سي إس تي، 16359 إل، محلول ديجيتونين

مساحة احتياطية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج بالنسبة لاختبارات CUT&RUN وCUT&Tag، نوصي بإضافة 25 ميكرولتر من محلول الديجيتونين لكل 1 مل من المحلول المنظم. لا تُظهر جميع سلالات الخلايا نفس الحساسية للديجيتونين، لذا قد يكون من الضروري تعديل الحجم النهائي للديجيتونين في المحلول المنظم للحصول على نفاذية مثلى لسلالة الخلايا الخاصة بك. يمكن اختبار نفاذية الخلايا بمزج حجم متساوٍ من معلق الخلايا مع صبغة تريبان الأزرق بتركيز 0.4%. ستؤدي النفاذية المثلى للخلايا إلى تلوين أكثر من 90% من الخلايا. تخزين يُقدّم محلول الديجيتونين في ماء خالٍ من النيوكلياز. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. هذا المنتج صالح للاستخدام لمدة 12 شهرًا على الأقل. خلفية على غرار اختبار الترسيب المناعي للكروماتين (ChIP)، تُعدّ تقنيتا القطع تحت الأهداف والإطلاق باستخدام النيوكلياز (CUT&RUN) والقطع تحت الأهداف والتجزئة (CUT&Tag) تقنيات فعّالة ومتعددة الاستخدامات لدراسة تفاعلات البروتين مع الحمض النووي ضمن سياق الكروماتين الطبيعي للخلية (1-7). توفر تقنية CUT&RUN اختبارًا سريعًا ودقيقًا وفعّالًا للكشف عن تفاعلات البروتين مع الحمض النووي في الخلية، حتى مع عدد قليل من الخلايا. وعلى عكس اختبار ChIP، فإنّ تقنية CUT&RUN لا تتطلب الربط المتقاطع بالفورمالديهايد، ولا تجزئة الكروماتين، ولا الترسيب المناعي، مما يجعلها طريقة أسرع وأكثر كفاءة لإثراء تفاعلات البروتين مع الحمض النووي وتحديد الجينات المستهدفة. يمكن إجراء اختبار CUT&RUN في أقل من يوم واحد، بدءًا من الخلايا الحية وصولًا إلى الحمض النووي النقي، وقد ثبتت فعاليته مع عدد قليل من الخلايا يتراوح بين 500 و1000 خلية لكل اختبار (1،2). بدلاً من تجزئة الكروماتين الخلوي بالكامل كما هو الحال في تقنية ChIP، تستخدم تقنية CUT&RUN هضم الكروماتين الموجه بالأجسام المضادة، مما ينتج عنه إشارة خلفية أقل بكثير من تلك الموجودة في اختبار ChIP. ونتيجة لذلك، تتطلب تقنية CUT&RUN عُشر عمق التسلسل المطلوب لاختبارات ChIP-seq فقط (1،2). وأخيرًا، يسمح تضمين الحمض النووي المُضاف كعنصر تحكم بسيط بالقياس الكمي الدقيق وتطبيع ارتباط البروتين المستهدف، وهو أمر غير ممكن باستخدام طريقة ChIP. وهذا يوفر تطبيعًا فعالًا للإشارات بين العينات وبين التجارب. تتمتع تقنية CUT&Tag بالعديد من المزايا نفسها التي تتمتع بها تقنية CUT&RUN، حيث توفر بروتوكولًا سريعًا وقويًا وفعالًا للكشف عن تفاعلات البروتين مع الحمض النووي في الخلية، حتى مع عدد قليل من الخلايا. بالإضافة إلى ذلك، تتضمن تقنية CUT&Tag خطوة ربط الحمض النووي المُحَوِّل بواسطة إنزيم pAG-Tn5، حيث يتم ربط الحمض النووي المُحَوِّل مباشرةً بشظايا الحمض النووي للكروماتين المُستهدفة بالأجسام المضادة داخل الخلية. ونتيجةً لذلك، يصبح تحضير مكتبة الحمض النووي اللاحقة أسرع وأسهل بكثير من تحضيرها بعد تقنية CUT&RUN، إذ يخلو من إصلاح نهايات الحمض النووي، وإضافة ذيل الأدينين، وربط المُحَوِّل. وتُعدّ تقنية CUT&Tag فعّالة للغاية في تحليل تعديلات الهيستون، بالإضافة إلى تحديد مواقع ارتباط بعض عوامل النسخ والعوامل المساعدة. أسماء بديلة سي آند آر؛ كنر. قطع وتشغيل؛ قطع وعلامة؛ قطع وعلامة؛ قطع وتشغيل؛ قطع وتشغيل؛ قطع وتشغيل؛ قطع وعلامة؛ كاتاندرون. CUTandRUN; CUTandTag; تعديل هيستون