CST، 47099T، جسم مضاد أحادي النسيلة للفأر من نوع DNA-RNA الهجين (S9.6)

جسم مضاد أحادي النسيلة للدراسة. مُعتمد وظيفيًا. متوفر بحجمين. جسم مضاد أحادي النسيلة من الفأر، هجين الحمض النووي الريبي-الحمض النووي (S9.6) (CST #47099)، عالي التخصص ومُعتمد داخليًا، جاهز للشحن. معلومات استخدام المنتج تم إجراء تحليل البقعة النقطية لحلقات الحمض النووي الريبوزي (R-loops) باستخدام أنواع الحمض النووي الهجين DNA-RNA، والحمض النووي المزدوج (dsDNA)، والحمض النووي الريبوزي المزدوج (dsRNA) وفقًا للبروتوكول المفصل المنشور في PMID: 33554969. باختصار: 1. اطلب النيوكليوتيدات بناءً على PMID: 33554969. أعد تعليقها في محلول التلدين عند تركيز 10 ملي مولار من Tris (الأس الهيدروجيني 8.0)، و50 ملي مولار من كلوريد الصوديوم، و1 ملي مولار من EDTA للوصول إلى تركيز نهائي قدره 100 ميكرومولار. 2. حضّر محاليل بتركيز 10 ملي مولار من أنواع الحمض النووي الهجين DNA-RNA، وdsDNA، وdsRNA عن طريق حضانة كميات متساوية من النيوكليوتيدات المقابلة في محلول التلدين، وتسخينها إلى 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، ثم تركها لتبرد ببطء إلى درجة حرارة الغرفة للسماح بإعادة تلدين السلاسل. 3. حضّر تخفيفات متسلسلة من الأوليغومرات المهجنة بتراكيز نهائية 80، 20، 10، و4 نانومتر في محلول التلدين، ثم ضع 50 مل من كل عينة في آبار منفصلة من جهاز التلطيخ النقطي ذي 96 بئرًا، ثم ضعها على غشاء نايلون مبلل مسبقًا. 4. طبّق ضغطًا خفيفًا لسحب المحلول عبر الغشاء، ثم لفّ الغشاء الجاف جزئيًا بغلاف بلاستيكي. 5. عالج الغشاء بالأشعة فوق البنفسجية مرتين باستخدام جهاز ربط بالأشعة فوق البنفسجية عند 1200 جول/م². 6. حضّر محلول الحجب: 5% حليب في محلول ملحي مُخفّف بالتروميثامين مع 0.05% توين 20 (TBST)؛ حضّن الغشاء في 25 مل من محلول الحجب مع التحريك اللطيف لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٧. اغسل الغشاء ثلاث مرات لمدة ٥ دقائق في كل مرة باستخدام ١٥ مل من محلول TBST بتركيز ١X، ثم حضّنه طوال الليل في الجسم المضاد الأولي بتخفيف ١:١٠٠٠ في ١٠ مل من محلول الحجب مع التحريك اللطيف عند درجة حرارة ٤ مئوية. ٨. اغسل الغشاء ثلاث مرات لمدة ٥ دقائق في كل مرة باستخدام ١٥ مل من محلول TBST بتركيز ١X، ثم حضّنه مع الجسم المضاد IgG المضاد للفأر، المرتبط بإنزيم بيروكسيداز الفجل رقم ٧٠٧٦ بتخفيف ١:٢٠٠٠ في ١٠ مل من محلول الحجب مع التحريك اللطيف لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل الغشاء ثلاث مرات لمدة ٥ دقائق في كل مرة باستخدام ١٥ مل من محلول TBST بتركيز ١X، ثم طوّره باستخدام كواشف التلألؤ الكيميائي المعزز (ECL) للحصول على الإشارات اللازمة للتصوير. وظيفي: 1:1000 تخزين يُزوَّد هذا المنتج في محلول يحتوي على 10 ملي مولار من هيبس الصوديوم (الأس الهيدروجيني 7.5)، و150 ملي مولار من كلوريد الصوديوم، و100 ميكروغرام/مل من ألبومين المصل البقري، و50% جلسرين، وأقل من 0.02% أزيد الصوديوم. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. النوعية / الحساسية يتعرف الجسم المضاد أحادي النسيلة للفأر الهجين DNA-RNA (S9.6) على المستويات الداخلية لحلقات DNA-RNA R. وقد تم التحقق من صحة هذا الجسم المضاد باستخدام فحوصات البقعة النقطية، ويُظهر خصوصية لـ التفاعل مع الأنواع: من المتوقع أن يتفاعل مع جميع الأنواع المصدر / التنقية يتم إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عن طريق تحصين الحيوانات باستخدام ثنائي البوليمر غير المتجانس DNA-RNA الناتج عن نسخ الحمض النووي أحادي السلسلة φX174 (ssDNA) باستخدام بوليميراز الحمض النووي المعتمد على الحمض النووي. خلفية حلقات الحمض النووي الريبوزي (R-loops) هي تراكيب ثلاثية السلاسل من الأحماض النووية، تتكون من هجين DNA-RNA وسلسلة DNA أحادية (ssDNA). تتشكل هذه التراكيب أثناء عملية النسخ عندما يرتبط جزيء RNA حديث التكوين بسلسلة DNA القالب، مُزيحًا سلسلة DNA غير القالب. تُعرف حلقات الحمض النووي الريبوزي بأدوارها المحورية في العديد من العمليات الخلوية، بما في ذلك تنظيم الجينات، وإنهاء النسخ، والاستجابة لتلف الحمض النووي (1). على الرغم من أن حلقات الحمض النووي الريبوزي تتشكل طبيعيًا أثناء النسخ، إلا أن استمرار تشكلها وعدم تحللها بشكل صحيح قد يؤدي إلى آثار ضارة على سلامة الجينوم (2). وفي هذا السياق، رُبط تشكل حلقات الحمض النووي الريبوزي غير الطبيعي وتراكمها بعدد متزايد من الأمراض البشرية، بما في ذلك الأمراض التنكسية العصبية، وترنح فريدريك، والتصلب الجانبي الضموري (ALS)، والتهاب الأمعاء، والأهم من ذلك، أنواع مختلفة من السرطان (3-6). مواصفة التفاعل: الكل الحساسية: داخلية المنشأ المصدر/النمط المصلي: IgG2a الفأري