BD، 553437، BD Pharmingen™ FITC Rat Anti-Mouse IgM

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG2a، κ للفئران
المستضد: غير مُبلغ عنه
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره أثناء التطوير)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_394857
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراء الفحص الموصى به: التلوين المناعي الفلوري للغلوبولين المناعي IgM داخل الخلايا/السيتوبلازمية في الفئران: 1. تحضير معلق خلوي أحادي وتحديد عدد الخلايا. 2. تعليق الخلايا بتركيز 2×10⁷ خلية/مل في محلول التلوين BD Pharmingen™ (رقم المنتج 554656) [أو بدلاً من ذلك، تحضير محلول تلوين مكون من محلول ملحي فوسفاتي + 2% مصل بقري جنيني + 0.1% أزيد الصوديوم] ونقلها إلى صفائح ميكروية ذات قاع على شكل حرف U بمقدار 50 ميكرولتر/بئر للتلوين المناعي الفلوري. 3. حجب مستقبلات Fcγ بإضافة 0.2 ميكروغرام من BD Fc Block™ (رقم المنتج 553141) في 50 ميكرولتر من محلول التلوين إلى كل بئر. 4. حضانة لمدة 5 دقائق على الجليد. ٥. أضف ٢٠٠ ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر، وأعد تعليق الخلايا. قم بالطرد المركزي عند ٢٥٠×g لمدة ٥ دقائق، ثم تخلص من السائل الطافي. ٦. قم بحجب IgM الموجود على سطح الخلية باستخدام IgM الفأري النقي (النسيلة II/41) (رقم المنتج ٥٥٣٤٣٥) بإضافة ١.٠ ميكروغرام لكل عينة في ٥٠ ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر. ملاحظة: قد تتلون الواسمات السطحية خلال هذه الخطوة كما هو موضح في "التلوين المناعي الفلوري لكريات الدم البيضاء للفئران والجرذان لقياس التدفق الخلوي" في قسم البروتوكولات الفنية على موقعنا الإلكتروني على الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Mouse_and_Rat_Leukocytes.shtml ٧. حضّن لمدة ١٥ دقيقة على الجليد. ٨. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة ٥. ٩. أعد تعليق الخلايا في ١٠٠ ميكرولتر من محلول BD Cytofix/Cytoperm™ (رقم المنتج ٥٥٤٧١٤) لكل بئر. ١٠. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ١١. اغسل مرتين باستخدام ٢٠٠ ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash™ المخفف (رقم المنتج ٥٥٤٧١٤) لكل بئر. افصل الخلايا بالطرد المركزي عند ٢٥٠×g لمدة ٥ دقائق، ثم اسحب السائل الطافي بين كل غسلة. ١٢. صبغ الخلايا للكشف عن IgM داخل الخلايا بإضافة ≤ ١ ميكروغرام من جسم مضاد FITC rat anti-mouse IgM (clone II/41) في ٥٠ ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash™ المخفف لكل بئر. ملاحظة: يمكن إضافة أجسام مضادة أخرى موصى بها لتلوين المؤشرات داخل الخلايا خلال هذه الخطوة كما هو موضح في الخطوة 12. 13. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 14. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة 11. 15. أعد تعليق العينات وانقلها في 100 ميكرولتر من محلول التلوين إلى أنابيب مناسبة للتحليل باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. أكمل حجم كل أنبوب إلى 400 ميكرولتر باستخدام محلول التلوين. 16. حلل العينات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي.