BD، 550010، محلول تثبيت BD Pharmingen™ ICC

التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات استخدام محلول تثبيت السيتوكينات في الكيمياء المناعية الخلوية: 1. اجمع الخلايا واغسلها مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) باستخدام جهاز الطرد المركزي (400 × جم لمدة 5 دقائق) لإزالة البروتين المتبقي. 2. اضبط تركيز الخلايا عند 4-5 × 10^6 خلية/مل في محلول الفوسفات الملحي (PBS). 3. ضع 20 ميكرولتر من معلق الخلايا في كل بئر من شرائح الالتصاق واتركها تلتصق في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. يُرجى ملاحظة أنه يجب غسل الشرائح بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق قبل نقل الخلايا. 4. ثبّت الخلايا على الشرائح باستخدام محلول تثبيت الكيمياء المناعية الخلوية (رقم المنتج 550010) لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 5. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق. ٦. حضّن الشرائح بمحلول فوسفات ملحي مُدعّم بـ ١٪ (وزن/حجم) من ألبومين المصل البقري (سيجما) لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة أو ١٠ دقائق عند ٣٧ درجة مئوية. ٧. اغسل الشرائح مرتين بمحلول فوسفات ملحي، ثم ابدأ عملية التلوين، أو جففها بالهواء واحفظها عند -٨٠ درجة مئوية لاستخدامها لاحقًا. ٨. حضّن الشرائح مع ٢٠ ميكرولتر من مصل الماعز بتركيز ١٪ ومحلول فوسفات ملحي مع ٠.١٪ (وزن/حجم) من الصابونين لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل الشرائح مرتين بمحلول فوسفات ملحي مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٠. عطّل نشاط البيروكسيداز الداخلي باستخدام محلول تثبيط البيروكسيداز الداخلي (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ١١. اغسل الشرائح مرتين بمحلول فوسفات ملحي مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٢. حضّن كل بئر مع الأفيدين (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٥ دقيقة. ١٣. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٤. حضّن كل بئر مع البيوتين (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٥ دقيقة. ١٥. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٦. حضّن كل بئر لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع ٢٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة النقية الخاصة بالسيتوكين أو نظير الغلوبولين المناعي المناسب كعنصر تحكم، مخففًا في محلول تخفيف الأجسام المضادة للتلوين المناعي النسيجي (رقم المنتج ٥٥٩١٤٨). ١٧. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٨. حضّن كل بئر مع ٢٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية المبيوتينية المخففة في محلول التخفيف (رقم المنتج ٥٥٩١٤٨) لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ١٩. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ٢٠. ضع ٢٠ ميكرولتر من ستربتأفيدين-HRP (رقم المنتج ٥٥٠٩٤٦) في كل بئر على الشرائح، ثم حضّنها لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٢١. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق لكل مرة. ٢٢. حضّن الشرائح مع ٣،٣'-ثنائي أمينوبنزيدين رباعي الهيدروكلوريد (DAB) (رقم المنتج ٥٥٠٨٨٠) لمدة أقل من ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ٢٣. أوقف تفاعل اللون بالغسل بمحلول الفوسفات الملحي (PBS). ٢٤. تُثبّت الشرائح بعد ذلك في وسط تثبيت للتخزين قصير الأجل. أجهزة الطرد المركزي الخلوية: ١. جهّز حجرة عينة جهاز الطرد المركزي الخلوي (مثل Cytospin 3، Shandon، المملكة المتحدة أو جهاز طرد مركزي مماثل)، وبطاقة الترشيح، والشرائح، وحوامل جهاز الطرد المركزي الخلوي وفقًا لمواصفات الشركة المصنعة. ٢. ضع ٤٠ ميكرولتر من حوالي ١ × ١٠^٦ خلية في كل حجرة عينة. ٣. قم بتدوير الشرائح بسرعة ٦٠٠ دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين. ٤. أخرج الشرائح من حامل جهاز الطرد المركزي وضعها على حامل التلوين. ٥. للتثبيت والتلوين، يرجى اتباع الخطوات من ٤ إلى ٢٤ المذكورة أعلاه لتلوين الخلايا على شرائح الالتصاق. خطر: يحتوي محلول تثبيت ICC على ٢.٠٩٪ فورمالديهايد. بيانات المخاطر: قد يسبب رد فعل تحسسي جلدي. يُشتبه في أنه يسبب عيوبًا وراثية. قد يسبب السرطان. طريقة التعرض: الاستنشاق. بيانات الاحتياطات: ارتدِ ملابس واقية / واقي للعينين. ارتدِ قفازات واقية. تجنب استنشاق الرذاذ / الأبخرة / البخاخ. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيبًا. في حالة ملامسة الجلد: اغسل بكمية كبيرة من الماء. تخلص من المحتويات / العبوة وفقًا للوائح المحلية / الإقليمية / الوطنية / الدولية.
إشعارات المنتج: يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.