BD، 557983، جزيئات مغناطيسية مضادة للأجسام المضادة IgG1 للفأر من BD IMag™ - DM

الاسم البديل: Ighg1؛ الغلوبولين المناعي الثقيل الثابت غاما 1؛ Igh-4
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: فأر LOU، المعروف أيضًا باسم Louvain، LOU/C، LOU/M IgG1، κ
المستضد: IgG1 الفأر المجمع
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
RRID: AB_398640
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات الفحص الموصى بها: بروتوكول الوسم والفصل المغناطيسي 1. حضّر المحاليل المنظمة التالية وضعها على الثلج. أ. محلول تلوين الخلايا: محلول ملحي منظم بالفوسفات، 3% مصل جنيني بقري معطل حرارياً، 0.1% أزيد الصوديوم. ب. محلول BD IMag™ المخفف (1X): خفف محلول BD IMag™ المخفف (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام ماء مقطر معقم، أو بدلاً من ذلك، حضّر محلول ملحي مُخفف بالفوسفات، مُضافًا إليه 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA)، و2 ملي مول من ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الأسيتيك (EDTA)، و0.09% من أزيد الصوديوم.* 2. حضّر معلقًا خلويًا أحاديًا من النسيج اللمفاوي المطلوب، أو حضّر خلايا الدم أحادية النواة الطرفية (PBMC) من دم مُعالج بمضادات التخثر، ويُفضل استخدام تقنية الطرد المركزي بتدرج الكثافة باستخدام محلول فيكول-باك™ ذي الكثافة المناسبة. أزل تكتلات الخلايا و/أو الحطام بتمرير الخلايا المعلقة عبر مصفاة خلايا من النايلون بمسام 70 ميكرومتر. 3. عدّ الخلايا، وأعد تعليقها في محلول تلوين الخلايا بتركيز 2 × 10⁷ خلية/مل. ٤. أضف الجسم المضاد IgG1 للفأر (أو مزيجًا من الأجسام المضادة IgG1 للفأر) بالتركيز المناسب، وحضّن على الجليد لمدة ١٥ دقيقة.† ٥. اغسل الخلايا الموسومة بكمية زائدة من محلول BD IMag™ المخفف (١X)، ثم اسحب السائل الطافي بالكامل بعناية. في حالة الاستنزاف، تابع الخطوة ٦. في حالة الانتقاء الإيجابي، تابع الخطوة ١٧. الاستنزاف: ٦. رجّ جزيئات BD IMag™ المغناطيسية المضادة لـ IgG1 للفأر - DM جيدًا، وأضف ٥٠ ميكرولتر من الجزيئات لكل ١ × ١٠⁷ خلية. ٧. اخلط جيدًا. ضع كريات الدم البيضاء للفئران أو الجرذان في الثلاجة لمدة ٣٠ دقيقة عند درجة حرارة ٦-١٢ درجة مئوية. حضّن خلايا الدم المحيطية البشرية أحادية النواة (PBMC) في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.† 8. ارفع حجم الخلايا الموسومة إلى 2-8 × 10⁷ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ المخفف (1X) أو وسط الاستنبات.* 9. انقل الخلايا الموسومة إلى أنبوب اختبار ذي قاع مستدير (12 × 75 مم)، بحيث لا يتجاوز الحجم المضاف 1.0 مل. ضع أنبوب الجزء الموجب على مغناطيس فصل الخلايا (في الوضع الأفقي) لمدة 6-8 دقائق. - للحصول على حجم أكبر، انقل الخلايا إلى أنبوب اختبار ذي قاع مستدير (17 × 100 مم)، بحيث لا يتجاوز الحجم المضاف 3.0 مل. ضع أنبوب الجزء الموجب على مغناطيس فصل الخلايا (في الوضع الرأسي) لمدة 8 دقائق. 10. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، وباستخدام ماصة باستور زجاجية، اسحب السائل الطافي (الجزء المستنفد) بعناية وضعه في أنبوب جديد. ١١. أخرج أنبوب الجزء الموجب من جهاز فصل الخلايا المغناطيسي، وأضف محلول BD IMag™ المخفف (أو الوسط) بنفس الحجم كما في الخطوة ٩. أعد تعليق الجزء الموجب عن طريق سحب المحلول ودفعه بالماصة ١٠-١٥ مرة، ثم أعده إلى جهاز فصل الخلايا المغناطيسي لمدة ٦-٨ دقائق. - أنبوب ١٧ × ١٠٠ مم: ضعه على جهاز فصل الخلايا المغناطيسي لمدة ٨ دقائق. ١٢. باستخدام ماصة باستور جديدة، اسحب السائل الطافي بحرص واخلطه مع الجزء المستنفد من الخطوة ١١ أعلاه. ١٣. كرر الخطوتين ١١ و١٢. يحتوي الجزء المستنفد المدمج على خلايا خالية من الأجسام المضادة أو الجسيمات المغناطيسية المرتبطة بها. هذه الخلايا جاهزة للتطبيقات اللاحقة، أو يمكن إثراؤها أكثر بالانتقال إلى الخطوة ١٥. ١٤. يمكن إعادة تعليق خلايا الجزء الموجب المتبقية في الأنبوب الأصلي في محلول منظم أو وسط زراعة مناسب للتطبيقات اللاحقة، بما في ذلك قياس التدفق الخلوي. ١٥. لزيادة نقاء الجزء المستنفد المجمع، ضع الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا لمدة ٦-٨ دقائق إضافية. - أنبوب ١٧ × ١٠٠ مم: ضعه على مغناطيس فصل الخلايا لمدة ٨ دقائق. ١٦. اسحب السائل الطافي (الجزء المستنفد النهائي) بعناية وضعه في أنبوب جديد. الخلايا جاهزة للتطبيقات اللاحقة. الانتقاء الإيجابي: ١٧. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة للأجسام المضادة IgG1 المغناطيسية للفأر - DM جيدًا، وأضف ١٠-٥٠ ميكرولتر من الجزيئات لكل ١ × ١٠⁷ خلية إجمالية. ١٨. اخلط جيدًا. ضع كريات الدم البيضاء للفئران أو الجرذان في الثلاجة لمدة ٣٠ دقيقة عند درجة حرارة ٦-١٢ درجة مئوية. حضّن خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC) في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.† 19. ارفع حجم الوسم إلى تركيز 2-8 × 10⁷ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ بتركيز 1X. 20. ضع الأنبوب فورًا على مغناطيس فصل الخلايا وحضّنه لمدة 6-8 دقائق. 21. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص. يُعتبر هذا السائل الطافي الجزء السالب. 22. أخرج الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا، وأضف محلول BD IMag™ بتركيز 1X إلى نفس الحجم كما في الخطوة 19. أعد تعليق الخلايا برفق عن طريق السحب والضخ بالماصة، ثم أعد الأنبوب إلى مغناطيس فصل الخلايا لمدة 2-4 دقائق أخرى. 23. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص. ٢٤. كرر الخطوتين ٢٢ و٢٣. ٢٥. بعد خطوة الغسل الأخيرة، أخرج الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا. أعد تعليق الجزء الموجب في محلول منظم أو وسط استنبات مناسب، وتابع التطبيقات اللاحقة المطلوبة، بما في ذلك قياس التدفق الخلوي. ملاحظات: * عند استنفاد كريات الدم البيضاء للفئران، يؤدي وسط استنبات الأنسجة عادةً إلى زيادة طفيفة في حيوية الخلايا واستعادة الخلايا، مقارنةً بمحلول IMag المنظم، دون التأثير على نقاء الخلايا. نظرًا لاختلاف التطبيقات، يُنصح الباحثون بإجراء مقارنة تجريبية بين أوساط الاستنبات ومحلول IMag المنظم للتأكد من عدم وجود آثار جانبية. † تجنب التلوين غير المحدد بالعمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها.
إشعارات المنتج: تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة بمجموعات الكربوكسيل، تُصنّعها شركة Skold Technology بموجب ترخيص براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. تحذير: يُنتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. Ficoll-Paque هي علامة تجارية مسجلة لشركة Amersham Biosciences Limited. يُرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.