياف مميزة لتحليل متعدد أكثر دقة على أنظمة التألق الضوئي أو المجهر متحد البؤر. استخدم محلول Brilliant Stain Buffer عند استخدام أصباغ Brilliant متعددة.

س2. هل أحتاج إلى استرجاع المستضد لجميع عينات FFPE IHC؟
ليس دائمًا، ولكن غالبًا ما يحجب الربط المتقاطع بالفورمالين بعض المواقع المستضدية. ابدأ بدرجة حموضة 6.0 (Retrievagen A) وارفعها تدريجيًا إلى درجة حموضة 9.5 (Retrievagen B) إذا كانت الإشارة ضعيفة. حافظ على ثبات ظروف الاسترجاع وتوثيقها لكل جسم مضاد.

س3. لماذا تبدو ألواني المتعددة "غير طبيعية" مع استخدام أصباغ بريليانت المتعددة؟
قد تتفاعل أصباغ البوليمر في الخلطات الكثيفة؛ يعمل محلول Brilliant Stain Buffer (أو Plus) على تقليل تشوهات التلوين واستعادة الأنماط المتوقعة. اتبع إرشادات BD الخاصة بحجم كل اختبار عند تحضير الخلطات.

تحدث إلى إيرايت

إذا كنت بصدد إعداد سير عمل تصوير جديد، أو توحيد سير عمل قائم على الأجهزة، فإن Iright تساعدك في ترجمة قواعد الاختيار المذكورة أعلاه إلى لوحة مُختبرة، وتوفير وحدات SKU المحددة المدرجة هنا. شاركنا نوع النسيج والقنوات والأهداف، وسنقترح عليك مجموعة تجريبية صغيرة بإعدادات افتراضية لتقنية BSB، والتثبيت/الثبات، والاسترجاع، يمكنك توسيع نطاقها بثقة.