CST، 6620S، SignalSilence® AMPK alpha2 siRNA I

استخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) لدراسة AMPK-alpha2 في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج توصي شركة CST بإجراء عملية نقل الجينات باستخدام 100 نانومتر من SignalSilence® AMPK alpha2 siRNA I قبل 48 إلى 72 ساعة من تحلل الخلايا. لإجراء عملية نقل الجينات، اتبع البروتوكول المقدم من الشركة المصنعة لكاشف نقل الجينات. لا تتردد في الاتصال بشركة CST لأي استفسارات حول الاستخدام. تحتوي كل قارورة على ما يعادل 100 عملية نقل جينات، وهو ما يتوافق مع تركيز نهائي لـ siRNA يبلغ 100 نانومتر لكل عملية نقل جينات في صفيحة ذات 24 بئراً بحجم إجمالي 300 ميكرولتر لكل بئر. تخزين يُزوَّد منتج SignalSilence® siRNA في ماء خالٍ من إنزيم RNase. قسّم المنتج إلى حصص صغيرة وخزّنها في درجة حرارة -20 درجة مئوية. خلفية يُعدّ بروتين كيناز المُنشّط بواسطة AMP (AMPK) مُحافَظًا عليه بدرجة عالية من الخميرة إلى النباتات والحيوانات، ويلعب دورًا محوريًا في تنظيم استتباب الطاقة (1). يتكون AMPK من مُركّب غير متجانس ثلاثي الوحدات، يتألف من وحدة فرعية محفزة α ووحدتين فرعيتين تنظيميتين β و γ، تُشفّر كل منهما بواسطة جينين أو ثلاثة جينات مُختلفة (α1، 2؛ β1، 2؛ γ1، 2، 3) (2). يُنشّط هذا الكيناز بارتفاع نسبة AMP/ATP نتيجةً للإجهاد الخلوي والبيئي، مثل الصدمة الحرارية ونقص الأكسجة ونقص التروية (1). يقوم مثبط الورم LKB1، بالاشتراك مع البروتينات المساعدة STRAD و MO25، بفسفرة AMPKα عند Thr172 في حلقة التنشيط، وهذه الفسفرة ضرورية لتنشيط AMPK (3-5). يخضع AMPKα أيضًا للفسفرة عند Thr258 وSer485 (لـ α1؛ وSer491 لـ α2). لم يُكشف بعد عن الكيناز المُحفِّز والأهمية البيولوجية لهذه الفسفرة (6). تخضع الوحدة الفرعية β1 لتعديل ما بعد الترجمة عن طريق الميريستلة والفسفرة في مواقع متعددة تشمل Ser24/25 وSer96 وSer101 وSer108 وSer182 (6، 7). يبدو أن الفسفرة عند Ser108 في الوحدة الفرعية β1 ضرورية لتنشيط AMPK، بينما تؤثر الفسفرة عند Ser24/25 وSer182 على تموضع AMPK (7). تم تحديد العديد من الطفرات في الوحدات الفرعية AMPKγ، ويقع معظمها في مواقع ارتباط AMP/ATP المفترضة (مجالات CBS أو Bateman). تؤدي الطفرات في هذه المواقع إلى انخفاض نشاط AMPK وتسبب تراكم الجليكوجين في عضلة القلب أو العضلات الهيكلية (1،2). وتشير الأدلة المتراكمة إلى أن AMPK لا ينظم استقلاب الأحماض الدهنية والجليكوجين فحسب، بل يعدل أيضًا تخليق البروتين ونمو الخلايا من خلال مسارات EF2 وTSC2/mTOR، بالإضافة إلى تدفق الدم عبر eNOS/nNOS (1). أسماء بديلة ampk-alpha مواصفة التفاعل: H