BD، 552933، BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Cleved PARP (Asp214)

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
المستضد: PARP البشري المشقوق
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 20 ميكرولتر
RRID: AB_647224
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ R-PE في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط وPE الحر. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات التحليل الموصى بها: يُعد الكامبتوثيسين (مستخلص من شجرة الكامبتوثيكا أكيوميناتا الصينية) مثبطًا قويًا لإنزيم توبويزوميراز 1، وهو جزيء ضروري لتخليق الحمض النووي. وقد ثبت أن الكامبتوثيسين يحفز موت الخلايا المبرمج بطريقة تعتمد على الجرعة في المختبر. يُستخدم الكامبتوثيسين في شركة BD Biosciences Pharmingen كطريقة عامة لتحفيز موت الخلايا المبرمج. المواد: - محلول مخزون من الكامبتوثيسين بتركيز 1.0 ميكرومولار (سيجما؛ رقم المنتج C-9911) في ثنائي ميثيل سلفوكسيد. - خلايا جركات (ATCC TIB-152)، في طور التكاثر، بتركيز 1 × 10^6 خلية/مل. - إما مجموعة تثبيت/نفاذية Cytofix/Cytoperm™ (رقم المنتج 554714) أو محلول Cytofix/Cytoperm™ (رقم المنتج 554722) بالإضافة إلى محلول Perm/Wash™ (رقم المنتج 554723). الخطوات: 1. أضف كامبتوثيسين (بتركيز نهائي 4-6 ملي مولار) لكل 1 × 10^6 خلية جركات متكاثرة. إذا رغبت، حضّر عينة ضابطة من الخلايا غير المعالجة. 2. حضّن الخلايا لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية. 3. اغسل الخلايا (المعالجة بالكامبتوثيسين والعينة الضابطة) مرتين بمحلول فوسفات بارد؛ ثم أعد تعليقها في محلول Cytofix/Cytoperm™ بتركيز 2 × 10^6 خلية/مل. 4. حضّن الخلايا لمدة 20 دقيقة على الجليد. ٥. قم بترسيب الخلايا، ثم اسحب محلول Cytofix/Cytoperm™ وتخلص منه. ٦. اغسل الخلايا مرتين في درجة حرارة الغرفة باستخدام ٠.٥ مل من محلول Perm/Wash™ لكل ١ × ١٠^٦ خلية، وتخلص من السائل الطافي. ٧. أعد تعليق الخلايا في محلول Perm/Wash™ بتركيز ١٠ × ١٠^٦ خلية/مل. ٨. قسّم عينات الاختبار إلى أجزاء متساوية، بحيث يكون حجم كل جزء ١ × ١٠^٦ خلية لكل ١٠٠ ميكرولتر. ٩. أضف ٢٠ ميكرولتر من الجسم المضاد لكل اختبار، واحضنه لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ١٠. اغسل كل اختبار في ١.٠ مل من محلول Perm/Wash™ وتخلص من السائل الطافي. ١١. أعد تعليق كل اختبار في ٠.٥ مل من محلول Perm/Wash™ وحلله باستخدام قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة.