BD، 570002، محلول تلوين الكريات البيضاء BD Pharmingen™ MonoBlock™

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فأر (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على مثبت البروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات الفحص الموصى بها: لمزيد من المعلومات حول محلول تلوين الكريات البيضاء MonoBlock™، يرجى زيارة موقعنا الإلكتروني على الرابط التالي: https://www.bdbiosciences.com/monoblock. بروتوكولات التلوين المناعي الفلوري متعدد الألوان لسطح الخلايا باستخدام محلول تلوين الكريات البيضاء MonoBlock™ من BD Pharmingen™. البروتوكول 1 لتلوين الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMC) أو عينات الدم الكامل المحللة من كريات الدم الحمراء أو عينات الخلايا المحضرة من الأنسجة اللمفاوية. أ. أضف أولاً 10 ميكرولتر من محلول تلوين الكريات البيضاء MonoBlock™ من BD Pharmingen™ إلى كل أنبوب تلوين أو بئر دقيق في الصفيحة، ثم أضف الأجسام المضادة الفلورية أو مزيج الأجسام المضادة، وقم بالخلط بعناية باستخدام جهاز الخلط الدوامي. ب. أضف 100 ميكرولتر تحتوي على كريات بيضاء بشرية أو فئران معلقة (على سبيل المثال، حوالي 10^6 خلية) إلى كل أنبوب أو بئر دقيق، وقم بالخلط بعناية باستخدام جهاز الخلط الدوامي. بدلاً من ذلك: يمكن أولاً إضافة 10 ميكرولتر من محلول تلوين الكريات البيضاء MonoBlock™ من BD Pharmingen™ و100 ميكرولتر من محلول الكريات البيضاء المعلقة إلى كل أنبوب أو بئر دقيق، ثم رجّها جيداً. بعد ذلك، أضف الجسم المضاد الفلوري أو مزيج الأجسام المضادة إلى خليط الخلايا ومحلول الحجب. ج. حضّن الخلايا المعلقة (لمدة 30 دقيقة) في مكان مظلم عند درجة حرارة الغرفة للخلايا البشرية، وعند 4 درجات مئوية لخلايا الفئران. د. بعد التحضين، اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين (FBS) من BD Pharmingen™ [رقم المنتج 554656]. هـ. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول التلوين (FBS) من BD Pharmingen™ لتحليل التدفق الخلوي. البروتوكول 2 لتلوين الدم الكامل البشري أ. أ. أضف أولاً 10 ميكرولتر من محلول تلوين الكريات البيضاء BD Pharmingen™ MonoBlock™ إلى كل أنبوب تلوين، ثم أضف الأجسام المضادة الفلورية أو مزيج الأجسام المضادة، وقم بالخلط جيداً. ب. أضف 100 ميكرولتر من دم بشري كامل. أو بدلاً من ذلك: يمكنك أولاً إضافة 10 ميكرولتر من محلول تلوين الكريات البيضاء BD Pharmingen™ MonoBlock™ و100 ميكرولتر من الدم البشري الكامل المعلق إلى كل أنبوب أو بئر دقيق، وقم بالخلط جيداً. ثم أضف الأجسام المضادة الفلورية أو مزيج الأجسام المضادة إلى خليط الخلايا ومحلول الحجب. ج. حضّن الخلايا المعلقة (لمدة 30 دقيقة) في درجة حرارة الغرفة مع حمايتها من الضوء. د. بعد التحضين، قم بتحليل كريات الدم الحمراء باستخدام محلول التحلل BD Pharm Lyse™ (رقم المنتج 555899) أو محلول التحلل BD FACS™ (رقم المنتج 349202). هـ. اغسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) [رقم المنتج 554656]. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) لتحليل التدفق الخلوي. ملاحظات البروتوكول: • بالنسبة لكريات الدم البيضاء البشرية، يمكن تقليل احتمالية التلوين غير النوعي الناتج عن ارتباط الأجسام المضادة الفلورية بمستقبلات Fc الخلوية عن طريق تحضين الخلايا مسبقًا مع BD Pharmingen™ Human BD Fc Block™ (رقم المنتج 564219/564220). • بالنسبة لكريات الدم البيضاء الفأرية، يمكن تقليل احتمالية التلوين غير النوعي الناتج عن ارتباط الأجسام المضادة الفلورية بمستقبلات Fc الخلوية بنفس الطريقة عن طريق تحضين الخلايا مسبقًا مع BD Pharmingen™ Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 antibody (Mouse BD Fc Block™) [رقم المنتج 554656]. رقم 553141/553142]. • محلول تلوين الكريات البيضاء MonoBlock™ من BD Pharmingen™ متوافق مع محلول التلوين اللامع Brilliant Stain Buffer من BD Horizon™ (رقم المنتج 566349 و563749) ومحلول التلوين اللامع Brilliant Stain Buffer plus من BD Horizon™ (رقم المنتج 566385 و568264). البيانات غير معروضة ولكنها متاحة عند الطلب.
إشعارات المنتج: يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. يرجى مراعاة الاحتياطات التالية: قد يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة في أي مركب فلوري مزدوج؛ لذلك، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعرض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، لإضاءة الغرفة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. CF™ علامة تجارية مسجلة لشركة Biotium, Inc. يُرجى مراجعة http://regdocs.bd.com للاطلاع على بيانات السلامة (SDS). Cy علامة تجارية مسجلة لشركة Global Life Sciences Solutions Germany GmbH أو إحدى الشركات التابعة لها التي تُمارس أعمالها تحت اسم Cytiva. للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents.