مجموعة تنقية الببتيدات PTMScan® من CST، رقم 35741S

مواد متنوعة للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج ملاحظات: • يمكن تنقية ما يقارب 20 ملغ من الببتيدات المهضومة بالبروتياز على عمود واحد من الطور العكسي C18. • تستخدم الخطوات الموضحة في قسم "تعليمات الاستخدام" التغذية بالجاذبية. في حال انخفاض معدل التدفق بشكل ملحوظ، يمكنك الضغط برفق على العمود باستخدام مكبس المحقنة. • في كل مرة يُضاف فيها محلول إلى العمود، قد تتشكل فقاعة هواء عند نقطة التقاء المحقنة بمدخل العمود، مما يُقلل معدل التدفق بشكل كبير. يجب إزالة الفقاعة بشطف العمود باستخدام طرف تحميل الجل المُركب على ماصة P200. 1. حمّض الببتيدات قبل التحميل بإضافة 1/20 من حجمها من حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك (TFA) بتركيز 20%، ليصل التركيز النهائي إلى 1%. 2. صفّ عينة الببتيد بالطرد المركزي عند 1780 × g في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. 3. انزع مكبس المحقنة سعة 10 مل واحتفظ به، ثم وصله بالطرف القصير لعمود C18. 4. بلل عمود C18 ذي الطور العكسي مسبقًا بـ 5 مل من الأسيتونيتريل النقي. 5. وازن العمود بثلاث غسلات متتالية باستخدام 1 و5 و6 مل من حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك (TFA) بتركيز 0.1%. 6. ضع عينة الببتيد المحمضة على العمود؛ سترتبط الببتيدات بمادة C18. 7. اغسل العمود بثلاث غسلات متتالية باستخدام 1 و5 و6 مل من حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك (TFA) بتركيز 0.1%. 8. اغسل العمود بـ 2 مل من الأسيتونيتريل بتركيز 5% مع حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك (TFA) بتركيز 0.1%. 9. ضع كل عمود فوق أنبوب تجميع جديد ونظيف سعة 50 مل. ١٠. قم باستخلاص الببتيدات ثلاث مرات باستخدام ٣ مل من محلول أسيتونيتريل ٤٠٪ مع ٠.١٪ من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك. ١١. يجب تجميد الببتيدات المستخلصة تمامًا قبل الانتقال إلى مرحلة التجفيف بالتجميد. جمّدها لمدة تتراوح بين ٤ و ١٦ ساعة في مجمد بدرجة حرارة -٨٠ درجة مئوية أو في حمام من الثلج الجاف والإيثانول. راجع بروتوكول PTMScan المحدد لمزيد من التفاصيل. تخزين يمكن تخزين الأعمدة والمحاقن في الكيس الأصلي المغلق لمدة تصل إلى 24 شهرًا في درجة حرارة الغرفة. وللحصول على أفضل النتائج، يجب إغلاق الأكياس المفتوحة بإحكام باستخدام شريط لاصق، وتخزين العبوة المغلقة في مجفف لمدة تصل إلى 6 أشهر. خلفية تُعدّ كروماتوغرافيا الطور المعكوس تقنيةً مهمةً للفصل والتنقية الكيميائية الحيوية التحليلية والتحضيرية. إذ يُمكن فصل البروتينات والببتيدات والأحماض النووية الكارهة للماء باستخدام كروماتوغرافيا الطور المعكوس بدقةٍ واستعادةٍ ممتازتين. علاوةً على ذلك، يُتيح استخدام مُعدِّلات اقتران الأيونات في الطور المتحرك إجراء كروماتوغرافيا الطور المعكوس للمواد المذابة المشحونة، مثل الببتيدات المحبة للماء والنيوكليوتيدات قليلة السلسلة المُزالة الحماية بالكامل. وقد استُخدمت كروماتوغرافيا الطور المعكوس التحضيرية في تطبيقاتٍ تتراوح بين التنقية الدقيقة لشظايا البروتين لأغراض التسلسل (1) إلى تنقية منتجات البروتين المؤتلف على نطاقٍ واسع (2) وتحليل البروتينات باستخدام مطياف الكتلة (3). أسماء بديلة C18؛ سيب-باك