BD، 554723، BD Perm/Wash™ Perm/Wash Buffer

التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية. ملاحظة: يتكون محلول BD Perm/Wash buffer من 100 مل من محلول مركز (10X) يحتوي على كلٍ من مصل الأبقار الجنيني (FBS) والصابونين. من الشائع أن يختلف لون هذا المنتج من دفعة إلى أخرى. كما يُعد وجود كمية صغيرة من الراسب غير القابل للذوبان أمرًا شائعًا. لا يؤثر اختلاف اللون أو وجود الراسب على أداء المنتج. إذا رغبت في ذلك، يمكنك إزالة الراسب قبل الاستخدام بتمرير محلول BD Perm/Wash buffer المخفف (1X) عبر مرشح بمسام 0.45 ميكرون.
إجراءات الفحص الموصى بها: تحفيز الخلايا: تم الإبلاغ عن طرق مختلفة في المختبر لتحفيز الخلايا على إنتاج السيتوكينات. وقد أثبتت المنشطات متعددة النسائل فائدتها بشكل خاص في تحفيز الخلايا المنتجة للسيتوكينات. وتشمل هذه المنشطات ما يلي: كونكانافالين أ، والليبوساكاريد، وإسترات الفوربول بالإضافة إلى أيونوفور الكالسيوم أو الأيونوميسين، والفيتوهيماغلوتينين، وسموم المكورات العنقودية المعوية ب، والأجسام المضادة وحيدة النسيلة الموجهة ضد وحدات فرعية من معقد مستقبلات الخلايا التائية/CD3 (مع أو بدون أجسام مضادة موجهة ضد مستقبلات التحفيز المشترك، مثل CD28). طريقة استخدام محلول BD Perm/Wash™: 1. تثبيت الخلايا باستخدام محلول يحتوي على بارافورمالدهيد، أو استخدام محلول BD Cytofix/Cytoperm™ (رقم المنتج 554722). 2. نفاذية الخلايا المثبتة بغسلها مرتين بمحلول BD Perm/Wash™ بتركيز 1X (رقم المنتج 554723) (على سبيل المثال، 1 مل/غسلة للتلوين في الأنابيب و250 ميكرولتر/غسلة كحجم نهائي للتلوين في صفائح الميكروويل). حضن الخلايا لمدة 15 دقيقة في محلول BD Perm/Wash™ بتركيز 1X (يمكن الاستغناء عن فترة التحضين لمدة 15 دقيقة في حال استخدام محلول BD Cytofix/Cytoperm™ لتثبيت الخلايا). ترسيب الخلايا. أ. تخفيف محلول BD Perm/Wash™ بتركيز 10X في الماء المقطر لتحضير محلول بتركيز 1X قبل الاستخدام. 3. تلوين السيتوكينات داخل الخلايا. أعد تعليق الخلايا المثبتة/المنفذة جيدًا في 50 ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash الذي يحتوي على تركيز مثالي محدد مسبقًا من جسم مضاد مضاد للسيتوكين مرتبط بصبغة فلورية أو عينة تحكم سلبية مناسبة. حضّن الخلايا عند درجة حرارة 4 مئوية لمدة 30 دقيقة في الظلام. ب. اغسل الخلايا مرتين بمحلول BD Perm/Wash بتركيز 1X (1 مل/غسلة للتلوين في الأنابيب و250 ميكرولتر/غسلة كحجم نهائي للتلوين في صفائح الميكروويل) وأعد تعليقها في محلول التلوين قبل تحليل التدفق الخلوي. ملاحظة: يتضمن كل من محلول BD Perm/Wash (رقم المنتج 554723) ومحلول BD Cytofix/Cytoperm (رقم المنتج 554722) مجموعة BD Cytofix/Cytoperm (رقم المنتج 554714)، بالإضافة إلى مجموعة BD Cytofix/Cytoperm Plus التي تحتوي على مثبط نقل البروتين BD GolgiStop™ (يحتوي على مونينسين؛ رقم المنتج 554715) ومجموعة BD Cytofix/Cytoperm Plus™ التي تحتوي على مثبط نقل البروتين BD GolgiPlug™ (يحتوي على بريفيلدين أ؛ رقم المنتج 555028). تحذير: يحتوي محلول BD Perm/Wash على الصابونين وأزيد الصوديوم، وهما مادتان سامتان. تجنب ملامستهما للجلد والعينين والأغشية المخاطية.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة.