CST، 64334S، يوبيكويتين متعدد الفروع TUBE-RAD23A (مقترن بالخرز المغناطيسي)

كواشف التقارب والتنقية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج أضف الخرز بتخفيف 1:20 إلى مستخلصات الخلايا المُحضّرة في محلول تحلل الخلايا 1X (10X) رقم 9803. اخلط المزيج طوال الليل عند درجة حرارة 4 مئوية. اغسل خمس مرات بمحلول تحلل الخلايا 1X. لمزيد من التفاصيل، راجع بروتوكول الترسيب المناعي للبروتينات الأصلية. لغسل الخرز وغسل المركبات المنقاة بالتقارب لاحقًا، يمكن فصل الخرز عن المحلول باستخدام حامل الفصل المغناطيسي ذي الأنابيب الستة رقم 7017. ضع الأنابيب التي تحتوي على الخرز في حامل الفصل المغناطيسي وانتظر من دقيقة إلى دقيقتين حتى يصبح المحلول صافيًا قبل إزالة السائل الطافي بعناية. أخرج الأنابيب من حامل الفصل المغناطيسي، وأضف محلولًا جديدًا، وأعد تعليق الخرز عن طريق الخلط أو الرج الخفيف للأنابيب. تخزين متوفر في محلول منظم الفوسفات الملحي (الأس الهيدروجيني 7.2)، 0.1% توين 20. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. لا تقسمه إلى أجزاء. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: الترسيب المناعي النوعية / الحساسية يرتبط بروتين TUBE-RAD23A بالمستويات الداخلية للبروتينات التي تحتوي على سلاسل متعددة اليوبيكويتين. ويرتبط بسلاسل رباعي اليوبيكويتين المتفرعة عند K48 و K63. التفاعل مع الأنواع: من المتوقع أن يتفاعل مع جميع الأنواع المصدر / التنقية تم إنتاج TUBE، المصمم من نطاق ربط اليوبيكويتين الخاص بـ RAD23A، في . خلفية اليوبيكويتين وحدة ببتيدية محفوظة تلعب دورًا هامًا في مسار اليوبيكويتين-بروتيازوم. يرتبط اليوبيكويتين تساهميًا بالعديد من البروتينات الخلوية عبر عملية اليوبيكويتين، التي تستهدف البروتينات لتحللها بواسطة البروتيازوم 26S. تتضمن عملية اقتران اليوبيكويتين بالبروتين المستهدف ثلاثة مكونات. يُنشط اليوبيكويتين أولًا بتكوين معقد ثيول إستر مع مكون التنشيط E1؛ ثم يُنقل اليوبيكويتين المنشط إلى بروتين حامل اليوبيكويتين E2، ومن E2 إلى إنزيم ربط اليوبيكويتين E3 لتوصيله النهائي إلى مجموعة الأمين الطرفية (ε-NH) لبقايا الليسين (1-3) في البروتين المستهدف. وقد ثبت تورط مسار اليوبيكويتين-بروتيازوم في نطاق واسع من العمليات البيولوجية الطبيعية وفي التشوهات المرتبطة بالأمراض. أظهرت العديد من البروتينات، مثل IκB وp53 وcdc25A وBcl-2، أنها أهداف لعملية اليوبيكويتين-البروتيازوم كجزء من تنظيم تقدم دورة الخلية، والتمايز، والاستجابة للإجهاد الخلوي، والاستماتة (4-7). ترتبط البروتينات الركيزة باليوبيكويتين باستخدام سبعة بقايا ليسين مميزة (Lys6، Lys11، Lys27، Lys29، Lys33، Lys48، وLys63). يتشكل سلسلة متعددة اليوبيكويتين عندما يرتبط بقايا ليسين من اليوبيكويتين بالجليسين الطرفي الكربوكسيلي ليوبيكويتين آخر. تُظهر البروتينات متعددة اليوبيكويتين عند بقايا ليسين محددة ميلًا لأن تكون هدفًا لعمليات مختلفة. تستهدف سلاسل البولي يوبيكويتين المرتبطة بـ K48 البروتينات بشكل أساسي للتحلل البروتيني بواسطة البروتيازوم، بينما تنظم سلاسل البولي يوبيكويتين المرتبطة بـ K63 وظيفة البروتين، وموقعه داخل الخلية، أو تفاعلاته مع البروتينات الأخرى (8). وتؤدي سلاسل البولي يوبيكويتين المرتبطة بـ K63 وظائف غير بروتينية، مثل نقل البروتين، وتنشيط الكيناز/الفوسفاتاز، والتحكم في تلف الحمض النووي، وكلها قد تكون مهمة في تنظيم بقاء السرطان وتطوره (9، 10). تُعد نطاقات اليوبيكويتين المرتبطة (UBA) مناطق بروتينية تتفاعل مع اليوبيكويتين. وقد صُممت كيانات ربط اليوبيكويتين المتكررة (TUBEs) باستخدام أربعة نطاقات UBA متكررة، استنادًا إلى نظرية أن سلاسل رباعي اليوبيكويتين هي الحد الأدنى المطلوب للتحلل البروتيني الفعال بواسطة البروتيازوم (11). ترتبط الأنابيب المصممة بمجالات UBA من UBQLN1 و RAD23A بسلاسل رباعي اليوبيكويتين المرتبطة بـ K48 و K63 ويمكن استخدامها لتنقية البروتينات الميوبيكويتينية بكفاءة من مستخلصات الخلايا (12).