BD، 551516، جزيئات BD IMag™ المضادة للفأر CD8a - DM

الاسم البديل: CD8a؛ سلسلة ألفا CD8؛ Ly-2؛ Lyt2؛ Lyt-2؛ Ly-35؛ Ly-B
النمط المصلي: فأر LOU، المعروف أيضًا باسم Louvain، LOU/C، LOU/M IgG2a، κ
المستضد: خلايا طحال الفأر أو أغشية الخلايا التائية
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
RRID: AB_398512
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم الكريات البيضاء بجزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD8a الفأرية - DM وفقًا لبروتوكول الوسم المغناطيسي. ثم يوضع معلق الخلايا الموسوم داخل المجال المغناطيسي لجهاز فصل الخلايا المغناطيسي BD IMag™ (رقم المنتج 552311). تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الجزء الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليسهل سحبها (الجزء السالب). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي لإعادة تعليق الجزء الموجب. تُكرر عملية الفصل مرتين لزيادة نقاء الجزء الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. بعد غسل الجزء الموجب، يسمح صغر حجم الجزيئات المغناطيسية بتقييم هذا الجزء بشكل أكبر في تطبيقات لاحقة مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم المغناطيسي: 1. تحضير معلق خلوي أحادي من النسيج اللمفاوي المطلوب وفقًا لإجراءات المختبر القياسية. أزل تجمعات الخلايا و/أو الحطام بتمرير المعلق عبر مصفاة خلايا من النايلون بمسام 70 ميكرومتر. 2. خفف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام ماء مقطر معقم، أو حضّر محلول BD IMag™ بتركيز 1X بإضافة 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA) و2 ملي مول من EDTA و0.09% من أزيد الصوديوم إلى محلول ملحي مُخفف بالفوسفات. ضعه على الثلج. على الرغم من أن تجربتنا تشير إلى أن استخدام الأجسام المضادة النقية للفئران CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) (رقم المنتج 553141/553142) ليس ضروريًا لفصل الخلايا الأمثل، إلا أن بعض المختبرات قد ترغب في استخدامه في دراساتها. في حال إضافة مُثبِّط مستقبلات Fc الفأرية من BD، انتقل إلى الخطوة 3. في حال عدم إضافة مُثبِّط مستقبلات Fc الفأرية من BD، انتقل إلى الخطوة 4. 3. أضف مُثبِّط مستقبلات Fc الفأرية من BD بتركيز 0.25 ميكروغرام/10^6 خلية، وحضّنها على الجليد لمدة 15 دقيقة. 4. اغسل الخلايا بحجم مساوٍ على الأقل من محلول BD IMag المُخفَّف (1X)، ثم اسحب السائل الطافي بعناية. 5. رجّ جزيئات BD™ IMag المضادة لـ CD8a الفأرية - DM جيدًا، وأضف 50 ميكرولتر من الجزيئات لكل 10^7 خلية. 6. اخلط جيدًا. ضعها في الثلاجة عند درجة حرارة تتراوح بين 6 و12 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ٧. ارفع حجم محلول وسم جسيمات BD IMag إلى ١-٨ × ١٠^٧ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ بتركيز ١X، ثم ضع الأنبوب فورًا على مغناطيس فصل الخلايا BD IMag™. حضّنه في درجة حرارة الغرفة لمدة ٦-٨ دقائق. ٨. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا BD IMag™، اسحب السائل الطافي بحرص. يحتوي هذا السائل الطافي على الجزء السالب. ٩. أزل الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا BD IMag™، وأضف محلول BD IMag™ بتركيز ١X إلى نفس الحجم كما في الخطوة ٧. أعد تعليق الخلايا برفق عن طريق السحب والضخ لفترة وجيزة، ثم أعد الأنبوب إلى مغناطيس فصل الخلايا BD IMag™ لمدة ٢-٤ دقائق أخرى. ١٠. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا BD IMag™، اسحب السائل الطافي بحرص وتخلص منه. ١١. كرر الخطوتين ٩ و١٠. ١٢. بعد خطوة الغسل الأخيرة، أعد تعليق الجزء الموجب في محلول منظم مناسب وبتركيز مناسب لإجراء المزيد من التحليلات. ملاحظة: تجنب التلوين غير النوعي بالعمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها.
إشعارات المنتج: تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة وظيفيًا بمجموعة الكربوكسيل، وهي من إنتاج شركة Skold Technology ومرخصة بموجب براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. يُرجى زيارة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). يُرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.