BD، 554652، خلايا التحكم الإيجابي لسيتوكين الفأر MiCK-1 من BD Pharmingen™

التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 5 × 10^6 خلية/مل
RRID: AB_2869002
محلول التخزين: مجمد في مصل بقري جنيني و10% من ثنائي ميثيل سلفوكسيد.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ المنتج في درجة حرارة -80 درجة مئوية قبل الاستخدام أو للتخزين طويل الأمد للمحاليل المركزة. يُذاب المنتج بسرعة ويُرجّ جيدًا قبل الاستخدام. تجنب تكرار تجميد المنتج وإذابته. لا يحتوي هذا المستحضر على مواد حافظة، لذا يجب التعامل معه في ظروف معقمة. عند الاستلام، يُحفظ معلق الخلايا في درجة حرارة -80 درجة مئوية. بدلاً من ذلك، يمكن إذابة معلق الخلايا المجمد ورجّ القارورة المغلقة بسرعة لضمان استخلاص جميع محتوياتها. بعد إعادة تعليق الخلايا جيدًا باستخدام ماصة، يمكن إعادة تجميد حصص "الاستخدام الفردي" وتخزينها (-80 درجة مئوية) في أنابيب دقيقة من البولي بروبيلين لاستخدامها لاحقًا.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات الفحص الموصى بها - عينة التحكم الإيجابية MiCK-1: تهدف معلقات الخلايا إلى توفير خلايا تحتوي على تراكمات داخلية من IL-2 وTNF وIFN-γ، والتي يمكن الكشف عنها باستخدام التلوين المناعي الفلوري للسيتوكينات داخل الخلايا وقياس التدفق الخلوي. وبذلك، تُستخدم هذه الخلايا كضوابط إيجابية للتحقق من فعالية الأجسام المضادة الفلورية للسيتوكينات وإجراء التلوين نفسه (مثل النفاذية). للتلوين، يجب أولاً إذابة عينة الخلايا المجمدة بسرعة وبحرص. بعد ذلك، يمكن نقل أجزاء من معلق الخلايا إلى حُفر دقيقة أو أنابيب. يجب غسل الخلايا المثبتة وغير المنفذة مرتين بمحلول التلوين لإزالة ثنائي ميثيل سلفوكسيد. يُوصى بتلوين الخلايا المغسولة أولاً باستخدام مُقترن فلوري من RM4-5 (مثلاً، رقم المنتج 553046، أو 553049، أو 553050، أو 553051)، وهو جسم مضاد معروف بقدرته على الارتباط بجزيئات CD4 الموجودة على سطح خلايا CD4+ T المثبتة في الفئران. بعد ذلك، يجب حضانة الخلايا لمدة 10 دقائق في محلول النفاذية/الغسل، ثم غسلها. تُصبغ الخلايا بعد ذلك بمركب فلوري من أحد هذه المركبات: JES6-5H4 (جسم مضاد للفئران IL-2 من الفئران؛ رقم المنتج 554427، أو 554428، أو 554429)، أو MP6-XT22 (جسم مضاد للفئران TNF من الفئران؛ رقم المنتج 554418، أو 554419، أو 554420)، أو XMG1.2 (جسم مضاد للفئران IFN-γ من الفئران؛ رقم المنتج 554411، أو 554412، أو 554413). ملاحظة: يمكن إثبات تلوين خلايا MiCK-1 بالأجسام المضادة النوعية للسيتوكينات عن طريق تحضين الجسم المضاد النوعي للسيتوكين مع السيتوكين المؤتلف مسبقًا، أو عن طريق معالجة خلايا MiCK-1 مسبقًا بجسم مضاد حاجب غير موسوم. تمثل النسبة المئوية للخلايا الإيجابية للسيتوكينات الموضحة نسبة المنتج. ونظرًا لإجراء تنشيط الخلايا، قد تتلون نسبة صغيرة من الخلايا بشكل غير نوعي (أي، لا يتم حجبها بواسطة الأجسام المضادة أو الروابط غير الموسومة).
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تجنب ملامسة الجلد والعينين. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.