BD، 558005، جزيئات BD IMag™ المغناطيسية المضادة لـ CD25 البشري - DM

الاسم البديل: IL-2R؛ IL2RA؛ IL-2Rα؛ TCGFR؛ مستضد TAC؛ p55
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: الخلايا التائية المنشطة بواسطة الفيتوهيماغلوتينين البشري
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
رقم الورشة: III A769,T153؛ IV A8
RRID: AB_398646
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم خلايا الدم أحادية النواة الطرفية (PBMC) بجزيئات BD IMag™ المغناطيسية المضادة لـ CD25 البشري - DM وفقًا لبروتوكول الوسم والفصل المغناطيسي. ثم يوضع معلق الخلايا الموسوم داخل المجال المغناطيسي لجهاز فصل الخلايا المغناطيسي BD IMag™. تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الكسر الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليسهل سحبها (الكسر السالب). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي لإعادة تعليق الكسر الموجب. تُكرر عملية الفصل مرتين لزيادة نقاء الكسر الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. بعد غسل الكسر الموجب، يمكن تقييمه بشكل إضافي في تطبيقات لاحقة. يسمح صغر حجم جزيئات BD IMag™ بتقييم الكسر الموجب بشكل إضافي في تطبيقات لاحقة، مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم والفصل المغناطيسي: 1. خفف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام ماء مقطر معقم، أو حضّر محلول BD IMag™ بتركيز 1X بإضافة 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA) و2 ملي مول من ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الأسيتيك (EDTA) و0.09% من أزيد الصوديوم إلى محلول ملحي فوسفاتي. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. 2. حضّر الخلايا الليمفاوية أحادية النواة من الدم البشري المعالج بمضادات التخثر، ويفضل استخدام تقنية الطرد المركزي بتدرج الكثافة باستخدام محلول فيكول-باك™. اختياري: إذا رغبت في الحصول على خلايا Treg، فقم بإثراء الخلايا الليمفاوية التائية CD4 باستخدام مجموعة BD IMag™ لإثراء الخلايا الليمفاوية التائية CD4 البشرية - DM (رقم المنتج 557939). 3. عدّ الخلايا، واغسلها بكمية زائدة من محلول BD IMag™ المخفف (1X)، ثم اسحب السائل الطافي بحرص. 4. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD25 المغناطيسية البشرية - DM جيدًا، وأضف 50 ميكرولتر من الجزيئات لكل 10^7 خلية. 5. اخلط جيدًا. حضّن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.† 6. ارفع تركيز جزيئات BD IMag™ إلى 1-8 × 10^7 خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ المخفف (1X)، وضع الأنبوب فورًا على مغناطيس فصل الخلايا. حضّن لمدة 8-10 دقائق. 7. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص. يحتوي هذا السائل الطافي على الجزء السالب. ٨. أزل الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا، وأضف محلول BD IMag™ بتركيز ١X إلى نفس الحجم كما في الخطوة ٦. أعد تعليق الخلايا برفق عن طريق سحب المحلول ودفعه بالماصة، ثم أعد الأنبوب إلى مغناطيس فصل الخلايا لمدة ٢-٤ دقائق أخرى. ٩. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص وتخلص منه. ١٠. كرر الخطوتين ٨ و٩. ١١. بعد خطوة الغسل الأخيرة، أعد تعليق الجزء الموجب في محلول منظم أو وسط مناسب، وتابع التطبيق (التطبيقات) اللاحقة المطلوبة. ملاحظات: * نصائح لتحضير الخلايا بنجاح: - اسحب الدم في أنبوب يحتوي على EDTA. - أزل البلازما الغنية بالصفائح الدموية عن طريق الطرد المركزي مرة واحدة عند ٢٢٠-٢٤٠ × g. - اغسل ٢-٣ مرات بمحلول PBS بعد فصل التدرج الكثافي. - أزل تكتلات الخلايا و/أو الحطام عن طريق تمرير المعلق من خلال مصفاة خلايا من النايلون بمسام ٧٠ ميكرومتر. † تجنب وضع العلامات غير المحددة من خلال العمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها.
إشعارات المنتج: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة وظيفيًا بمجموعة الكربوكسيل، وهي من إنتاج شركة Skold Technology، ومرخصة بموجب براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. يُمكن استخدام هذه المنتجات لقياس مستضدات التنشيط المُعبّر عنها على مجموعات فرعية من الخلايا أحادية النواة، بهدف مراقبة حالة تنظيم المناعة، بموجب واحد أو أكثر من براءات الاختراع التالية: براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5,445,939، 5,656,446، 5,843,689؛ براءة الاختراع الأوروبية رقم 319,543؛ براءة الاختراع الكندية رقم 1,296,622. براءة الاختراع الأسترالية رقم 615,880؛ وبراءة الاختراع اليابانية رقم 2,769,156. فيكول-باك علامة تجارية مسجلة لشركة أميرشام للعلوم الحيوية المحدودة. يرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.