CST، 35263S، ببتيدات التحكم PTMScan® بان-ميثيل ليسين

مستخلصات الخلايا للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج يُستخدم مع بروتوكول مجموعة PTMScan® من شركة Cell Signaling Technology بدءًا من خطوة تنقية المناعة (IAP). نظرًا لأن الكمية المثلى من ببتيدات التحكم PTMScan® Pan-Methyl Lysine لتجارب كل مستخدم تعتمد على عوامل خاصة، مثل حساسية مطياف الكتلة، يمكن للمستخدمين تخفيف هذه الببتيدات حسب الحاجة. 1. قسّم ببتيدات التحكم PTMScan® Pan-Methyl Lysine إلى حصص صغيرة للتخزين كوحدات للاستخدام الفردي عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو استخدمها فورًا. 2. أعد تعليق ببتيدات العينة في المحلول المنظم والحجم المناسبين، على سبيل المثال، 1.4 مل من محلول PTMScan® IAP المنظم (1X). 3. صفِّ ببتيدات العينة بالطرد المركزي. 4. انقل ببتيدات العينة المصفاة إلى أنابيب تحتوي على خرز IAP. ٥. أضف ١٠ ميكرولتر من ببتيدات التحكم PTMScan® Pan-Methyl Lysine إلى خرز IAP وببتيدات العينة، واخلط جيدًا. ٦. تابع إجراءات PTMScan® أو PTMScan® HS عند خطوة الحضانة لمدة ساعتين. ٧. اكشف عن ببتيدات التحكم PTMScan® Pan-Methyl Lysine في ملف بيانات LCMS. تخزين هذا المنتج مستقر لمدة 24 شهرًا عند تخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية. يُنصح بتقسيمه إلى حصص صغيرة لتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. خلفية يُعدّ مثيلة بقايا الليسين تعديلًا تنظيميًا شائعًا بعد الترجمة، ينتج عنه مثيلة أحادية أو ثنائية أو ثلاثية لليسين عند مجموعات الأمين ε بواسطة إنزيمات مثيلة الليسين البروتينية (PKMTs). تُصنّف إنزيمات PKMT إلى مجموعتين بناءً على بنيتها وآلية عملها التحفيزية: إنزيمات مثيلة الفئة الأولى، أو إنزيمات ذات سبعة خيوط β، وإنزيمات مثيلة الفئة الخامسة التي تحتوي على نطاق SET. يستخدم كلا النوعين مانح الميثيل S-أدينوزيل-L-ميثيونين لمثيلة بروتينات الهيستون وغير الهيستون. تقوم إنزيمات مثيلة الفئة الأولى بمثيلة الأحماض الأمينية والحمض النووي DNA والحمض النووي RNA (1،2). تُصنّف ست عائلات من البروتينات المتفاعلة مع مثيل الليسين بناءً على نطاقات الارتباط: MBT، وPHD finger، وTudor، وPWWP، وWD40 repeat، وchromodomains. تُظهر العديد من هذه البروتينات تفضيلات ارتباط تفاضلية بناءً على حالة مثيلة الليسين (3). تحفز إنزيمات إزالة مثيلة الليسين من عائلة KDM1 إزالة مثيلة الليسين أحادي وثنائي المثيل، بينما تُعدّل إنزيمات عائلة JmjC (KDM2-7) المعتمدة على 2-أوكسوغلوتارات بقايا الليسين ثلاثي المثيل أيضًا (4). معظم ركائز PKMT هي بروتينات هيستون وعوامل نسخ، مما يؤكد أهمية مثيلة الليسين في تنظيم بنية الكروماتين والتعبير الجيني. يُضاف مثيل أحادي أو ثنائي إلى الليسين 9 من الهيستون H3 بواسطة G9A/GLP، وثلاثي المثيلة بواسطة SETDB1 لتنشيط النسخ. تُنتج إزالة مثيلة نفس البقايا بواسطة JHDM3A الليسين 9 أحادي المثيل وتُثبط نسخ الجينات (5). يُنظم مثبط الورم p53 عن طريق مثيلة أربعة مواقع على الأقل. يُثبَّط النسخ بوساطة البروتين p53 بعد مثيلة أحادية للبروتين p53 عند الليسين 370 بواسطة SMYD2؛ وتُثبِّط المثيلة الثنائية عند نفس الموضع البروتين p53 بشكل أكبر عن طريق منع ارتباطه بـ 53BP1. وتُثبِّط المثيلة الثنائية المتزامنة عند الليسين 382 عملية إضافة اليوبيكويتين إلى البروتين p53 بعد تلف الحمض النووي. وتُثبِّط المثيلة الأحادية عند الليسين 382 بواسطة SET8 النشاط النسخي للبروتين p53، بينما تُثبِّط المثيلة الأحادية بواسطة SET7/9 عند الليسين 372 مثيلة SMYD2 عند الليسين 370 وتُثبِّت بروتين p53. وتُثبِّط المثيلة الثنائية عند الليسين 373 بواسطة G9A/GLP موت الخلايا المبرمج بوساطة البروتين p53، وترتبط بالمثيلة الثلاثية للهيستون H3 عند الليسين 9 في مُحفِّز p21 (1،6). يرتبط الإفراط في التعبير عن PKMTs بأشكال متعددة من السرطان البشري، مما أدى إلى اهتمام هائل باستهداف ميثيل ترانسفيرازات الليسين البروتينية في أبحاث اكتشاف الأدوية.