BD، 553399، BD Pharmingen™ FITC Rat Anti-Mouse IgG2a/2b

الاسم البديل: IgG2a (Ighg2a؛ Igh-1)؛ IgG2b (Ighg2b؛ Igh-3؛ gamma2b)
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: فأر LOU، المعروف أيضًا باسم Louvain، LOU/C، LOU/M IgG1، κ
المستضد: الغلوبولين المناعي للفأر المجمع
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره أثناء التطوير)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_394837
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل.
إجراءات الفحص الموصى بها: يمكن استخدام FITC Rat Anti-Mouse IgG2a/2b ككاشف أولي أو ثانوي في التلوين المناعي الفلوري. بروتوكول التلوين المناعي الفلوري للغلوبولين المناعي داخل الخلايا (Ig): 1. تحضير معلق خلوي أحادي وتحديد عدد الخلايا. 2. تعليق الخلايا في محلول التلوين (PBS + 2% FBS + 0.1% أزيد الصوديوم) بتركيز 2 × 10^7 خلية/مل، ونقلها إلى صفائح ميكروية ذات قاع على شكل حرف U بمقدار 50 ميكرولتر/بئر للتلوين المناعي الفلوري. ملاحظة: يُعد محلول التلوين (FBS) (رقم المنتج 554656) فعالاً للاستخدام كمحلول تلوين في هذا البروتوكول. 3. قم بحجب مستقبلات Fcγ بإضافة 0.2 ميكروغرام من الأجسام المضادة النقية للفأر CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) (رقم المنتج 553141/553142) في 50 ميكرولتر من محلول التلوين إلى كل بئر. 4. حضّن لمدة 5 دقائق على الجليد. 5. أضف 200 ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر وأعد تعليق الخلايا. قم بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 5 دقائق ثم اسحب السائل الطافي. 6. قم بحجب الغلوبولين المناعي السطحي باستخدام الأجسام المضادة النقية للفأر IgG2a/2b (رقم المنتج 553397) بإضافة 1.0 ميكروغرام لكل عينة في 50 ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر. ملاحظة: قد تتصبغ الواسمات السطحية خلال هذه الخطوة كما هو موضح في "التلوين المناعي الفلوري لخلايا الدم البيضاء للفئران والجرذان لقياس التدفق الخلوي" ضمن بروتوكولات "التدفق متعدد الألوان" على موقعنا الإلكتروني: http://www.bdbiosciences.com/us/s/resources. 7. حضّن لمدة 15 دقيقة على الجليد. 8. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة 5. 9. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول التلوين داخل الخلايا BD Cytofix/Cytoperm™ (مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™، رقم المنتج 554714) لكل بئر. 10. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 11. اغسل مرتين باستخدام 200 ميكرولتر من محلول Perm/Wash Buffer بتركيز 1x (المرفق في مجموعة BD Cytofix/Cytoperm) لكل بئر. قم بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 5 دقائق، ثم اسحب السائل الطافي بين كل غسلة. 12. قم بتلوين الغلوبولين المناعي داخل الخلايا بإضافة ≤ 1 ميكروغرام من الجسم المضاد أحادي النسيلة R2-40 المرتبط بـ FITC في 50 ميكرولتر من محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× لكل بئر. ملاحظة: يمكن إضافة أجسام مضادة أخرى موصى بها لتلوين المؤشرات داخل الخلايا خلال هذه الخطوة كما هو موضح في الخطوة 12. 13. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 14. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة 11. 15. أعد تعليق العينات وانقلها في 100 ميكرولتر من محلول التلوين إلى أنابيب مناسبة للتحليل باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. أكمل حجم كل أنبوب إلى 400 ميكرولتر باستخدام محلول التلوين. 16. حلل العينات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources.